免疫共沉淀中文使用說(shuō)明書(shū)(pierce26149)-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 Coupling Resin的瓶子，使其處于懸浮狀態(tài)。，每200μl反應(yīng)體系，添加3μl氰基硼氫化鈉溶液；注：氰基硼氫化鈉屬劇毒物質(zhì)，操作時(shí)要小心并穿戴防護(hù)服。添加200μl 1Coupling Buffer，系上螺帽，將離心柱置于4℃保存。方案II：懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的裂解 離心細(xì)胞懸液5min，收集細(xì)胞團(tuán)，棄上層；，使細(xì)胞團(tuán)懸浮起來(lái)，1000g 離心5min收集細(xì)胞；3. 向細(xì)胞團(tuán)中添加冰冷的IP Lysis/Wash Buffer；每50mg濕的細(xì)胞團(tuán)使用500μl IP Lysis/Wash Buffer（10：1 v/w）。 離心柱子1min，棄掉含有樹(shù)脂的柱子，保存濾液，它們將被添加到已固定化的抗體中，用于CoIP實(shí)驗(yàn)。試劑盒中提供的20Modified Dulbecco’s PBS是一個(gè)選擇性的結(jié)合/洗滌緩沖液。擰緊螺帽，4℃輕輕震蕩孵育12h，或者過(guò)夜；注：優(yōu)化每一次的結(jié)合時(shí)間可能是很有必要的。離心，保存濾液以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)分析用；，將柱子置于一新的離心管中，添加200μl IP Lysis/Wash Buffer，離心； IP Lysis/Wash Buffer清洗樣品至少2次，每次清洗完需離心；注：針對(duì)一些特殊的體系，采用A280，SDSPAGE or Thermo Scientific Micro BCA Protein Assay評(píng)價(jià)洗脫液的蛋白含量，目的是確定最佳洗脫次數(shù)。，添加10μl的洗脫液，離心；，繼續(xù)向柱子中加入50μl洗脫液，室溫孵育5min。從每次離心后的濾液中取出一小部分，分別進(jìn)行檢測(cè)分析，以確?？乖耆幌疵撓聛?lái)。如果是長(zhǎng)期儲(chǔ)存（比如大于2周），%的疊氮化鈉。6
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