微柱凝膠卡標(biāo)準(zhǔn)操作程序-資料下載頁
2025-07-14 22:01本頁面
【正文】 全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第三版七、新生兒溶血病母體IgG抗體效價(jià)檢測(cè)卡標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP） 當(dāng)孕婦RhD是陰性時(shí)，丈夫RhD是陽性時(shí)一、 準(zhǔn)備工作（一） 微柱凝膠試劑卡的準(zhǔn)備：觀察外觀，如有干膠、雜質(zhì)、氣泡不可使用，之后將卡放置室溫（18－25℃）平衡，再用專用離心機(jī)離心5分鐘。（二）試劑配制：用100ml ， DTT；或吸取2－, 2Me應(yīng)用液。密閉，避光，保存于4℃冰箱內(nèi)，可使用1個(gè)月。（三）標(biāo)本采集：檢查用的血樣為孕婦靜脈血或新生兒臍帶血5ml,一般為不抗凝血，無需空腹。同時(shí)，提供34ml胎兒父親的抗凝血，對(duì)判斷母子血型的配合與否是十分有益的。（四）紅細(xì)胞標(biāo)本的制備：用紅細(xì)胞稀釋液配制紅細(xì)胞懸液，%－1％。（五）血清標(biāo)本的制備：將被檢者靜脈血采入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中，10分鐘后離心，取上清；或者將被檢者靜脈血采入無抗凝劑試管中，4℃放置12小時(shí)，或37℃放置2小時(shí)后離心，2000rpm，10分鐘，取上清。該上清不得有絮狀物或沉淀。取同體積的血清和DTT混勻，37℃孵育30~60分鐘。二、操作步驟在試管加入200ul母體血清和200ul 2Me應(yīng)用液，置37℃水浴，30—60分鐘，以充分破壞血清中的IgM類抗體。 取6只干凈試管，做好標(biāo)記；第1號(hào)管中加入處理后的血清100ul和100ul生理鹽水，混勻（為1：4稀釋）；第26號(hào)管中依次加100ul的生理鹽水和前一號(hào)管中的血清100ul，做倍比稀釋。（1:8/1:16/1:32/1:64/1:128）將卡標(biāo)記好，依次將倍比稀釋50ul血清分別加入標(biāo)記卡中。在所有孔中加入50ul標(biāo)準(zhǔn)O型 %1%紅細(xì)胞(或用O形紅細(xì)胞)懸液，測(cè)定孕婦ABO血型系統(tǒng)以外IgG血型抗體效價(jià)。加樣后的試劑卡，置37℃中孵育15分鐘。用專用離心機(jī)離心5分鐘(900 rpm 2分鐘，1500 rpm 3分鐘), 取出，判定結(jié)果。 三、結(jié)果判定：產(chǎn)生1+凝集的最高稀釋度，其倒數(shù)即為效價(jià)陽性結(jié)果：紅細(xì)胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中。陰性結(jié)果：紅細(xì)胞完全沉降到膠底部，在凝膠管底部形成紅細(xì)胞扣。參考值： Rh系統(tǒng)抗體效價(jià)≥32有臨床意義注：據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道卡式抗人球蛋白法測(cè)出的母體效價(jià)值比聚凝胺和抗人球蛋白試管法高出12個(gè)滴度。四、注意事項(xiàng)紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否則出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。盡可能應(yīng)用當(dāng)日采集的新鮮血做本實(shí)驗(yàn)血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必須充分去除纖維蛋白，否則標(biāo)本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，阻礙紅細(xì)胞沉淀，呈假陽性反應(yīng)。如在微柱凝膠中出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，強(qiáng)烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽性反應(yīng)，也不排除其他原因所致溶血，故對(duì)此標(biāo)本一定認(rèn)真分析，并向上級(jí)主管技術(shù)人員報(bào)告并討論。父親紅細(xì)胞標(biāo)本也可用與其同型的A型或B型紅細(xì)胞代替。每日試驗(yàn)前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。%－1％之間。試劑卡應(yīng)放在1825℃儲(chǔ)存，如若長(zhǎng)期放在4℃冰箱，建議每12個(gè)月取出，用專用離心機(jī)離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。五、參考文獻(xiàn)：《輸血技術(shù)學(xué)》 《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第三版 八、微柱凝膠檢測(cè)卡在實(shí)驗(yàn)室操作的注意事項(xiàng)觀測(cè)卡是否正常：首先看卡內(nèi)的凝膠是否干枯，如干枯應(yīng)放棄使用；凝膠分布是否均勻，抗人球蛋白試劑是否濺到反應(yīng)腔的壁上，這是由于運(yùn)輸時(shí)倒位造成的。建議所有卡先離心約一分鐘再使用。血液標(biāo)本處理：最好是2天以內(nèi)的新鮮血液，時(shí)間過久，紅細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)部分溶血，紅細(xì)胞殘片在離心時(shí)貼到凝膠顆粒上，導(dǎo)致不易判斷或假陽性結(jié)果。若必須用的話：應(yīng)洗滌紅細(xì)胞35次，另外最好設(shè)置對(duì)照管。血清（漿）標(biāo)本要求注意無纖維蛋白絲。它會(huì)堵塞“分子篩”阻止紅細(xì)胞下降，導(dǎo)致假陽性。加樣：應(yīng)加到反應(yīng)腔內(nèi)，槍頭不能插到凝膠內(nèi)。若加樣時(shí)產(chǎn)生明顯的氣泡可以在離心機(jī)上離心幾秒。 紅細(xì)胞懸液濃度：%—1%。從而方便判斷結(jié)果。篩檢細(xì)胞：廠方提供的是4%的紅細(xì)胞，應(yīng)按1：4或1：3稀釋。 在有效期末因部分細(xì)胞溶血，紅細(xì)胞殘片在離心時(shí)貼到凝膠顆粒上端，導(dǎo)致不易判斷或假陽性結(jié)果。在稀釋時(shí)，洗滌細(xì)胞23次。結(jié)果判斷：判為強(qiáng)陽性（4+），凝膠柱下部沒有游離細(xì)胞，3+陽性時(shí)底部可能有極少量紅細(xì)胞，2+和1+陽性時(shí)，底部明顯有紅細(xì)胞，1+時(shí)整個(gè)柱的下部較為混濁。陰性時(shí)，底部紅細(xì)胞扣上部沒有游離紅細(xì)胞。所有反應(yīng)管的上部有一個(gè)反應(yīng)區(qū)，可有少量紅細(xì)胞。參考文獻(xiàn)：《輸血技術(shù)學(xué)》 《臨床檢驗(yàn)操作規(guī)范》第三版19
規(guī)章制度相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1