重組體的篩選與鑒定-資料下載頁
2025-08-16 02:42本頁面
【正文】 ?電轉(zhuǎn)移 ?常用的膜：硝酸纖維素膜、 PVDF膜、中性尼龍膜等。 Western裝置 免疫學(xué)檢測 —— 原理與 ELISA相同 待測蛋白 硝酸纖 維素膜 一抗 二抗 辣根過氧 化物酶 底物 產(chǎn)物 (顯色 ) PAGE膠 待測蛋白 辣根過氧化物酶： HRPO 第六節(jié)、轉(zhuǎn)譯篩選法 一、無細(xì)胞翻譯系統(tǒng) 指保留蛋白質(zhì)生物合成能力的細(xì)胞抽取物 。 ?用于蛋白質(zhì)的生物合成研究的體外翻譯系統(tǒng)主要有： *大腸桿菌無細(xì)胞翻譯系統(tǒng) *兔網(wǎng)織紅細(xì)胞無細(xì)胞翻譯系統(tǒng) *麥胚無細(xì)胞翻譯系統(tǒng) 二、轉(zhuǎn)譯篩選 雜交抑制轉(zhuǎn)譯法 適用于篩選那些高豐度的 mRNA 雜交釋放轉(zhuǎn)譯法 可用于檢出低豐度 mRNA 雜交抑制轉(zhuǎn)譯法 原理 ： mRNA一旦與 DNA雜交成 RNADNA雙鏈后就不能被核糖體翻譯出蛋白質(zhì)（轉(zhuǎn)譯被抑制）。 單鏈 mRNA 核糖體 小亞基 核糖體 大亞基 能翻譯 mRNA DNA 核糖體 小亞基 核糖體 大亞基 不能翻譯 過程 雜交釋放轉(zhuǎn)譯法 原理： 在高甲酰胺溶液中載體上克隆的 cDNA與它的 mRNA雜交吸附，然后洗脫，釋放出與它對應(yīng)的 mRNA，進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄。研究其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的性質(zhì)是否是預(yù)期的基因產(chǎn)物（如分子量、免疫原性等）。 過程 硝酸纖 維素濾膜 載體和插 入的 cDNA 總 mRNA cDNA基因的 mRNA 雜交 洗脫 cDNA基因的 mRNA 體外翻譯 cDNA編碼的蛋白 電泳 凝膠放射自顯影 cDNA編 碼的蛋白 硝酸纖 維素濾膜 載體和插 入的 cDNA 硝酸纖 維素濾膜 載體和插 入的 cDNA 收集 35S標(biāo)記的氨基酸 三、 DNA蛋白質(zhì)相互作用篩選法 專門設(shè)計檢測能同 DNA特異結(jié)合的蛋白質(zhì)因子。 待測蛋白質(zhì) 硝 酸 纖 維 素 濾 膜 能與蛋白質(zhì)結(jié) 合的 DNA序列 放射性標(biāo)記 待測蛋白質(zhì) 硝 酸 纖 維 素 濾 膜 能與蛋白質(zhì)結(jié) 合的 DNA序列 放射性標(biāo)記 一般克隆與篩選策略
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