動物細胞工程—單克隆抗體制備復習策略-資料下載頁
2025-09-11 20:36本頁面
【正文】 產(chǎn)生特異性抗體的功能。 ◆ 利用 無限增殖的特性。 ◆ 利用 技術(shù)將兩種細胞融合獲得 雜交瘤細胞。 ◆ 利用 技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細胞。 B淋巴細胞骨髓瘤細胞 動物細胞融合 動物細胞培養(yǎng) 單克隆抗體的制備 單克隆抗體的應(yīng)用 （ 1）融合后的雜種細胞容易成活嗎？ （ 2）制備單克隆抗體的過程應(yīng)用了哪些細胞工程技術(shù)手段？ （ 3） 在整個制備的過程中要經(jīng)過幾次篩選？ 思考 ： 細胞的同源性越近，融合形成的雜種細胞越易成活 細胞融合技術(shù)、細胞培養(yǎng)技術(shù) Ⅰ .篩選得到雜交瘤細胞， Ⅱ .篩選先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有 一個雜交 瘤細胞 下培養(yǎng)篩選出特異抗體的細胞群 ⑷ 怎樣篩選出 B淋巴細胞和骨髓瘤細胞間融合所形成的能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞？ 用抗體檢測和克隆化培養(yǎng)得到能分泌所需抗體的雜種細胞 —— 專一抗體檢測 。 ？ ①將雜交瘤細胞在 體外大規(guī)模培養(yǎng) ，從細胞培養(yǎng)液中就能提取大量的單克隆抗體； ②把雜交瘤細胞注射到 小鼠腹腔內(nèi)增殖 ，再從小鼠腹腔中提取單克隆抗體。 ⑸ 如何進行雜交瘤細胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？ 融合后的細胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細胞就是雜交瘤細胞。但這些雜交瘤細胞并非都是能分泌所需抗體的細胞，通常用 “ 有限稀釋法 ” 來選擇。 將雜交瘤細胞稀釋，用多孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細胞不超過一個，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。 陽性孔中的細胞還不能保證是來自單個細胞，挑選陽性孔的細胞繼續(xù)進行有限稀釋，一般需進行 3～ 4次，直至確信每個孔中增殖的細胞為單克隆細胞。該過程即為雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。 第二次篩選的原理和方法： 在實際免疫過程中，由于采用連續(xù)注射抗原的方法，且一種抗原決定簇刺激機體形成相對應(yīng)的一種效應(yīng) B淋巴細胞，因此，從小鼠脾臟中取出的效應(yīng) B淋巴細胞的特異性是不同的，經(jīng) HAT培養(yǎng)液篩選的雜交瘤細胞特異性也存在差異，所以必須從雜交瘤細胞群中篩選出能產(chǎn)生針對某一預定抗原快定簇的特異性雜交瘤細胞。 通常采用有限稀釋克隆細胞的方法，將雜交瘤細胞多倍稀釋，接種在多孔的細胞培養(yǎng)板上，使每一孔含一個或幾個雜交瘤細胞（理論上 30%的孔中細胞數(shù)為 0時，才能保證有些孔中是單個細胞），再由這些單細胞克隆生長，最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養(yǎng)。 實驗過程要解決的問題： 如何使機體產(chǎn)生能分泌抗體的 B淋巴細胞？ 從實驗動物的什么部位提取 B淋巴細胞？ 機體內(nèi)什么細胞能無限增殖？ 用什么方法誘導細胞融合？ 雜交瘤細胞有幾種類型？制備單克隆抗體需要哪種類型？ 如何篩選雜交瘤細胞？ 根據(jù)下面植物體細胞雜交技術(shù)流程圖回答相關(guān)問題： （ 1）若運用傳統(tǒng)有性雜交（即用番茄、馬鈴薯雜交）能否得到雜種植株？為什么？ _________________________________ ____________________________________________________. 不能，不同種的植物存在生殖隔離 （ 2）在利用雜種細胞培育雜種植株的過程中，運用的技術(shù)手段是________________，依據(jù)的原理是 _________________,其中過程②稱為 ____________________，與過程③密切相關(guān)的具有單層膜結(jié)構(gòu)的細胞器為 __________________，過程④相當于 ______________，過程⑤ 涉及到的分裂方式為 ____________。 脫分化 細胞的全能性 原生質(zhì)體融合 高爾基體 植物組織培養(yǎng) 有絲分裂 （ 3）已知番茄、馬鈴薯分別是二倍體和四倍體，則“番茄 馬鈴薯”屬于 _______倍體。 （ 4）隨“神六”太空旅行的種苗中，最受關(guān)注的是采油樹的試管苗。柴油樹種子中含有的柴油是植物細胞的代謝產(chǎn)物，可用植物組織培養(yǎng)來實現(xiàn)柴油的工業(yè)化生產(chǎn)。若利用此技術(shù)，將采油樹細胞培養(yǎng)到 ________過程即可（填字母編號） 6 e （ 5）若培育抗蟲棉，將抗蟲基因通過適當?shù)耐緩綄朊藁ㄊ芫?，然后進行組織培養(yǎng)，該過程相當于 __________（填字母編號） （ 6）人工種子又稱合成種子或種子類似物，他是 20世紀生物技術(shù)在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用之一。由發(fā)育到 ________過程（填字母序號）的結(jié)構(gòu)包裹上 __________可制備人工種子。 ④⑤ f 人工種皮
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