檢驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)程-資料下載頁
2025-07-14 00:10本頁面
【正文】 抗體和別的紅細(xì)胞產(chǎn)生反應(yīng)形成免疫性的凝集。而由凝聚胺所引起的非免疫性紅細(xì)胞凝集反應(yīng)可被后來加入的復(fù)懸液所中和而散開，如有免疫反應(yīng)，凝集就不會散開，為陽性反應(yīng)。如沒有免疫反應(yīng)，凝集就會散開，為陰性反應(yīng)。交叉配血試驗(yàn)是在鹽水介質(zhì)的基礎(chǔ)上加入凝聚胺，檢測供患之間是否相合，患者血清（漿）中是否含有具臨床意義的紅細(xì)胞異體抗體。[試劑組成]1 潔凈試管，離心機(jī)，顯微鏡。2 % 氯化鈉溶液：準(zhǔn)確稱取氯化鈉（AR） g，用蒸餾水溶解并定容至 1000 ml。試劑啟用后，有效期為：二周。3 聚胺試劑（1）質(zhì)溶液：含葡萄糖，乙二胺四醋酸2鈉及穩(wěn)定劑。（2） 凝聚胺溶液：含凝聚胺，氯化鈉及穩(wěn)定劑。（3）復(fù)懸液：含檸檬酸鈉，葡萄糖及穩(wěn)定劑。（4）陽性對照血清：含抗D血清，氯化鈉及穩(wěn)定劑。4 抗人IgG 血清。[試劑保存和穩(wěn)定性]1．凝聚胺試劑須保存在225℃。2．有效期內(nèi)可使用。3．抗人IgG血清低溫冰箱保存。復(fù)溶后放2—4℃冰箱保存。[標(biāo)本收集和準(zhǔn)備]1．抽取受血者靜脈血34ml（操作中小心防止紅細(xì)胞破損），放入一已貼標(biāo)簽干燥潔凈的試管中為血清管(也可用EDTAK2抗凝血液)，并將注射器中余下的少量血液配成2%紅細(xì)胞生理鹽水懸液，放入另一已貼標(biāo)簽干燥潔凈的試管中為紅細(xì)胞懸液管。以上標(biāo)本有效期為三天；若受血者抽取標(biāo)本后，輸用過血液或血液制品，且輸用時間超過12 小時的，必須重新采集標(biāo)本。2．2% 紅細(xì)胞懸液：用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次。根據(jù)下表進(jìn)行紅細(xì)胞懸液的配制。懸液濃度（%） 壓積紅細(xì)胞（滴） 鹽水（滴） 2 1 2ml(40) 5 1 (16)[操作步驟]1． 取出3支試管分別標(biāo)記主，次及對照測試：主測管：加入病人血清（漿）2滴，再加入供血者35%紅細(xì)胞懸液1滴，次測管：加入供血者血清（漿）2滴，再加入病人35%紅細(xì)胞懸液1滴，對照管：加入2滴*4陽性對照血清，再加入供血者35%紅細(xì)胞懸液1滴。2．各加入*，輕輕混勻，于室溫下靜置1分鐘。3．再滴入2滴*2凝聚胺溶液，輕輕混勻，于室溫下靜置15秒。4．3400rpm離心1分鐘，然后把上清液倒掉。5．目測紅細(xì)胞有無變成凝塊，如果沒有凝塊，則必須重做，（請看注意事項(xiàng)6）。重做后仍然沒有凝集現(xiàn)象出現(xiàn)，可能試劑失效。6．各滴入2滴*3復(fù)懸液，并輕輕混勻，觀察結(jié)果。若為凝聚胺引起的非免疫性凝集，應(yīng)該在1分鐘內(nèi)散開；若是異體抗體所引起的免疫性凝集，則不會散開。7．倒在玻片上用顯微鏡觀察有無凝集。如有凝集反應(yīng)，表示不合，此供血者的血液不適合病人使用；如無凝集反應(yīng)，表示供血者的血液適合病人輸注。如果想進(jìn)一步檢測AntiK抗體，則必須繼續(xù)做輔助性的抗球蛋白試驗(yàn)，步驟如下：8．再滴入1滴*3復(fù)懸液。9．用生理鹽水洗紅細(xì)胞3—5次，并把最后一次上清液完全倒干。10．滴入2滴Antihuman IgG血清，并混勻。11．3400rpm離心1分鐘。12．觀察有無凝集反應(yīng)，如果有凝集反應(yīng)，表示有AntiK抗體，則必須進(jìn)一步做抗體沖出試驗(yàn)，供血者的血液不適合病人使用。如果沒有凝集反應(yīng)，為了確保輸血的安全性，須再各添加1滴已知致敏性紅細(xì)胞至所有沒有凝集的試管中，混勻，3400rpm離心1分鐘。正常應(yīng)有2+反應(yīng)。如果沒有凝集反應(yīng)，可能是假陰性，輔助性抗球蛋白試驗(yàn)必須重做。[結(jié)果判斷]1．ABO同型配血，主側(cè)和次側(cè)均無溶血及凝集表示無輸血禁忌，可以輸血。2．如急需輸血但一時無同型血液，作異型配血時（指O型血輸給A，B或AB型，或A，B型血輸給AB型時），主側(cè)無溶血及凝集，但次側(cè)必然有凝集或溶血。[質(zhì)量控制與附注]1．試劑超過有效期或有污染現(xiàn)象出現(xiàn)，即不可使用，必須更換。2．檢驗(yàn)人員必須熟悉操作步驟，尤其是凝聚胺所引起的凝集反應(yīng)，更要特別注意。3．中國人極少有AntiK抗體，但其他人種比例較高，尤其是白種人，所以，當(dāng)病人是其他人種時，為求安全起見，加做輔助性抗球蛋白試驗(yàn)。4．加做輔助性抗球蛋白試驗(yàn)是為了增加檢測AntiK抗體的敏感度，對檢測其他的抗體無幫助。所以，除非想進(jìn)一步檢測AntiK抗體，否則不須做到輔助性抗球蛋白試驗(yàn)。5．在冬天氣溫極低的情況下，操作交叉配血試驗(yàn)，某些病人血清（漿）中可能含有寒冷凝集素等因子而導(dǎo)致假陽性的結(jié)果出現(xiàn)。若有此懷疑，請?jiān)俚稳?滴*3復(fù)懸液，將試管立即置入37 C水浴中輕輕混勻，并在一分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。，可能是標(biāo)本中含有肝素。如洗腎病人的標(biāo)本或其他干擾存在，此時需多加24滴*2凝聚胺溶液以中和肝素或干擾因子。7．% 氯化鈉溶液啟用時，及時貼上啟用時間；超期的溶液要及時更換。使用過程中，懷疑污染到溶液時或配血結(jié)果可疑時，必須更新該溶液。8．受血者標(biāo)本有效期為三天；若受血者抽取標(biāo)本后，輸用過血液或血液制品，且輸用時間超過12 小時的，必須重新采集標(biāo)本。2%紅細(xì)胞懸液要求準(zhǔn)確，必要時用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞后重新配制。9．進(jìn)行交叉配血前逐項(xiàng)核對輸血申請單、受血者和供血者血樣，復(fù)查受血者和供血者ABO血型（正、反定型），并常規(guī)檢查患者Rh（D）血型，正確無誤時可進(jìn)行交叉配血。10．操作過程中，①必須先排好試管，并做好標(biāo)記；②每進(jìn)行一步操作，必須進(jìn)行一次核對。11．結(jié)果判斷必須先肉眼觀察，再進(jìn)行顯微鏡觀察。注意觀察弱凝集和排除非特異性凝集。12．交叉配血試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有不配合時，首先應(yīng)考慮受血者和供血者的ABO血型和Rh(D)血型定型是否錯誤，必要時進(jìn)行抗體篩檢。其次，應(yīng)注意有無特異性同種抗體，特異性未知的同種抗體存在，或者患者的血清在室溫37℃或抗球蛋白血清中凝集所有的其他紅細(xì)胞，造成交叉配血的困難，應(yīng)進(jìn)一步作有關(guān)試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。13．兩人值班時，交叉配血試驗(yàn)由兩人互相核對；一人值班時，操作完畢后自己復(fù)核，并填寫配血試驗(yàn)結(jié)果。（按“交叉配血核對制度”進(jìn)行）。14．各供血者間需進(jìn)行交叉配血；已經(jīng)輸注的血液不足24 小時的，供血者間也需進(jìn)行交叉配血。15．交叉配血后的所標(biāo)本加蓋后，冰箱保存不少于7 天。第 19 頁 共 19 頁
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