【正文】 1 號管的 1/2。比濁管配法如下：將二液置冰水浴中冷卻后混合，置螺口試管中，放室溫暗處保存。用前混細(xì)菌室操作規(guī)程 細(xì)菌室操作程序文件36勻。有效期為 6 個月。操作方法、制備接種菌液：臨床標(biāo)本中分離的細(xì)菌做藥敏試驗，應(yīng)挑取已分純的菌落 4～5 個制備菌懸液。制備菌液的方法是挑選瓊脂平板上、形態(tài)相同的菌落移種于 MH 液體培養(yǎng)基中，置 35℃水箱中孵育 4 小時，校正濁度，或用接種環(huán)挑取菌落，懸浮于生理鹽水中，振蕩混勻后與標(biāo)準(zhǔn)比濁管比濁，以有黑字的白紙為背景，調(diào)整濁度與比濁管相同。此法制備接種菌液適用于任何細(xì)菌。、接種平板：制備好的接種菌液必須在 15min 內(nèi)使用。用滅菌的棉拭子蘸取菌液；在管壁上旋轉(zhuǎn)擠壓幾次，去掉過多的菌液。用拭子涂布整個培養(yǎng)基表面，反復(fù)幾次，每次將乎板旋轉(zhuǎn) 60176。，最后沿平皿周邊繞兩圈，保證涂布均勻。、貼紙片：須待平板上的水分被瓊脂完全吸收后再貼紙片。用鑷子取紙片一張，貼在瓊脂平板表面，用鑷尖壓一下，使其貼平，紙片一貼就不可再拿起，因紙片中的藥物已擴(kuò)散到瓊脂中。每張紙片間距不少于 24mm，紙片中心距平皿邊緣不少于 15mm。直徑為 90mm 的平板最好貼 6 張。貼上紙片后，須在 15min 內(nèi)放 35℃孵箱培養(yǎng)。不可放在 CO2 環(huán)境中。、孵育：必須用 35℃孵箱，平板在孵箱內(nèi)最好單獨擺放，不超過二個疊在一起，否則中間的平板，達(dá)不到孵箱溫度而產(chǎn)生預(yù)擴(kuò)散的作用，平板孵育18～24h 后，讀取結(jié)果。、判定結(jié)果：培養(yǎng)后取出平板，測量抑菌環(huán)的直徑。抑菌環(huán)的邊緣以肉眼見不到細(xì)菌明顯生長為限。有的菌株可出現(xiàn)蔓延生長，進(jìn)入抑菌環(huán)，磺胺藥在抑菌環(huán)內(nèi)會出現(xiàn)輕微生長，這些都不作為抑菌環(huán)的邊緣。按抑菌環(huán)直徑判斷細(xì)菌的敏感性。細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測37消毒滅菌效果監(jiān)測醫(yī)院必須對消毒、滅菌效果定期進(jìn)行監(jiān)測。滅菌合格率必須達(dá)到 100％；不合格物品不得進(jìn)入臨床使用部門。使用中的消毒劑、滅菌劑：應(yīng)進(jìn)行生物和化學(xué)監(jiān)測。生物監(jiān)測：消毒劑每季度一次，其細(xì)菌含量必須100cfu/ml，不得檢出致病性微生物：滅菌劑每月監(jiān)測一次，不得檢出任何微生物?；瘜W(xué)監(jiān)測：應(yīng)根據(jù)消毒、滅菌劑的性能定期監(jiān)測，如含氯消毒劑、過氧乙酸等應(yīng)每日監(jiān)測，對戊二醛的監(jiān)測應(yīng)每周不少于一次。應(yīng)同時對消毒、滅菌物品進(jìn)行消毒、滅菌效果監(jiān)測，消毒物品不得檢出致病性微生物，滅菌物品不得檢出任何微生物。紫外線消毒：應(yīng)進(jìn)行日常監(jiān)測、紫外燈管照射強(qiáng)度監(jiān)測和生物監(jiān)測。日常監(jiān)測包括燈管應(yīng)用時間、累計照射時間和使用人簽名。對新的和使用中的紫外燈管內(nèi)進(jìn)行照射強(qiáng)度監(jiān)測，新燈管的照射強(qiáng)度不得低于 100uW/cm2。使用中燈管不得低于 70uw/cm2 照射強(qiáng)度監(jiān)測應(yīng)每半年一次、生物監(jiān)測必要時進(jìn)行，經(jīng)消毒后的物品或空氣中的自然菌應(yīng)減少 %以上，人工染菌殺滅率應(yīng)達(dá)到％。五、各種消毒后的內(nèi)窺鏡(如胃鏡、腸鏡、喉鏡、氣管鏡等)及其它消毒物品：應(yīng)每季度進(jìn)行監(jiān)測，不得檢出致病微生物。各種消毒后的內(nèi)窺鏡(如胃鏡、腸鏡、喉鏡、氣管鏡等)及其它消毒物品：應(yīng)每季度進(jìn)行監(jiān)測，不得檢出致病微生物。各種滅菌后的內(nèi)窺鏡(如腹腔鏡、關(guān)節(jié)鏡、膽道鏡、膀胱鏡、胸腔鏡等)、活檢鉗和滅菌物品：必須每月進(jìn)行監(jiān)測，不得檢出任何微生物。血液凈化系統(tǒng)；必須每月對入、出透析器的透析液進(jìn)行監(jiān)測。當(dāng)疑有透析液污染或有嚴(yán)重感染病例時，應(yīng)增加采樣點，如原水口、軟化水出口、反滲水出口。透析液配液口等，并及時進(jìn)行監(jiān)測。當(dāng)檢查結(jié)果超過規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)值時，須再復(fù)查。標(biāo)準(zhǔn)值為：透析器入口液的細(xì)菌菌落總數(shù)必須≤200cfu/ml，出口液的細(xì)菌的落總數(shù)必須≤2022cfIu/ml，并不得檢出致病微生物。細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測38環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測：包括對空氣、物體表面和醫(yī)護(hù)人員手的監(jiān)測。醫(yī)院應(yīng)每月對手術(shù)室、重癥監(jiān)護(hù)病房/室(ICU)、產(chǎn)房、母嬰室、新生兒病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供應(yīng)室無菌區(qū)、治療室、換藥室等重點部門進(jìn)行環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測。當(dāng)有醫(yī)院感染流行，懷疑與醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)因素有關(guān)時，應(yīng)及時進(jìn)行監(jiān)測。標(biāo) 準(zhǔn)環(huán)境類別 范 圍 空氣cfu/m3物體表面Cfu/cm2醫(yī)護(hù)人員手cfu/cm2Ⅰ類 層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房 ≤10 ≤5 ≤5Ⅱ類普通病房、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室無菌室、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房≤200 ≤5 ≤5Ⅲ類兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔室、急診室、化驗室、各類普通病房和房間≤500 ≤10 ≤10Ⅳ類 傳染病科及病房 — ≤15 ≤15進(jìn)入人體無菌組織、器官或接觸破損皮膚、粘膜的醫(yī)療用品必須無菌。接觸粘膜的醫(yī)療用品：細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20cfu/g 或 100cm2；致病性微生物不得檢出。接觸皮膚的醫(yī)療用品：細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20cfu/g 或 100cm2；致病性微生物不得檢出。使用中消毒劑：細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤100cfu/ml；致病性微生物不得檢出。無菌器械保存液：必須無菌。污物處理衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：污染物品無論是回收再使用的物品，或是廢棄的物品，必須進(jìn)行無害化處理。不得檢出致病性微生物。在可疑污染情況下，進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測。細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測39采樣及檢查原則采樣后必須盡快對樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測：送檢時間不得超過 6h，若樣品保存于 0～4℃條件時。送檢時間不得超過 24h?？諝獠蓸蛹皺z查方法、采樣時間選擇消毒處理后與進(jìn)行醫(yī)療活動之前期間采樣。、采祥高度與地面垂直高度 80～150cm。、布點方法室內(nèi)面積≤30M 2，設(shè)一條對角線上取 3 點，即中心一點、兩端各距墻 lm處各取一點；室內(nèi)面積30m 2，設(shè)東、西、南、北、中 5 點，其中東、西、南、北點均距墻 1m。、采樣方法用 9cm 直徑普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點暴露 5min 后立即送檢培養(yǎng)。、結(jié)果計算空氣細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/m 3)＝ 50000NAT式中： A 一平板面積，cm 2； T 一平板暴露時間，min； N 一平均菌落數(shù)，cfu/平皿。物體表面采樣及檢查方法、采樣時間選擇消毒處理后 4h 內(nèi)進(jìn)行采樣。、采樣面積被采表面100cm 2，取全部表面；采表面 ≥l00cm 2，取 100cm2。、采樣方法用 55cm2 的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板：放在被檢物體表面，用浸有無菌生理鹽水平樣液的棉拭子 1 支，在規(guī)格權(quán)內(nèi)橫豎往返各涂抹 5 次；并隨之轉(zhuǎn)動棉拭于。連續(xù)采樣 4 個規(guī)格板面積，剪去手接觸部分，將棉拭于放入裝 10ml 采樣液的試細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測40管中送檢。門把手等小型物體則采用棉拭子直接涂抹物體的方法采樣。、結(jié)果計算物體表面細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/cm 2)＝平 皿 上 菌 落 的 平 均 數(shù) 采 樣 液 稀 釋 倍 數(shù)采 樣 面 積 （ cm2）醫(yī)護(hù)人員手采樣及檢查方法、采樣時間在接觸病人、從事醫(yī)療活動前進(jìn)行采樣。、采樣面積及方法被檢人五指并攏，將浸有無菌生理鹽水采樣液的棉試子一支在雙手指曲面從指根到指端來回涂擦各兩次(一只手涂擦面積 30cm2)，并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉試子，剪去手接觸部位；將棉試子放入裝有 10ml 采樣液的試管內(nèi)。采樣面積按平方厘米(cm 2)計算。3. 細(xì)菌菌落總數(shù)檢查、結(jié)果計算手細(xì)菌菌落總數(shù)(cfu/cm 2) ＝平 皿 上 菌 落 的 平 均 數(shù) 采 樣 液 稀 釋 倍 數(shù)30正確洗手（1） 、選用質(zhì)量好的洗手液，保護(hù)手被皮膚。（2） 、用質(zhì)量好的消毒液。（3） 、選用合適的洗手設(shè)備。正確洗手步驟：（1） 、收下飾物及手表，用自來水淋濕雙手。（2） 、取無菌皂液或潔凈肥皂于手上。（3） 、用力擦搓掌心、指縫、手背、手指關(guān)節(jié)、指腹、指尖、拇指 10～15分鐘。（4） 、流動水沖洗（5） 、用擦手紙巾包住龍頭將水關(guān)閉，或用肘、腳等關(guān)閉水龍頭。（6） 、用擦手巾擦干雙手或用烘器烘干。洗手后，細(xì)菌菌落數(shù)應(yīng)符合手質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。醫(yī)療用品采樣及檢查方法、采樣時間：在消毒或無菌處理后存放有效期內(nèi)采樣；、采樣量和采樣方法細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測41（1） 、破壞性方法取樣：如輸液器、輸血器、注射針等，剪碎取一定量于培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，35℃，48 小時培養(yǎng)。（2） 、不能用破壞性方法取樣：可用浸有無菌生理鹽水采樣棉拭子在被檢物體表面涂抹采樣，被采表面100cm 2，取全部；被采表面 ≥100cm 2，取100cm2 于培養(yǎng)基里 35℃，48 小時培養(yǎng)。、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：(1)、進(jìn)入人體無菌組織，器官或接觸破損皮膚粘膜的醫(yī)療用品必須無菌。(2)、接觸粘膜的醫(yī)療用品，細(xì)菌落數(shù)應(yīng)≤20cfu/g 或 100cm2，不得檢出致病菌。( 溶血性鏈球菌，沙門氏菌，金黃色葡萄球菌，綠膿桿菌等。)使用中消毒劑與無菌器械保存液采集及檢查方法、采樣時間采取更換前使用中的消毒劑與無菌器械保存液。、采樣量及方法在無菌條件下，用無菌吸管吸取 1ml 被檢樣液，加入 9ml 稀釋液中混均，對于醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯即可；對于含氯消毒劑、含碘消毒劑、過氧化物消毒劑，需在肉湯中加入 ％硫代硫酸鈉；對于洗必泰、季銨鹽類消毒劑，需在肉湯中加入 3％(W/V)吐溫 80 和 ％卵磷脂；對于醛類消毒劑，需在肉湯中加入 ％甘氨酸；對于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入 3％(WN) 吐溫 80，以中和被檢藥液的殘效作用。復(fù)方中和劑：(1) 磷酸緩沖液(PBS)： 磷酸氫二鈉 磷酸二氫鉀 蒸餾水 1000ml PH ～(2)復(fù)方中和劑： ％硫代硫酸鈉 2％吐溫 80 l％卵玲脂 l％甘氨酸 用 PBS 配制細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測42消毒劑使用中污染菌量測定：被檢消毒液混勻后，用無菌吸管取樣 1ml 加至 9ml 含相應(yīng)中各劑的稀釋液中，取 接種平板培養(yǎng)于 36177。1℃3 天和 28℃7 天，每次采樣平行作 3 次樣品計算每毫升消毒液在連續(xù)使用過程中污染微生物數(shù)量。每毫升微生物數(shù)(cfu/m1) ＝兩 種 溫 度 下 平 皿 上 菌 落 數(shù) 稀 釋 倍 結(jié)果分析平板上有菌生長，證明被檢樣液有殘存活菌，若每個平板的落數(shù)在 10 個以下，仍可用于消毒處理(但不能用于滅菌)，若每個平板菌落數(shù)超過 10 個，說明每毫升被檢樣液含菌量己超過 100 個，即不宜再用。細(xì)菌室操作規(guī)程 醫(yī)院微生物感染控制檢測43各部位的消毒空氣消毒臭氧對空氣中的微生物有明顯的殺滅作用，采用 30mg/m3 濃度的臭氧，作用 15min，對自然菌的殺滅率達(dá) 90％以上。臭氧消毒空氣，必須是在封閉空間，人不在條件下進(jìn)行，消毒后 30min 才能進(jìn)入。另有①循環(huán)風(fēng)紫外線空氣消毒器；②靜電吸附式空氣消毒器；③過氧乙酸：3～5％水溶液，加熱蒸發(fā)，在 60～80％相對濕度，室溫下，按 1g/m3 計算，薰蒸時間 2 小時。④季銨鹽類消毒液：每立方米 (折合藥物濃度 10mg/m3)，作用 30min。⑤含氯消毒劑：用藥 ，點燃后關(guān)閉門窗 I～2 小時等。各種物體表面的消毒、地面消毒當(dāng)?shù)孛鏇]有明顯污染時，用清水每日 l～2 次；病原菌：含有效氯 500mg/L 消毒液或 ％過氧乙酸；肝炎病毒：含有效氯 1000mg/L 消毒液；結(jié)核病人污染：%過氧乙酸或用 5％煤酚皂溶液。、病房各類用品表面的消毒含有效氯 200～500mg/L 消毒液、％過氧乙酸或紫外線。檢驗相關(guān)器材與環(huán)境的消毒、貴重儀器局部輕度污染，可用 2％堿性或中性戊二醛溶液或5000mg/L 洗必泰酒精溶液擦拭；污染嚴(yán)重時，可用環(huán)氧乙烷消毒。、手的消毒用肥皂流水洗手 1～2 分鐘，再用流水沖洗。在污染時，應(yīng)立即用含有效氯 1000mg/L 消毒液或 ％過氧乙酸浸泡 3 分鐘，然后用清水沖洗。、廢棄標(biāo)本每 100 毫升加漂白粉 5 克或二氯異氰尿酸鈉 2