【正文】 1 號(hào)管的 1/2。比濁管配法如下：將二液置冰水浴中冷卻后混合，置螺口試管中，放室溫暗處保存。用前混細(xì)菌室操作規(guī)程 細(xì)菌室操作程序文件36勻。有效期為 6 個(gè)月。操作方法、制備接種菌液：臨床標(biāo)本中分離的細(xì)菌做藥敏試驗(yàn)，應(yīng)挑取已分純的菌落 4～5 個(gè)制備菌懸液。制備菌液的方法是挑選瓊脂平板上、形態(tài)相同的菌落移種于 MH 液體培養(yǎng)基中，置 35℃水箱中孵育 4 小時(shí)，校正濁度，或用接種環(huán)挑取菌落，懸浮于生理鹽水中，振蕩混勻后與標(biāo)準(zhǔn)比濁管比濁，以有黑字的白紙為背景，調(diào)整濁度與比濁管相同。此法制備接種菌液適用于任何細(xì)菌。、接種平板：制備好的接種菌液必須在 15min 內(nèi)使用。用滅菌的棉拭子蘸取菌液；在管壁上旋轉(zhuǎn)擠壓幾次，去掉過(guò)多的菌液。用拭子涂布整個(gè)培養(yǎng)基表面，反復(fù)幾次，每次將乎板旋轉(zhuǎn) 60176。，最后沿平皿周邊繞兩圈，保證涂布均勻。、貼紙片：須待平板上的水分被瓊脂完全吸收后再貼紙片。用鑷子取紙片一張，貼在瓊脂平板表面，用鑷尖壓一下，使其貼平，紙片一貼就不可再拿起，因紙片中的藥物已擴(kuò)散到瓊脂中。每張紙片間距不少于 24mm，紙片中心距平皿邊緣不少于 15mm。直徑為 90mm 的平板最好貼 6 張。貼上紙片后，須在 15min 內(nèi)放 35℃孵箱培養(yǎng)。不可放在 CO2 環(huán)境中。、孵育：必須用 35℃孵箱，平板在孵箱內(nèi)最好單獨(dú)擺放，不超過(guò)二個(gè)疊在一起，否則中間的平板，達(dá)不到孵箱溫度而產(chǎn)生預(yù)擴(kuò)散的作用，平板孵育18～24h 后，讀取結(jié)果。、判定結(jié)果：培養(yǎng)后取出平板，測(cè)量抑菌環(huán)的直徑。抑菌環(huán)的邊緣以肉眼見(jiàn)不到細(xì)菌明顯生長(zhǎng)為限。有的菌株可出現(xiàn)蔓延生長(zhǎng)，進(jìn)入抑菌環(huán)，磺胺藥在抑菌環(huán)內(nèi)會(huì)出現(xiàn)輕微生長(zhǎng)，這些都不作為抑菌環(huán)的邊緣。按抑菌環(huán)直徑判斷細(xì)菌的敏感性。細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測(cè)37消毒滅菌效果監(jiān)測(cè)醫(yī)院必須對(duì)消毒、滅菌效果定期進(jìn)行監(jiān)測(cè)。滅菌合格率必須達(dá)到 100％；不合格物品不得進(jìn)入臨床使用部門。使用中的消毒劑、滅菌劑：應(yīng)進(jìn)行生物和化學(xué)監(jiān)測(cè)。生物監(jiān)測(cè)：消毒劑每季度一次，其細(xì)菌含量必須100cfu/ml，不得檢出致病性微生物：滅菌劑每月監(jiān)測(cè)一次，不得檢出任何微生物?；瘜W(xué)監(jiān)測(cè)：應(yīng)根據(jù)消毒、滅菌劑的性能定期監(jiān)測(cè)，如含氯消毒劑、過(guò)氧乙酸等應(yīng)每日監(jiān)測(cè)，對(duì)戊二醛的監(jiān)測(cè)應(yīng)每周不少于一次。應(yīng)同時(shí)對(duì)消毒、滅菌物品進(jìn)行消毒、滅菌效果監(jiān)測(cè)，消毒物品不得檢出致病性微生物，滅菌物品不得檢出任何微生物。紫外線消毒：應(yīng)進(jìn)行日常監(jiān)測(cè)、紫外燈管照射強(qiáng)度監(jiān)測(cè)和生物監(jiān)測(cè)。日常監(jiān)測(cè)包括燈管應(yīng)用時(shí)間、累計(jì)照射時(shí)間和使用人簽名。對(duì)新的和使用中的紫外燈管內(nèi)進(jìn)行照射強(qiáng)度監(jiān)測(cè)，新燈管的照射強(qiáng)度不得低于 100uW/cm2。使用中燈管不得低于 70uw/cm2 照射強(qiáng)度監(jiān)測(cè)應(yīng)每半年一次、生物監(jiān)測(cè)必要時(shí)進(jìn)行，經(jīng)消毒后的物品或空氣中的自然菌應(yīng)減少 %以上，人工染菌殺滅率應(yīng)達(dá)到％。五、各種消毒后的內(nèi)窺鏡(如胃鏡、腸鏡、喉鏡、氣管鏡等)及其它消毒物品：應(yīng)每季度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，不得檢出致病微生物。各種消毒后的內(nèi)窺鏡(如胃鏡、腸鏡、喉鏡、氣管鏡等)及其它消毒物品：應(yīng)每季度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，不得檢出致病微生物。各種滅菌后的內(nèi)窺鏡(如腹腔鏡、關(guān)節(jié)鏡、膽道鏡、膀胱鏡、胸腔鏡等)、活檢鉗和滅菌物品：必須每月進(jìn)行監(jiān)測(cè)，不得檢出任何微生物。血液凈化系統(tǒng)；必須每月對(duì)入、出透析器的透析液進(jìn)行監(jiān)測(cè)。當(dāng)疑有透析液污染或有嚴(yán)重感染病例時(shí)，應(yīng)增加采樣點(diǎn)，如原水口、軟化水出口、反滲水出口。透析液配液口等，并及時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。當(dāng)檢查結(jié)果超過(guò)規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)值時(shí)，須再?gòu)?fù)查。標(biāo)準(zhǔn)值為：透析器入口液的細(xì)菌菌落總數(shù)必須≤200cfu/ml，出口液的細(xì)菌的落總數(shù)必須≤2022cfIu/ml，并不得檢出致病微生物。細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測(cè)38環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)：包括對(duì)空氣、物體表面和醫(yī)護(hù)人員手的監(jiān)測(cè)。醫(yī)院應(yīng)每月對(duì)手術(shù)室、重癥監(jiān)護(hù)病房/室(ICU)、產(chǎn)房、母嬰室、新生兒病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供應(yīng)室無(wú)菌區(qū)、治療室、換藥室等重點(diǎn)部門進(jìn)行環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)。當(dāng)有醫(yī)院感染流行，懷疑與醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)因素有關(guān)時(shí)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。標(biāo) 準(zhǔn)環(huán)境類別 范 圍 空氣cfu/m3物體表面Cfu/cm2醫(yī)護(hù)人員手cfu/cm2Ⅰ類 層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房 ≤10 ≤5 ≤5Ⅱ類普通病房、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室無(wú)菌室、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房≤200 ≤5 ≤5Ⅲ類兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔室、急診室、化驗(yàn)室、各類普通病房和房間≤500 ≤10 ≤10Ⅳ類 傳染病科及病房 — ≤15 ≤15進(jìn)入人體無(wú)菌組織、器官或接觸破損皮膚、粘膜的醫(yī)療用品必須無(wú)菌。接觸粘膜的醫(yī)療用品：細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20cfu/g 或 100cm2；致病性微生物不得檢出。接觸皮膚的醫(yī)療用品：細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20cfu/g 或 100cm2；致病性微生物不得檢出。使用中消毒劑：細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤100cfu/ml；致病性微生物不得檢出。無(wú)菌器械保存液：必須無(wú)菌。污物處理衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：污染物品無(wú)論是回收再使用的物品，或是廢棄的物品，必須進(jìn)行無(wú)害化處理。不得檢出致病性微生物。在可疑污染情況下，進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測(cè)39采樣及檢查原則采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)：送檢時(shí)間不得超過(guò) 6h，若樣品保存于 0～4℃條件時(shí)。送檢時(shí)間不得超過(guò) 24h?？諝獠蓸蛹皺z查方法、采樣時(shí)間選擇消毒處理后與進(jìn)行醫(yī)療活動(dòng)之前期間采樣。、采祥高度與地面垂直高度 80～150cm。、布點(diǎn)方法室內(nèi)面積≤30M 2，設(shè)一條對(duì)角線上取 3 點(diǎn)，即中心一點(diǎn)、兩端各距墻 lm處各取一點(diǎn)；室內(nèi)面積30m 2，設(shè)東、西、南、北、中 5 點(diǎn)，其中東、西、南、北點(diǎn)均距墻 1m。、采樣方法用 9cm 直徑普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)暴露 5min 后立即送檢培養(yǎng)。、結(jié)果計(jì)算空氣細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/m 3)＝ 50000NAT式中： A 一平板面積，cm 2； T 一平板暴露時(shí)間，min； N 一平均菌落數(shù)，cfu/平皿。物體表面采樣及檢查方法、采樣時(shí)間選擇消毒處理后 4h 內(nèi)進(jìn)行采樣。、采樣面積被采表面100cm 2，取全部表面；采表面 ≥l00cm 2，取 100cm2。、采樣方法用 55cm2 的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板：放在被檢物體表面，用浸有無(wú)菌生理鹽水平樣液的棉拭子 1 支，在規(guī)格權(quán)內(nèi)橫豎往返各涂抹 5 次；并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭于。連續(xù)采樣 4 個(gè)規(guī)格板面積，剪去手接觸部分，將棉拭于放入裝 10ml 采樣液的試細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測(cè)40管中送檢。門把手等小型物體則采用棉拭子直接涂抹物體的方法采樣。、結(jié)果計(jì)算物體表面細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/cm 2)＝平 皿 上 菌 落 的 平 均 數(shù) 采 樣 液 稀 釋 倍 數(shù)采 樣 面 積 （ cm2）醫(yī)護(hù)人員手采樣及檢查方法、采樣時(shí)間在接觸病人、從事醫(yī)療活動(dòng)前進(jìn)行采樣。、采樣面積及方法被檢人五指并攏，將浸有無(wú)菌生理鹽水采樣液的棉試子一支在雙手指曲面從指根到指端來(lái)回涂擦各兩次(一只手涂擦面積 30cm2)，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉試子，剪去手接觸部位；將棉試子放入裝有 10ml 采樣液的試管內(nèi)。采樣面積按平方厘米(cm 2)計(jì)算。3. 細(xì)菌菌落總數(shù)檢查、結(jié)果計(jì)算手細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/cm 2) ＝平 皿 上 菌 落 的 平 均 數(shù) 采 樣 液 稀 釋 倍 數(shù)30正確洗手（1） 、選用質(zhì)量好的洗手液，保護(hù)手被皮膚。（2） 、用質(zhì)量好的消毒液。（3） 、選用合適的洗手設(shè)備。正確洗手步驟：（1） 、收下飾物及手表，用自來(lái)水淋濕雙手。（2） 、取無(wú)菌皂液或潔凈肥皂于手上。（3） 、用力擦搓掌心、指縫、手背、手指關(guān)節(jié)、指腹、指尖、拇指 10～15分鐘。（4） 、流動(dòng)水沖洗（5） 、用擦手紙巾包住龍頭將水關(guān)閉，或用肘、腳等關(guān)閉水龍頭。（6） 、用擦手巾擦干雙手或用烘器烘干。洗手后，細(xì)菌菌落數(shù)應(yīng)符合手質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。醫(yī)療用品采樣及檢查方法、采樣時(shí)間：在消毒或無(wú)菌處理后存放有效期內(nèi)采樣；、采樣量和采樣方法細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測(cè)41（1） 、破壞性方法取樣：如輸液器、輸血器、注射針等，剪碎取一定量于培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，35℃，48 小時(shí)培養(yǎng)。（2） 、不能用破壞性方法取樣：可用浸有無(wú)菌生理鹽水采樣棉拭子在被檢物體表面涂抹采樣，被采表面100cm 2，取全部；被采表面 ≥100cm 2，取100cm2 于培養(yǎng)基里 35℃，48 小時(shí)培養(yǎng)。、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：(1)、進(jìn)入人體無(wú)菌組織，器官或接觸破損皮膚粘膜的醫(yī)療用品必須無(wú)菌。(2)、接觸粘膜的醫(yī)療用品，細(xì)菌落數(shù)應(yīng)≤20cfu/g 或 100cm2，不得檢出致病菌。( 溶血性鏈球菌，沙門氏菌，金黃色葡萄球菌，綠膿桿菌等。)使用中消毒劑與無(wú)菌器械保存液采集及檢查方法、采樣時(shí)間采取更換前使用中的消毒劑與無(wú)菌器械保存液。、采樣量及方法在無(wú)菌條件下，用無(wú)菌吸管吸取 1ml 被檢樣液，加入 9ml 稀釋液中混均，對(duì)于醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營(yíng)養(yǎng)肉湯即可；對(duì)于含氯消毒劑、含碘消毒劑、過(guò)氧化物消毒劑，需在肉湯中加入 ％硫代硫酸鈉；對(duì)于洗必泰、季銨鹽類消毒劑，需在肉湯中加入 3％(W/V)吐溫 80 和 ％卵磷脂；對(duì)于醛類消毒劑，需在肉湯中加入 ％甘氨酸；對(duì)于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入 3％(WN) 吐溫 80，以中和被檢藥液的殘效作用。復(fù)方中和劑：(1) 磷酸緩沖液(PBS)： 磷酸氫二鈉 磷酸二氫鉀 蒸餾水 1000ml PH ～(2)復(fù)方中和劑： ％硫代硫酸鈉 2％吐溫 80 l％卵玲脂 l％甘氨酸 用 PBS 配制細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測(cè)42消毒劑使用中污染菌量測(cè)定：被檢消毒液混勻后，用無(wú)菌吸管取樣 1ml 加至 9ml 含相應(yīng)中各劑的稀釋液中，取 接種平板培養(yǎng)于 36177。1℃3 天和 28℃7 天，每次采樣平行作 3 次樣品計(jì)算每毫升消毒液在連續(xù)使用過(guò)程中污染微生物數(shù)量。每毫升微生物數(shù)(cfu/m1) ＝兩 種 溫 度 下 平 皿 上 菌 落 數(shù) 稀 釋 倍 結(jié)果分析平板上有菌生長(zhǎng)，證明被檢樣液有殘存活菌，若每個(gè)平板的落數(shù)在 10 個(gè)以下，仍可用于消毒處理(但不能用于滅菌)，若每個(gè)平板菌落數(shù)超過(guò) 10 個(gè)，說(shuō)明每毫升被檢樣液含菌量己超過(guò) 100 個(gè)，即不宜再用。細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測(cè)43各部位的消毒空氣消毒臭氧對(duì)空氣中的微生物有明顯的殺滅作用，采用 30mg/m3 濃度的臭氧，作用 15min，對(duì)自然菌的殺滅率達(dá) 90％以上。臭氧消毒空氣，必須是在封閉空間，人不在條件下進(jìn)行，消毒后 30min 才能進(jìn)入。另有①循環(huán)風(fēng)紫外線空氣消毒器；②靜電吸附式空氣消毒器；③過(guò)氧乙酸：3～5％水溶液，加熱蒸發(fā)，在 60～80％相對(duì)濕度，室溫下，按 1g/m3 計(jì)算，薰蒸時(shí)間 2 小時(shí)。④季銨鹽類消毒液：每立方米 (折合藥物濃度 10mg/m3)，作用 30min。⑤含氯消毒劑：用藥 ，點(diǎn)燃后關(guān)閉門窗 I～2 小時(shí)等。各種物體表面的消毒、地面消毒當(dāng)?shù)孛鏇](méi)有明顯污染時(shí)，用清水每日 l～2 次；病原菌：含有效氯 500mg/L 消毒液或 ％過(guò)氧乙酸；肝炎病毒：含有效氯 1000mg/L 消毒液；結(jié)核病人污染：%過(guò)氧乙酸或用 5％煤酚皂溶液。、病房各類用品表面的消毒含有效氯 200～500mg/L 消毒液、％過(guò)氧乙酸或紫外線。檢驗(yàn)相關(guān)器材與環(huán)境的消毒、貴重儀器局部輕度污染，可用 2％堿性或中性戊二醛溶液或5000mg/L 洗必泰酒精溶液擦拭；污染嚴(yán)重時(shí)，可用環(huán)氧乙烷消毒。、手的消毒用肥皂流水洗手 1～2 分鐘，再用流水沖洗。在污染時(shí)，應(yīng)立即用含有效氯 1000mg/L 消毒液或 ％過(guò)氧乙酸浸泡 3 分鐘，然后用清水沖洗。、廢棄標(biāo)本每 100 毫升加漂白粉 5 克或二氯異氰尿酸鈉 2