【正文】 細(xì)菌變異的機(jī)制（一）、基因突變 :細(xì)菌遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)發(fā)生突然而穩(wěn)定的改變，導(dǎo)致細(xì)菌性狀的遺傳性變異。 : 突變率：自發(fā)突變→低；誘發(fā)突變→高。 突變與選擇：隨機(jī)性 ；選擇性。 回復(fù)突變： 野生型：細(xì)菌在自然環(huán)境下具有的表現(xiàn)型 。 突變型：發(fā)生突變后的菌株。 野生型→突變型→野生型 光修復(fù)：經(jīng)紫外線照射后，細(xì)胞DNA上形成TT二聚體，導(dǎo)致突變。 如在紫外線照射后立即將細(xì)菌暴露于可見光下，則受損的DNA可修復(fù)， 細(xì)菌的存活率大大提高。（二）、基因的轉(zhuǎn)移與重組 基因轉(zhuǎn)移(gene transfer)：外源性遺傳物質(zhì)由供體菌轉(zhuǎn)入某受體菌內(nèi)的過程?；蛑亟M(gene rebination)：轉(zhuǎn)移的基因與受體菌DNA整合在一起的過程。 供體菌(donor)； 受體菌(recipient) （transformation）： 供體菌游離的DNA片段被受體菌直接攝取，使受體菌獲得新的性狀。 轉(zhuǎn)化因子：游離的DNA片段。分子量小于1X107。 感 受 態(tài)：受體菌能攝取外源DNA片段的生理狀態(tài)。 感受態(tài)一般出現(xiàn)在細(xì)菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的后期，持續(xù)時(shí)間約3~4小時(shí)。 (conjugation)：細(xì)菌通過性菌毛，將遺傳物質(zhì)從供體菌轉(zhuǎn)移給受體菌的過程。 F質(zhì)粒、高頻重組菌（Hfr）、 R質(zhì)粒 的概念 （transduction）：以溫和噬菌體為載體，將供體菌的一段DNA轉(zhuǎn)移到受體菌內(nèi)，使受體菌獲得新的性狀。 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)(generalized transduction)的概念 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)(restricted transduction) 的概念 （lysogenic conversion）：當(dāng)噬菌體感染細(xì)菌時(shí)，宿主菌染色體中獲得了噬菌體的DNA片段，而使細(xì)菌獲得新的性狀。(protoplast fusion)：將兩種不同的細(xì)菌經(jīng)溶菌酶或青霉素等處理，失去細(xì)胞壁成為原生質(zhì)體后進(jìn)行相互融合的過程。第三節(jié) 病毒的遺傳變異 一、病毒的基因組 1. 遺傳物質(zhì)：DNA 或RNA 2. 特點(diǎn)：只有一種核酸，且存在形式多樣；基因組小，基因常有重疊；結(jié)構(gòu)較簡(jiǎn)單；復(fù)制方式具有多樣性； 有較大的遺傳不穩(wěn)定性。 二、基因突變 ★突變：病毒基因組堿基序列發(fā)生改變。 ★基因組突變的方式：點(diǎn)突變；缺失突變；插入突變?！?突變類型：?基因突變突變發(fā)生在基因結(jié)構(gòu)內(nèi)，產(chǎn)生的變異株可導(dǎo)致特定表型的改變。 ? 靜默突變未引起表型改變的突變。 三、基因重組與重配★ 重組（ rebination）兩個(gè)病毒基因組間核酸序列互換、組合的過程?！?重配(reassortment)在分節(jié)段的病毒基因組之間，兩個(gè)病毒株可通過基因片斷的交換使子代基因組發(fā)生突變過程。基因組分節(jié)段的病毒發(fā)生基因變異的幾率高。 基因組分節(jié)段的病毒： 流感病毒（7－8個(gè)節(jié)段）； 輪狀病毒（11個(gè)節(jié)段），流行性出血熱病毒（3個(gè)節(jié)段） ★重組與重配可導(dǎo)致基因復(fù)活： ?交叉復(fù)活活病毒與滅活病毒間。?多重復(fù)活兩個(gè)或多個(gè)滅活病毒間。 四、基因整合： 病毒基因組與細(xì)胞基因組的整合。五、病毒基因產(chǎn)物的相互作用－ 表型變異，不遺傳?！?互補(bǔ)作用和加強(qiáng)作用★ 表型混合和核殼轉(zhuǎn)移 (周亞濱)第六章 醫(yī)學(xué)微生態(tài)學(xué)與醫(yī)院內(nèi)感染研究的對(duì)象主要是寄居于人體、正常情況下對(duì)人體無害的微生物群或正常菌群，但在特定條件下，又可成為條件致病菌(conditioned pathogen)或機(jī)會(huì)致病菌(opportunistic pathogen)對(duì)人體造成危害。第一節(jié) 正常菌群一． 正常微生物群(或正常菌群)的概念:正常微生物群: 指存在于正常人的體表以及與外界相通的腔道粘膜、正常情況下對(duì)人無害的微生物。正常微生物群中以細(xì)菌為主，故也通稱為正常菌群（normal flora）。二． 正常菌群的分布: 表6－1 （了解）三． 正常菌群的生理作用1． 生物拮抗(antagonism)：拮抗作用的機(jī)制主要是：①競(jìng)爭(zhēng)黏附作用使外來致病菌不能定植。②產(chǎn)生有害代謝產(chǎn)物，有些菌可產(chǎn)生H2O2而殺傷其他細(xì)菌③營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)作用2． 營(yíng)養(yǎng)作用：如大腸埃希菌產(chǎn)生維生素K和維生素B族。3． 免疫作用：正常菌群作為抗原既能促進(jìn)機(jī)體免疫器官的發(fā)育，也可刺激其免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生免疫效應(yīng)物質(zhì)，如雙歧桿菌能誘導(dǎo)產(chǎn)生SIgA4． 抗衰老作用：與其產(chǎn)生過氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)有關(guān)5． 抗腫瘤作用：其作用機(jī)制尚未完全闡明，雙歧桿菌和乳酸桿菌均有抑制腫瘤作用。第二節(jié) 微生態(tài)平衡與失調(diào)微生態(tài)失調(diào)(microdysbiosis)是指正常微生物群與其宿主之間的平衡在外界環(huán)境因素的影響下被破壞，出現(xiàn)平衡失調(diào)狀態(tài)，對(duì)人體有害。微生態(tài)失調(diào)的主要原因：1. 長(zhǎng)期使用廣譜抗生素： 長(zhǎng)期服用廣譜抗生素后，正常菌群中的敏感菌被抑制或殺滅，耐藥菌大量繁殖而致病，即二重感染或重疊感染，系一種菌群失調(diào)癥(dysbacteriosis)。2. 正常菌群寄居部位改變：例如外科手術(shù)時(shí)如消毒不嚴(yán)格，可將患者皮膚黏膜的正常菌群經(jīng)手術(shù)切口帶入血流、腹腔等部位大量繁殖，引起相應(yīng)的疾病。3. 使用免疫抑制劑、激素、射線照射等第三節(jié) 機(jī)會(huì)性感染正常情況下對(duì)人體無害的正常菌群中的微生物，在特定條件下也可引起疾病，稱條件致病菌(conditioned pathogen)或機(jī)會(huì)致病菌(opportunistic pathogen)。機(jī)會(huì)性致病菌來源于人體正常菌群：（1）常住菌（2）暫住菌機(jī)會(huì)致病菌在異常情況下常易引起疾?。C(jī)會(huì)性感染），如大腸埃希菌()是典型的腸道正常菌群成員，但其寄居部位改變時(shí)，可成為泌尿道感染的常見病原體。機(jī)會(huì)性致病菌的主要特點(diǎn)：（1）來源于人體正常菌群，毒力弱或無明顯毒力。（2）常為耐藥菌或多重耐藥菌，如銅綠假單胞菌，白假絲酵母菌等（3）新的機(jī)會(huì)性致病菌不斷出現(xiàn)，如艱難梭菌－假膜性腸炎第四節(jié) 醫(yī)院內(nèi)感染醫(yī)院感染(hospital infection， nosoial infection)指包括醫(yī)院內(nèi)各類人群的感染。分類：內(nèi)源性醫(yī)院感染：由患者本身的機(jī)會(huì)性致病菌導(dǎo)致。外源性醫(yī)院感染：交叉感染，患者－患者，患者－醫(yī)護(hù)人員，侵入性診療技術(shù)，環(huán)境感染等。醫(yī)院內(nèi)感染的微生物－－主要是機(jī)會(huì)致病性微生物。醫(yī)院感染的預(yù)防和控制：一． 消毒滅菌二． 隔離預(yù)防三． 合理使用抗菌藥物（趙蔚明）第七章 消毒與滅菌消毒（disinfection）：殺死物體上病原微生物的方法，并不一定能殺死含芽孢的細(xì)菌或非病原微生物。 滅菌(sterilization): 殺死物體上所有微生物（包括細(xì)菌的芽孢）的方法。抑菌(bacteriostasis)： 抑制體內(nèi)或體外細(xì)菌的生長(zhǎng)。防腐(antisepsis)： 抑制體外細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法。無菌(asepsis)： 不存在任何活的微生物。無菌操作： 防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)。第一節(jié) 物理消毒滅菌法一、熱力滅菌法 高溫對(duì)細(xì)菌有明顯的致死作用蛋白質(zhì)變性；核酸斷裂。（一）干熱滅菌法 ： ：直接用火焰滅菌。 適用于接種環(huán)，試管口等的滅菌。 ：干烤箱，加熱至160170 oC，2h。 適用于高溫下不變質(zhì)、不損壞、不蒸發(fā)的物品。 ：（二） 濕熱滅菌法在同一溫度下比干熱效力大。原因：濕熱中菌體蛋白較易凝固。濕熱的穿透力比干熱大。濕熱的蒸汽有潛熱存在。1. 巴氏消毒法： ，30min。 oC ,1530s, 用于牛乳制品、酒類等的消毒。: 100 oC ： 100 oC ，30min： 100 oC ，30min/次, 連續(xù)3次?？蓺⑺姥堪?，用于不耐熱物品。 （最常用，效果最好）： 高壓蒸氣滅菌器（autoclave）: 溫度: oC ，壓力：,時(shí)間: 15－20 min. 殺死芽胞. 常用于耐高溫、耐濕物品的滅菌, 如培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等。二、輻射殺菌法紫外線殺菌 波長(zhǎng)200300nm的紫外線有殺菌作用， 其中以265266nm作用最強(qiáng)。殺菌機(jī)制：作用于DNA, 形成胸腺嘧啶雙聚體,干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄。殺菌作用特點(diǎn)：穿透力弱，用于空氣消毒和物體表面消毒。適用范圍：手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室的空氣消毒,或不耐熱物品的表面消毒。對(duì)人體皮膚眼睛有損傷。三、過濾除菌法 用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去，達(dá)到無菌目的。除菌的濾膜孔徑: μm, 可除去一般細(xì)菌。四、超聲波消毒法五、干燥與低溫抑菌法 干燥可使菌體內(nèi)的水分逸出，使細(xì)菌生命活動(dòng)停止。 低溫可使細(xì)菌的新陳代謝減慢，影響細(xì)菌的生長(zhǎng)。 冷凍真空干燥法（lyophilization） 第二節(jié) 化學(xué)消毒滅菌法一、化學(xué)消毒劑的殺菌機(jī)制 促進(jìn)菌體蛋白質(zhì)變性或凝固: 如酚類、醇類、重金屬鹽類、酸堿類、醛類等。 干擾細(xì)菌的酶系統(tǒng)和代謝: 如氧化劑、重金屬鹽類。 損傷細(xì)菌細(xì)胞膜: 如酚類表面活性劑、脂溶劑等。二、消毒劑的主要種類: 酚類 — 石炭酸、來蘇、洗必泰等 醇類 乙醇（70－75%）、異丙醇。 重金屬鹽類 硝酸銀、汞 氧化劑 過氧化氫、高錳酸鉀、過氧乙酸、碘酒、漂白粉等。 表面活性劑 新潔爾滅、杜滅芬 烷化劑 甲醛、還氧乙烷、戊二醛等。 染料 龍膽紫 酸堿類 醋酸第三節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素一、消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時(shí)間二、微生物的種類與數(shù)量三、溫度 四、酸堿度五、有機(jī)物 （趙蔚明）第八章 病原學(xué)診斷與防治第一節(jié) 細(xì)菌學(xué)診斷 一、病原菌檢測(cè)(specimens):： 注意涂片鏡檢可初步診斷的病原菌。3．分離與鑒定 （isolation and identification): 是確診最可靠的方法。 主要內(nèi)容： 培養(yǎng)特征－形態(tài)特征－生化反應(yīng)－血清學(xué)鑒定（玻片凝集）－藥物敏感試驗(yàn)－動(dòng)物試驗(yàn)4. 病原菌抗原的檢測(cè)（detection of bacterial antigens）:免疫學(xué)的快速診斷方法：用已知抗體檢測(cè)未知抗原。如 協(xié)同凝集試驗(yàn)， 免疫熒光法 ( IF )，酶免疫測(cè)定（EIA），夾心ELISA 方法等5. 其他檢測(cè)方法： 如分子生物學(xué)方法檢測(cè)細(xì)菌核酸： PCR ，核酸雜交。二、 血清學(xué)診斷已知抗原檢測(cè)血清中未知抗體。血清學(xué)診斷方法有多種：如：凝集試驗(yàn) 、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 中和試驗(yàn) ELISA 等。第二節(jié) 病毒學(xué)診斷 一、標(biāo)本： 低溫保存，盡快送檢二、病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（金標(biāo)準(zhǔn)，但方法復(fù)雜）病毒的三大培養(yǎng)方法： 1）動(dòng)物接種： 2）雞胚（embryonated eggs）培養(yǎng)： 3）細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture)：最常用 細(xì)胞培養(yǎng): 原代細(xì)胞二倍體細(xì)胞傳代細(xì)胞病毒在細(xì)胞中生長(zhǎng)繁殖的指標(biāo)：1) 細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effect,CPE ）: 有些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖時(shí)可引起細(xì)胞發(fā)生特有的形態(tài)學(xué)變化，稱為細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE ）。細(xì)胞常見的形態(tài)學(xué)變化有細(xì)胞變園，聚集，壞死脫落，或者形成多核巨細(xì)胞等。2）包涵體 (inclusion body): 有些病毒在培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)可形成胞質(zhì)或核內(nèi)包涵體。3）紅細(xì)胞吸附：有血凝素（HA）的病毒感染細(xì)胞后，被感染細(xì)胞具有吸附紅細(xì)胞的能力。4）干擾現(xiàn)象：病毒數(shù)量與感染性的測(cè)定：常用方法： 蝕斑測(cè)定法、TCID50測(cè)定法 三、病毒感染的血清學(xué)診斷：中和試驗(yàn)(neutralizing test，NT test)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（plement fixation test,CF test）血凝抑制試驗(yàn)(hemagglutinatia inhibition test, HI test)四、病毒感染的快速診斷：（一）形態(tài)學(xué)檢查： 1．電鏡 觀察病毒顆粒2．光學(xué)顯微鏡－－觀察包涵體，CPE，紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象 等 （二）病毒蛋白抗原檢測(cè)： 免疫熒光法 ( IF ), 酶免疫測(cè)定（EIA），（三）特異性IgM抗體的檢測(cè)（四）病毒核酸檢測(cè) 實(shí)時(shí)定量熒光PCR (real time PCR)，RT PCR， Gene chip第三節(jié) 真菌學(xué)診斷一、標(biāo)本：二、病原真菌的檢查與鑒定：目前的主要鑒定依據(jù)：形態(tài)學(xué)、分離培養(yǎng)：觀察菌絲，孢子： 沙保氏培養(yǎng)基， 觀察真菌菌落的特征:三、 真菌的快速診斷： 1. 血清學(xué)實(shí)驗(yàn)（ELISA、熒