【正文】 的吞噬功能和脂質(zhì)反向轉(zhuǎn)運(yùn)功能。明確這些分子起作用相關(guān)的表觀遺傳機(jī)制和信號(hào)通路，構(gòu)建作用小網(wǎng)絡(luò)。，探討其作為診防治靶點(diǎn)的可能性。獲取臨床標(biāo)本，觀察AS發(fā)病與關(guān)鍵分子的表達(dá)是否存在相關(guān)性；分析關(guān)鍵分子的激活劑或抑制劑是否抑制或促進(jìn)AS的發(fā)生發(fā)展。通過(guò)這些明確該分子是否可作為AS診防治的靶點(diǎn)。第三部分 脂代謝紊亂導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病的分子機(jī)制關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題：高TG伴低HDL是國(guó)人脂代謝紊亂的主要表型，本研究在前期工作基礎(chǔ)上進(jìn)一步闡明富含TG脂蛋白和低HDL誘發(fā)AS的途徑及其作用機(jī)制，尋找防治AS的新靶點(diǎn)；明確干擾泡沫細(xì)胞形成的關(guān)鍵分子清道夫受體胞漿域功能來(lái)逆轉(zhuǎn)AS的可能性。主要研究?jī)?nèi)容：、平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，與不同的富含TG脂蛋白（乳糜微粒，乳糜微粒殘?bào)w，極低密度脂蛋白，極低密度脂蛋白殘?bào)w）培養(yǎng)后，以氧化應(yīng)激和炎癥通路矩陣PCR和蛋白組學(xué)方法，確認(rèn)特異性的氧化應(yīng)激途徑，并應(yīng)用RNA干擾、特異性抗體和特異性激動(dòng)和阻斷劑，對(duì)脂質(zhì)沉積、細(xì)胞活化、增值和凋亡等AS病變的細(xì)胞生物學(xué)終點(diǎn)進(jìn)行干預(yù)分析；應(yīng)用LPL基因缺陷以及ApoCIII轉(zhuǎn)基因的高TG模型小鼠，與ApoE和LDL受體缺陷的AS易感小鼠交配后，分別喂飼高脂食物以及通過(guò)動(dòng)脈壁損傷加速AS形成，在不同的時(shí)間分別取動(dòng)脈、心臟和肝臟，以基因組、蛋白組和脂質(zhì)組學(xué)等系統(tǒng)生物學(xué)手段，檢測(cè)和分析這些與AS密切相關(guān)組織的氧化應(yīng)激通路、炎癥通路以及脂代謝通路中相應(yīng)的改變。并應(yīng)用高TG的ApoCIII轉(zhuǎn)基因家兔和小型豬進(jìn)一步驗(yàn)證。在此基礎(chǔ)上選擇數(shù)個(gè)干擾靶點(diǎn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性治療。同時(shí)尋找具有對(duì)高TG所致AS嚴(yán)重度有預(yù)測(cè)生物標(biāo)識(shí)物，并在相應(yīng)的臨床病人中進(jìn)行驗(yàn)證。，以及與內(nèi)皮細(xì)胞孵育后細(xì)胞基因組和蛋白組的變化，以COX2的表達(dá)與活性改變?yōu)榻K點(diǎn)，明確和驗(yàn)證II型糖尿病患者HDL促進(jìn)內(nèi)皮環(huán)氧合酶2（COX2）的分子機(jī)制及其對(duì)AS代償性影響的生理意義。，制備干擾清道夫受體胞漿結(jié)合域功能的GRP78的轉(zhuǎn)基因小鼠模型，以驗(yàn)證在AS易感小鼠體內(nèi)是否能夠減緩AS病變的形成，并應(yīng)用從多肽庫(kù)篩選得到的干擾清道夫受體胞漿結(jié)合域功能的多肽H11，進(jìn)行AS實(shí)驗(yàn)性治療，為臨床防治AS提供新的措施。第四部分 含硫氨基酸家族在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生中的免疫和炎癥調(diào)節(jié)作用及分子機(jī)制關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題：在以往長(zhǎng)期系列研究的基礎(chǔ)上，以含硫氨基酸家族代謝產(chǎn)物之間形成的網(wǎng)絡(luò)，特別以Hcy與H2S為核心造成的致炎與抗炎作用之間調(diào)控機(jī)制為主軸,研究它們與重要蛋白質(zhì)的相互作用機(jī)理及重要靶蛋白修飾的特點(diǎn)和規(guī)律,闡明它們?cè)贏S發(fā)生和發(fā)展不同階段中的作用及機(jī)制。 主要研究?jī)?nèi)容：采用高通量的翻譯后修飾位點(diǎn)的篩選方法，探索含硫氨基酸家族主要成員是否通過(guò)對(duì)血管細(xì)胞和免疫細(xì)胞膜或細(xì)胞內(nèi)與炎癥調(diào)控相關(guān)的特定靶分子進(jìn)行翻譯后修飾,促使或減緩AS發(fā)生發(fā)展。從內(nèi)源性含硫氨基酸家族成員間的動(dòng)態(tài)平衡關(guān)系和其效應(yīng)間的“網(wǎng)絡(luò)”調(diào)節(jié)關(guān)系中探尋拮抗高同型半胱氨酸引起的血管慢性炎癥損傷的內(nèi)源性保護(hù)小分子物質(zhì)。, 含硫氨基酸家族主要代謝產(chǎn)物和代謝酶的變化規(guī)律，特別是它們產(chǎn)生和降解的特點(diǎn)。，特別是探討它們引起血管炎癥和免疫細(xì)胞變化的靶蛋白翻譯后修飾機(jī)制以及分子結(jié)構(gòu)學(xué)基礎(chǔ)。（Hcy和 H2S）及其主要代謝酶(通過(guò)改變其基因和抑制蛋白的活性)在AS發(fā)生、發(fā)展及治療中的作用；重點(diǎn)研究血管內(nèi)皮、血管外膜成纖維及脂肪細(xì)胞與不同免疫細(xì)胞在上述AS病變發(fā)生和發(fā)展中的關(guān)鍵起始作用機(jī)制和對(duì)關(guān)鍵靶分子蛋白的調(diào)控和修飾機(jī)制。第五部分 血管重塑與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制 關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題：AS血管重塑是通過(guò)血管內(nèi)膜和外膜和其周?chē)窘M織共同作用的結(jié)果。本課題將建立和優(yōu)化心肌橋物理仿真模型，探索內(nèi)皮損傷導(dǎo)致血管重塑造成血管再狹窄分子機(jī)制，研究如何在抗再狹窄內(nèi)皮修復(fù)血管正性重構(gòu)遠(yuǎn)期預(yù)后支架尋求平衡點(diǎn)，闡明外膜的細(xì)胞成分對(duì)于應(yīng)答血管損傷和導(dǎo)致血管重塑的具體的分子機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容：（SMS2KO、SMS2LTg）內(nèi)皮細(xì)胞在不同剪切應(yīng)力作用下的功能變化，內(nèi)皮細(xì)胞如何感應(yīng)機(jī)械剪切力，并把機(jī)械信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)榉肿有盘?hào)傳遞到核內(nèi)并引起一系列下游事件改變。、凋亡與增殖功能、自分泌及旁分泌功能等的影響；探討心肌橋?qū)?nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)譜（NOS、ETMCP原癌基因等）的變化；闡明心肌橋?qū)Σ煌?jié)段內(nèi)皮細(xì)胞變化及其機(jī)制；通過(guò)模型分析，尋找引起內(nèi)皮細(xì)胞變化的關(guān)鍵因素，建立血流動(dòng)力學(xué)評(píng)估系統(tǒng)。，觀察藥物支架植入后對(duì)于局部血管重塑的新特點(diǎn)，藥物支架的涂層及藥物對(duì)于血管重塑作用及機(jī)制；內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞在重塑中的交互作用及其中的分子信號(hào)通路的調(diào)控；探索支架在維持血管正性重塑穩(wěn)定粥樣斑塊和內(nèi)皮功能的完整并防止過(guò)度重塑的分子機(jī)制。；研究血管外膜對(duì)血管收縮/舒張功能的影響；并以血管急慢性損傷模型為整體研究對(duì)象，闡明血管外膜損傷過(guò)程中的反應(yīng)及其基因蛋白表達(dá)變化對(duì)血管重塑中的作用。 第六部分 動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性和早期防治關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題：促使AS斑塊從不穩(wěn)定向穩(wěn)定的方向轉(zhuǎn)變，是預(yù)防急性心血管事件的主要途徑。本課題研究活動(dòng)性炎癥、免疫失衡、細(xì)胞凋亡和自噬等因素對(duì)斑塊穩(wěn)定性的影響及其作用機(jī)制；研究斑塊形成和穩(wěn)定性變化中的表觀遺傳狀態(tài)差異及其調(diào)控機(jī)制；闡明生物力學(xué)變化誘發(fā)斑塊破裂的的分子機(jī)制。 主要研究?jī)?nèi)容：1．研究PGHS同工酶、鐵調(diào)素和HO1通過(guò)氧化應(yīng)激對(duì)于斑塊不穩(wěn)定性的影響及其分子機(jī)制；檢測(cè)LPS刺激后CD6PACCD40L等活化分子表達(dá)情況；將LPS刺激后的血小板同自體白細(xì)胞孵育，觀察白細(xì)胞血小板聚集體形成情況；血小板加入TLR4單抗、類球紅細(xì)菌內(nèi)毒素或PI3K抑制劑，比較TLR4阻斷或PI3K抑制后血小板上述指標(biāo)變化情況，確定干預(yù)血小板活化的關(guān)鍵靶點(diǎn)；研究促進(jìn)炎癥的Th17細(xì)胞、PDCD4分子和抑制炎癥的Treg細(xì)胞和TIPE2分子間的免疫失衡在斑塊不穩(wěn)定中的作用及其效應(yīng)分子和信號(hào)通路。2．研究調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因子PCPLC和ITGB4在斑塊不穩(wěn)定性的作用以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。以易損斑塊apoE/小鼠為動(dòng)物模型，發(fā)現(xiàn)控制血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的新因子，利用生物信息學(xué)方法確定血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和自噬信號(hào)通路的新節(jié)點(diǎn)。3．比較穩(wěn)定和不穩(wěn)定斑塊中主要細(xì)胞成分組蛋白修飾狀態(tài)的差異，尋找不穩(wěn)定斑塊組成細(xì)胞中出現(xiàn)組蛋白表觀遺傳學(xué)異常的分子機(jī)制以及這些組蛋白修飾差異對(duì)斑塊穩(wěn)定性的意義。利用ChiponChIP/ChIPsequencing技術(shù)建立穩(wěn)定斑塊中主要細(xì)胞成分全基因組CpG島甲基化譜式,闡明這些DNA甲基化特征與斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系，并評(píng)價(jià)其在早期預(yù)警中的價(jià)值。利用ChIP和蛋白質(zhì)組技術(shù)研究關(guān)鍵基因表觀遺傳狀態(tài)的差異及關(guān)鍵調(diào)控因子的功能，探討不同斑塊或細(xì)胞組分中關(guān)鍵基因甲基化和組蛋白修飾狀態(tài)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。、排列和生物學(xué)標(biāo)志物以及斑塊應(yīng)變的影響，應(yīng)用系統(tǒng)生物學(xué)的方法篩選力學(xué)易感基因和MicroRNA，探討力學(xué)改變對(duì)易損斑塊炎性因子、膠原代謝和血管新生的影響及其分子機(jī)制和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，明確導(dǎo)致斑塊破裂的關(guān)鍵力學(xué)和分子偶聯(lián)機(jī)制。29 / 2