【正文】 析二、名詞解釋：★原生質體融合(protoplast fusion)：也稱體細胞雜交（somatic hybridization），就是使分離下來的不同親本的原生質體，在離體條件下通過誘導發(fā)生的質膜融合進而細胞核融合，像性細胞受精作用那樣互相融合成一體的現(xiàn)象。原生質體（protoplast）：是指除去了細胞壁后的裸露的植物細胞。三、問答題：簡述原生質體作為遺傳操作和生理生化研究的材料有何特點？ （1）沒有細胞壁，有利于體細胞融合、體細胞雜交、基因轉移和單細胞培養(yǎng)。（2）原生質體能比較容易攝取外來的遺傳物質。酶法分離原生質體時使用的酶的種類有哪些？ （1）纖維素酶類 （2）半纖維素酶類 （3）果膠酶類 （4）崩潰酶簡述一步酶法分離原生質體的方法一步分離法：把一定量纖維素酶和果膠酶組成混合酶液，對材料進行一次性處理而分離出原生質體。處理溫度2530186。C，處理的時間根據(jù)材料及酶濃度的不同而不同，可為224h。如何純化分離的植物原生質體并鑒定其活力？(1) 原生質體的純化①沉降法：應用原生質體的比重大于溶液的性質而使原生質體沉于底部。②漂浮法：應用滲透劑含量較高的洗滌液使原生質體漂浮于液體表面。③梯度離心法：選兩種不同滲透濃度的溶液，其中一種溶液密度大于原生質體的密度，另一種溶液小于原生質體的密度。 (2) 原生質體活力的測定①形態(tài)識別：形態(tài)上完整，呈圓形，含有飽滿的細胞質，顏色鮮艷的即為存活的原生質體。②染色識別1）%酚番紅或Evans藍染色：有活力的不被染色，死亡的被染上色。2）雙醋酸鹽熒光素(FDA)染色法：在熒光顯微鏡下有熒光的即為有活性的原生質體?！镌|體培養(yǎng)的方法有哪些？ （1）液體淺層培養(yǎng) （2）平板法培養(yǎng) （3）微懸滴法培養(yǎng) （4）雙層培養(yǎng)法 （5）飼養(yǎng)層培養(yǎng)★原生質體融合有哪幾種主要方法？（1）化學法誘導融合；（2）高PH高鈣離子法；（3）PEG法；（4）PEG結合高鈣高pH誘導法；（3）電融合技術原生質體培養(yǎng)的意義★酶的種類及特點。l 纖維素酶類（Cellulase）：纖維素酶是從綠色木霉中提取的一種復合酶制劑 ，可降解纖維素，得到裸露的原生質體 。l 果膠酶類（Pectolyase）：果膠酶是從根霉中提取的，使細胞間的果膠質降解，把細胞從組織內分離出來 。l 半纖維素酶類（Hemicellulase）：降解半纖維素為單糖或單糖衍生物。 l 崩潰酶：一種粗制酶。 l 蝸牛酶：主要用于分離小孢子（花粉母細胞和四分體細胞）的原生質體 第8章 《植物離體快繁和人工種子》復習題及參考答案一、填空：原球莖發(fā)生型是蘭科植物特有的一種快繁方式。離體快繁商業(yè)化生產應注意的問題是快繁苗的污染、玻璃化、褐化和黃化。根據(jù)繁殖體的類型人工種子可分為兩類：一類是體細胞胚人工種子；另一類是非體細胞胚人工種子。人工種子包裹方法離子交換法；干燥法；冷卻法。二、名詞解釋：離體繁殖（in vitro propagation)：微型繁殖（micropropagation)，指利用植物組織培養(yǎng)技術對外植體進行離體培養(yǎng)，使其在短期內獲得遺傳性一致的大量再生植株的方法。是工廠化育苗的技術基礎?！锶斯しN子(artificial seeds)：亦稱體細胞種子，任何一種經人工種皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖體均可稱之為人工種子。三、問答題：植物快繁的器官再生主要類型？短枝發(fā)生型；叢生芽發(fā)生型；不定芽發(fā)生型；胚狀體發(fā)生型；原球莖發(fā)生型植物快繁的程序。（1）無菌（或初代）培養(yǎng)的建立（2）繁殖體增殖（3）芽苗生根（4）小植株的移栽馴化人工種子的優(yōu)點。（1）使自然條件下不易結實或種子昂貴的材料能快速繁殖和保存；（2）繁殖速度快；（3）為基因工程技術應用于生產提供橋梁；（4）固定雜種優(yōu)勢；（5）提高植物抗逆性；（6）取代天然種子，節(jié)約糧食。第9章《植物無病毒苗木培育》復習題及參考答案一、填空：目前培育無病毒苗最廣泛和最重要的一個途徑是莖尖培養(yǎng)脫毒?！锿ㄟ^莖尖培養(yǎng)脫毒時，常以帶13個幼葉原基的莖尖（約 —）作外植體較合適。無病毒苗的保存分：隔離保存和長期保存兩種方法。二、名詞解釋：無病毒苗（virusfree plantlets）：是指不含該種植物的主要危害病毒，即經檢測主要病毒在植物內的存在表現(xiàn)陰性反應的苗木。 微尖嫁接技術（micrografting shoottip）：指在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)實生砧木，嫁接無病毒莖尖以培養(yǎng)脫毒苗的技術。指示植物法(indicator plant method)：利用病毒在其他植物（指示植物或鑒別寄主）上產生特定癥狀（枯斑和空斑）作為鑒別病毒存在與否和種類的方法。三、問答題：★植物脫毒的主要方法有哪些？其主要原理是什么？（1）莖尖培養(yǎng)脫毒：病毒在植物體內的分布并不均勻，越靠近莖端的病毒的感染深度越低，生長點則幾乎不含或含病毒很少（2）愈傷組織培養(yǎng)脫毒法：通過植物的器官和組織的培養(yǎng)，脫分化誘導產生愈傷組織，然后從愈傷組織再分化產生芽，長成小植株，可以得到無病毒苗（3）珠心胚培養(yǎng)脫毒：病毒一般不通過種子傳播，由珠心細胞發(fā)育成的胚再生的植株是無毒的，并具有與母本相同的遺傳特性。（4）莖尖微體嫁接：將實生苗砧木在人工培養(yǎng)基上種植培育，—，在砧木上進行試管微體嫁接，以獲得無病毒幼苗。（5）熱處理脫毒：一些病毒對熱不穩(wěn)定，在高于常溫的溫度下（3540℃），即鈍化失活（6）化學處理脫毒：抑制或殺死病毒說明微尖嫁接技術脫毒的程序微尖嫁接技術指在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)實生砧木，嫁接無病毒莖尖以培養(yǎng)脫毒苗的技術。主要程序：無菌砧木培養(yǎng)—莖尖準備—嫁接—嫁接苗培養(yǎng)—移栽?！锬壳拌b定脫毒苗的方法有哪些？各有何特點？（1）指示植物法：將一些對病毒反應敏感、癥狀特征顯著的植物作為指示植物（又稱鑒別寄主），利用病毒在其他植物上產生的枯斑作為鑒別病毒種類的方法。這種方法條件簡單，操作方便，為一種經濟而有效的鑒定方法（2）抗血清鑒定法：用已知抗血清鑒定未知病毒的種類。這種方法特異性高，測定速度快。所以抗血清法成為植物病毒鑒定中最有用的方法之一。 （3）電鏡檢查法：可以直接觀察病毒，檢查出有無病毒存在，了解病毒顆粒的大小、形狀和結構，又可以鑒定病毒的種類。優(yōu)點是方法先進、靈敏度高、能在植物粗提取液中定量測定病毒。但需一定的設備和技術。簡述植物無病毒原種長期保存的方法。（1）低溫保存：將莖尖或小植株接種到培養(yǎng)基上，置低溫（19℃）、低光照下保存。材料生長極緩慢，只需半年或一年更換一次培養(yǎng)基，又叫最小生長法。（2）冷凍保存（又叫超低溫保存），一般以液氮（196℃）保存植物材料。在如此低溫下，新陳代謝活動基本停止，處于“生機停頓”狀態(tài)植物脫毒的意義1）、能夠有效地保持優(yōu)良品種的特性2）、快速繁殖品種，使優(yōu)良品種迅速應用3）、生產無病毒種苗，防止品種退化4）、節(jié)約耕地，提高農產品的商品率5）、便于運輸?shù)?0章 《種質保存》復習題及參考答案一、填空：種質保存分為 原生境保存 和 非原生境保存 兩種方式；★超低溫保存冷凍處理的方法包括： 快凍法、慢凍法 、預凍法和 干凍法 四種方法；預凍法即分步冷凍法分為： 兩步冷凍法 和 逐級冷凍法 兩種方式；★冷凍保存后細胞和器官最基本的活力檢測方法是 再培養(yǎng)法 。種質資源離體保存方法有兩種：限制生長保存和超低溫保存。二、名詞解釋：種質保存（germplasm conservation）：是利用天然或人工創(chuàng)造的適宜環(huán)境，保存種質資源，使個體中所含有的遺傳物質保持其完整性，有高的活力，能通過繁殖將其遺傳特性傳遞下去。超低溫保存（cryopreservation ）：也叫冷凍保存（freeze preservation ），是指將植物的離體材料包括莖尖（芽）、分生組織、胚胎、花粉、愈傷組織、懸浮細胞、原生質體等，經過一定的方法處理后在超低溫（196℃液氮）條件下進行保存的方法。種質資源的離體保存：是指對離體培養(yǎng)的小植株、器官、組織、細胞或原生質等材料，采用限制、延緩或停止其生長的處理使之保存，在需要時可重新恢復其生長，并再生植株的方法。三、問答題低溫保存和超低溫保存技術冷凍的方法 （1）快速冷凍法 （2）冷凍前的預處理 （3）解凍方法 （4）重新培養(yǎng)冷凍保存的應用前景1）、長期保存種質的遺傳穩(wěn)定性。2）、長期保存去病毒的種質。3）、保持稀有珍貴及瀕危植物的種質資源。4）、保持不穩(wěn)定性的培養(yǎng)物，如單倍體。5）、保持培養(yǎng)細胞形態(tài)發(fā)生的能力。6）、防止種質衰老。7）、延長花粉壽命，解決不同開花期和異地植物雜交上的困難。8）、冷凍解凍過程可篩選抗逆新品種。9）、便于國際間的種質交換。