生物材料(衛(wèi)檢)-資料下載頁(yè)
2025-08-05 10:01本頁(yè)面
【正文】 (3)比色定量 580nm 尿空白管作參比，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量 說(shuō)明：(1)尿樣應(yīng)采集班末或班后尿，采樣前要詢問(wèn)受檢者是否服用藥物 (2)重氮化反應(yīng)，NaNO2過(guò)量才能完全重氮化 但NaNO2對(duì)偶和顯色有干擾 (3)重氮化反應(yīng)應(yīng)在盡量低溫條件下進(jìn)行，而偶合反應(yīng)在60176。為宜，水浴加 熱前，偶合劑加入后充分混合 （二）HPLC法 1樣品處理：(1)水解，同上法 (2)萃取 ①先在酸性條件下用乙酸乙酯萃取 ②再在中性條件下用乙酸乙酯萃取對(duì)氨基酚(兩次萃取除雜質(zhì))說(shuō)明：P96 用磷酸氫二鉀（弱堿）調(diào)節(jié)PH值第二節(jié)：硝基苯一、代謝產(chǎn)物和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo) 吸收：很容易從皮膚吸收，主要從呼吸道吸收。代謝：代謝產(chǎn)物有硝基酚和氨基酚還有少量苯胺，對(duì)硝基酚13—16%，對(duì)氨基酚10%。排出：①代謝產(chǎn)物與葡萄糖醛酸和硫酸結(jié)合，隨尿排出。②少量以原形級(jí)微量本案隨呼出氣排出。生物監(jiān)測(cè)指標(biāo) 尿中對(duì)硝基酚（特異性）二、尿中對(duì)硝基苯酚的測(cè)定 P98（一）、鄰甲酚分光光度法 原理：①尿樣經(jīng)酸水解。②苯取 先用混合有機(jī)溶劑取，再用氫氧化銨溶液反萃取。③還原 用三氯化鈦將其還原成對(duì)氨基酚。④鄰甲酚顯色 藍(lán)色600nm比色定量。樣品處理：1）水解 鹽酸酸化沸水浴1h。2）萃取 先用異戊醇—石油醚—乙醚萃取，再用3mol/L氯水反萃取。顯色測(cè)定 ①先加鄰甲酚，再加三氯化鈦溶液。②立即振搖至黃色沉淀變成淡黃色沉淀，過(guò)濾③30min后600nm測(cè)定吸光度。（二）HPLC法樣品處理 1）水解同上法。2）萃取 二氯甲烷萃取3次定容至20ml。說(shuō)明 1）尿液采集后，盡快加鹽酸，10o c以下運(yùn)輸。2）流動(dòng)相配比和流速可根據(jù)儀器性能調(diào)整。第三節(jié)：三硝基甲苯 TNT 2,4,6—三硝基甲苯 1）經(jīng)氧化還原化合等途徑代謝。2）以還原代謝途徑為主，主要代謝物4—硝基—2，6—二硝基甲苯。3）各種代謝產(chǎn)物以結(jié)合態(tài)隨尿排出。 4—A—A樣品處理：1）鹽酸酸化沸水浴1h。2）萃取代謝 加固體碳酸氫鈉調(diào)PH7—8用甲苯萃取（尿樣1ml，甲苯1ml）： 1）檢測(cè)器 ECD 2）固定相：OV—17（固定液） 3）柱溫 220℃ 程序升溫效果更好 200℃（）10℃/min 220℃ 5℃/min 240℃ 第六章：鹵代烴化合物及其代謝產(chǎn)物的測(cè)定第一節(jié)：氯乙烯一、代謝 1）經(jīng)呼吸道吸入大部分以原形從呼吸道中排出 2）少部分在肝臟轉(zhuǎn)化①先轉(zhuǎn)化成一種致癌活性物環(huán)氧氯乙烯 ②在甘光甘肽或半胱氨酸參與下最終代謝物為亞硫基二乙酸（硫代二乙酸） 3）少量的氯乙烯以原形隨尿液排出 二、生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)：尿中硫代氯乙酸，呼出氣中氯乙烯很少作為檢測(cè)指標(biāo) 三．GC法測(cè)定尿中硫代氯乙酸 （一）原理 ①尿樣經(jīng)酯化后水蒸氣蒸至近干 ②甲醇—乙醚溶解其中的硫代二乙酸 ③酯化 重氮甲烷酯化 ④火焰光度計(jì)監(jiān)測(cè) （二）樣品處理： 1） 2）瓷蒸發(fā)皿水蒸氣蒸干至結(jié)晶狀態(tài) 3）甲醇—乙醚溶解殘?jiān)?，上層夜轉(zhuǎn)入離心管混水浴濃縮至1ml （三）酯化 ：（通風(fēng)柜中進(jìn)行）亞硝基甲脲與氫氧化鈉溶液反應(yīng)生成重氮甲烷氣體導(dǎo)入樣液酯化溶液至淺黃色為止，在放置10min，最終用甲醇定容。 第三節(jié)：三氯乙烯和四氯乙烯 一、代謝與生物監(jiān)測(cè)指標(biāo) （一）代謝 1）吸入約20%以原形從肺中排出 2）有50—60%儲(chǔ)存在體內(nèi)（蓄積性） 3）大部分在肝中轉(zhuǎn)化成三氯乙酸和三氯乙醇還有少量一氯乙酸 4）脫離接觸50h后，尿中三氯乙酸濃度達(dá)到最高。 ①約98%經(jīng)肺排出 ②約2%代謝轉(zhuǎn)化成三氯乙酸 (二)生物監(jiān)測(cè)指標(biāo) ：①尿中三氯乙酸和三氯乙醇聯(lián)合作為三氯乙烯接觸的生物監(jiān)測(cè)指標(biāo) ②呼出空氣中三氯乙烯特異性指標(biāo)：①尿中三氯乙酸 非特異性 ②呼出空氣中 特異性二、尿中三氯乙酸的測(cè)定（一）頂空GC法 原理 ①在密閉頂空瓶中 三氯乙酸三氯乙烷②抽取頂空氣注入氣相色譜儀 ③FID檢測(cè) 內(nèi)標(biāo)法定量 內(nèi)標(biāo)物為正丁醇第七章：農(nóng)藥接觸指標(biāo)的測(cè)定第一節(jié)、有機(jī)磷農(nóng)藥 二代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)（一）、毒性效應(yīng) 抑制膽堿酯酶的活性造成乙酰膽堿過(guò)量，導(dǎo)致膽堿能神經(jīng)過(guò)度興奮，使中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂（二）、膽堿酯酶 1）指的是乙酰膽堿酯酶和紅細(xì)胞膽堿酯酶 2）主要存在于神經(jīng)組織和細(xì)胞中 3）對(duì)乙酰膽堿有很高的特異性 4）在血中活性占80%以上假性膽堿酯酶 1）指的是血清膽堿酯酶 2）存在于血清中 3）是非特異性膽堿酯酶 4）在血中活性約20%（三）生物監(jiān)測(cè)指標(biāo) ：血中膽堿酯酶活性——效應(yīng)性指標(biāo) （三全血中膽堿酯酶的活性測(cè)定）（1）三氯化鐵分光光度法 ：①乙酰膽堿乙酸+膽堿②剩余的乙酰膽堿與羥胺反應(yīng) 乙酸膽堿乙酰羥胺③顯色 乙酰羥胺紅色物質(zhì) 520nm測(cè)定吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量標(biāo)準(zhǔn)系列液——乙酰膽堿標(biāo)準(zhǔn)系列液樣品處理及測(cè)定 1）樣品處理：①將A、B兩個(gè)樣品管37℃水浴5min ②向A管加入乙酰膽堿標(biāo)液1ml，37℃水浴中精確反應(yīng)30min（每隔10min振搖一次）取出 ③立即向A、B管各加膽堿羥胺液4ml ④再向B管加乙酰膽堿標(biāo)液1ml 2）測(cè)定 向A、B管及標(biāo)準(zhǔn)管各加鹽酸（1+2）2ml 加2ml FeCl3液振搖過(guò)濾 520nm測(cè)定吸光度計(jì)算：被水解的乙酰膽堿吸光度=ABAA以此吸光度（差值）查標(biāo)準(zhǔn)曲線得到被水解乙酰膽堿量（μmol）此值為40ul血37℃反應(yīng)30min膽堿酯酶活性絕對(duì)值（G）全血膽堿酯酶活性（μmol/ml）=c/ （絕對(duì)值）全血膽堿酯酶活性相對(duì)值（%）=C/正常人血膽堿酯酶活性注意事項(xiàng)：P116（2）DTNB分光光度法 ： 硫代乙酰膽堿試劑測(cè)定血清中酶活性
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