qpcr實(shí)驗(yàn)操作流程-資料下載頁
2024-09-15 11:29本頁面
【正文】 積 15ul計(jì)算好實(shí)驗(yàn)中需用多少份體系，則按具體量配置。體系分裝會(huì)有損失?？偟捏w系配好后，在振蕩器中振蕩均勻或用槍吸打均勻，然后15ul每管分裝至8連管中。3．cDNA用滅菌純水稀釋適當(dāng)?shù)臐舛?，一般?:20稀釋，如遇到基因表達(dá)低的樣品，則適當(dāng)降低稀釋比例至1:10或1:5。cDNA按一定順序排好后，即可加至剛配好的反應(yīng)體系中。加樣完畢，蓋好八連管蓋，并在八連管蓋最上沿的邊上標(biāo)記好112的順序（不可將標(biāo)記寫在反應(yīng)管的蓋子上，八連管蓋避免裸手觸摸中間透明的熒光采集區(qū)域，且保證每孔均蓋緊，否則影響重復(fù)性或可能出現(xiàn)熔解曲線峰漂移。）4．把各排八連管放在掌上離心機(jī)上離心數(shù)秒。五．上機(jī)： 先開電腦，進(jìn)入Windows 界面。接著打開PCR儀電源開關(guān)。 打開7500軟件，選擇“新建”，在“Template”下拉菜單中選擇“60”或“65”（普通基因檢測為“60”，MicroRNA檢測為“65”） 打開樣品架，放入八連管，關(guān)上樣品架，并在軟件上選擇已放反應(yīng)管的孔位，剔除無反應(yīng)管的孔位。 點(diǎn)擊File菜單中Save，輸入要保存結(jié)果的文件名，命名為日期上機(jī)時(shí)間客戶名字簡寫，如1008301008WL表示8月30日10點(diǎn)08分魏立的實(shí)驗(yàn)。 點(diǎn)擊Start鍵，開始運(yùn)行程序。 程序運(yùn)行完畢后，取出樣品架上的八連管，按順序關(guān)閉ABI PRISM 7500 SDS 軟件、PCR儀電源開關(guān)。 在7500軟件上標(biāo)記好每個(gè)反應(yīng)孔的樣品名稱及檢測基因的名稱，分類保存好結(jié)果文件。反應(yīng)完成后，八連管應(yīng)裝到封口袋中，袋子上標(biāo)記好文件名，客戶的名字。（同一個(gè)客戶的三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，則只需保存其中一次重復(fù)的反應(yīng)管即可，其余可丟棄）6
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