免疫共沉淀中文使用說明書(pierce26149)-資料下載頁
2025-07-20 09:27本頁面
【正文】 量，目的是確定最佳洗脫次數(shù)。在CoIP實驗中，最終的洗脫液中應(yīng)該沒有蛋白；對于樣品中含有高蛋白濃度的洗脫液，增加洗脫次數(shù)或許是非常必要的。E. CoIP的洗脫注：如果蛋白或者抗體對低pH值比較敏感，使用中性pH值體系（如：Thermo Scientific Gentle Elution Buffer, Product No. 21027）。針對下游酶催化或功能測定實驗，應(yīng)添加1M 5μl到收集管中，這將中和洗脫液的pH值，在基礎(chǔ)上在進行離心分離。，添加10μl的洗脫液，離心；，繼續(xù)向柱子中加入50μl洗脫液，室溫孵育5min。柱子不需要扣上蓋子或者混勻；注：為了獲得濃度更高的洗脫產(chǎn)物，可使用少量的洗脫液，但是總產(chǎn)量可能會降低。，分析濾液中的蛋白含量。再次進行D1D3步驟是非常必要的。從每次離心后的濾液中取出一小部分，分別進行檢測分析，以確?？乖耆幌疵撓聛?。，需即可進行F步驟：樹脂的再生與儲存。1. 添加100μl 1Coupling Buffer于柱中，離心棄掉濾液，重復(fù)此步驟1次；，向離心柱中添加200μl 1Coupling Buffer，蓋上螺帽。用封口膜封住離心管底部，以防止樹脂干燥。如果是長期儲存（比如大于2周），%的疊氮化鈉。Lane Marker Sample Buffer，緩慢上下顛倒樣品緩沖液510次。為縮短凝膠時間，添加1M DTT于5 Sample Buffer中，使終濃度至100mM。Sample Buffer至樣品中，制成1的終濃度（如：添加5μl 5Sample Buffer到 20μl的樣品中）；℃加熱樣品5min，在加樣前，可將樣品置于 室溫中冷卻。6
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