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檢驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)程-資料下載頁(yè)

2025-07-14 00:10本頁(yè)面
  

【正文】 抗體和別的紅細(xì)胞產(chǎn)生反應(yīng)形成免疫性的凝集。而由凝聚胺所引起的非免疫性紅細(xì)胞凝集反應(yīng)可被后來(lái)加入的復(fù)懸液所中和而散開(kāi),如有免疫反應(yīng),凝集就不會(huì)散開(kāi),為陽(yáng)性反應(yīng)。如沒(méi)有免疫反應(yīng),凝集就會(huì)散開(kāi),為陰性反應(yīng)。交叉配血試驗(yàn)是在鹽水介質(zhì)的基礎(chǔ)上加入凝聚胺,檢測(cè)供患之間是否相合,患者血清(漿)中是否含有具臨床意義的紅細(xì)胞異體抗體。[試劑組成]1 潔凈試管,離心機(jī),顯微鏡。2 % 氯化鈉溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)取氯化鈉(AR) g,用蒸餾水溶解并定容至 1000 ml。試劑啟用后,有效期為:二周。3 聚胺試劑(1)質(zhì)溶液:含葡萄糖,乙二胺四醋酸2鈉及穩(wěn)定劑。(2) 凝聚胺溶液:含凝聚胺,氯化鈉及穩(wěn)定劑。(3)復(fù)懸液:含檸檬酸鈉,葡萄糖及穩(wěn)定劑。(4)陽(yáng)性對(duì)照血清:含抗D血清,氯化鈉及穩(wěn)定劑。4 抗人IgG 血清。[試劑保存和穩(wěn)定性]1.凝聚胺試劑須保存在225℃。2.有效期內(nèi)可使用。3.抗人IgG血清低溫冰箱保存。復(fù)溶后放2—4℃冰箱保存。[標(biāo)本收集和準(zhǔn)備]1.抽取受血者靜脈血34ml(操作中小心防止紅細(xì)胞破損),放入一已貼標(biāo)簽干燥潔凈的試管中為血清管(也可用EDTAK2抗凝血液),并將注射器中余下的少量血液配成2%紅細(xì)胞生理鹽水懸液,放入另一已貼標(biāo)簽干燥潔凈的試管中為紅細(xì)胞懸液管。以上標(biāo)本有效期為三天;若受血者抽取標(biāo)本后,輸用過(guò)血液或血液制品,且輸用時(shí)間超過(guò)12 小時(shí)的,必須重新采集標(biāo)本。2.2% 紅細(xì)胞懸液:用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次。根據(jù)下表進(jìn)行紅細(xì)胞懸液的配制。懸液濃度(%) 壓積紅細(xì)胞(滴) 鹽水(滴) 2 1 2ml(40) 5 1 (16)[操作步驟]1. 取出3支試管分別標(biāo)記主,次及對(duì)照測(cè)試:主測(cè)管:加入病人血清(漿)2滴,再加入供血者35%紅細(xì)胞懸液1滴,次測(cè)管:加入供血者血清(漿)2滴,再加入病人35%紅細(xì)胞懸液1滴,對(duì)照管:加入2滴*4陽(yáng)性對(duì)照血清,再加入供血者35%紅細(xì)胞懸液1滴。2.各加入*,輕輕混勻,于室溫下靜置1分鐘。3.再滴入2滴*2凝聚胺溶液,輕輕混勻,于室溫下靜置15秒。4.3400rpm離心1分鐘,然后把上清液倒掉。5.目測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)變成凝塊,如果沒(méi)有凝塊,則必須重做,(請(qǐng)看注意事項(xiàng)6)。重做后仍然沒(méi)有凝集現(xiàn)象出現(xiàn),可能試劑失效。6.各滴入2滴*3復(fù)懸液,并輕輕混勻,觀察結(jié)果。若為凝聚胺引起的非免疫性凝集,應(yīng)該在1分鐘內(nèi)散開(kāi);若是異體抗體所引起的免疫性凝集,則不會(huì)散開(kāi)。7.倒在玻片上用顯微鏡觀察有無(wú)凝集。如有凝集反應(yīng),表示不合,此供血者的血液不適合病人使用;如無(wú)凝集反應(yīng),表示供血者的血液適合病人輸注。如果想進(jìn)一步檢測(cè)AntiK抗體,則必須繼續(xù)做輔助性的抗球蛋白試驗(yàn),步驟如下:8.再滴入1滴*3復(fù)懸液。9.用生理鹽水洗紅細(xì)胞3—5次,并把最后一次上清液完全倒干。10.滴入2滴Antihuman IgG血清,并混勻。11.3400rpm離心1分鐘。12.觀察有無(wú)凝集反應(yīng),如果有凝集反應(yīng),表示有AntiK抗體,則必須進(jìn)一步做抗體沖出試驗(yàn),供血者的血液不適合病人使用。如果沒(méi)有凝集反應(yīng),為了確保輸血的安全性,須再各添加1滴已知致敏性紅細(xì)胞至所有沒(méi)有凝集的試管中,混勻,3400rpm離心1分鐘。正常應(yīng)有2+反應(yīng)。如果沒(méi)有凝集反應(yīng),可能是假陰性,輔助性抗球蛋白試驗(yàn)必須重做。[結(jié)果判斷]1.ABO同型配血,主側(cè)和次側(cè)均無(wú)溶血及凝集表示無(wú)輸血禁忌,可以輸血。2.如急需輸血但一時(shí)無(wú)同型血液,作異型配血時(shí)(指O型血輸給A,B或AB型,或A,B型血輸給AB型時(shí)),主側(cè)無(wú)溶血及凝集,但次側(cè)必然有凝集或溶血。[質(zhì)量控制與附注]1.試劑超過(guò)有效期或有污染現(xiàn)象出現(xiàn),即不可使用,必須更換。2.檢驗(yàn)人員必須熟悉操作步驟,尤其是凝聚胺所引起的凝集反應(yīng),更要特別注意。3.中國(guó)人極少有AntiK抗體,但其他人種比例較高,尤其是白種人,所以,當(dāng)病人是其他人種時(shí),為求安全起見(jiàn),加做輔助性抗球蛋白試驗(yàn)。4.加做輔助性抗球蛋白試驗(yàn)是為了增加檢測(cè)AntiK抗體的敏感度,對(duì)檢測(cè)其他的抗體無(wú)幫助。所以,除非想進(jìn)一步檢測(cè)AntiK抗體,否則不須做到輔助性抗球蛋白試驗(yàn)。5.在冬天氣溫極低的情況下,操作交叉配血試驗(yàn),某些病人血清(漿)中可能含有寒冷凝集素等因子而導(dǎo)致假陽(yáng)性的結(jié)果出現(xiàn)。若有此懷疑,請(qǐng)?jiān)俚稳?滴*3復(fù)懸液,將試管立即置入37 C水浴中輕輕混勻,并在一分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。,可能是標(biāo)本中含有肝素。如洗腎病人的標(biāo)本或其他干擾存在,此時(shí)需多加24滴*2凝聚胺溶液以中和肝素或干擾因子。7.% 氯化鈉溶液?jiǎn)⒂脮r(shí),及時(shí)貼上啟用時(shí)間;超期的溶液要及時(shí)更換。使用過(guò)程中,懷疑污染到溶液時(shí)或配血結(jié)果可疑時(shí),必須更新該溶液。8.受血者標(biāo)本有效期為三天;若受血者抽取標(biāo)本后,輸用過(guò)血液或血液制品,且輸用時(shí)間超過(guò)12 小時(shí)的,必須重新采集標(biāo)本。2%紅細(xì)胞懸液要求準(zhǔn)確,必要時(shí)用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞后重新配制。9.進(jìn)行交叉配血前逐項(xiàng)核對(duì)輸血申請(qǐng)單、受血者和供血者血樣,復(fù)查受血者和供血者ABO血型(正、反定型),并常規(guī)檢查患者Rh(D)血型,正確無(wú)誤時(shí)可進(jìn)行交叉配血。10.操作過(guò)程中,①必須先排好試管,并做好標(biāo)記;②每進(jìn)行一步操作,必須進(jìn)行一次核對(duì)。11.結(jié)果判斷必須先肉眼觀察,再進(jìn)行顯微鏡觀察。注意觀察弱凝集和排除非特異性凝集。12.交叉配血試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有不配合時(shí),首先應(yīng)考慮受血者和供血者的ABO血型和Rh(D)血型定型是否錯(cuò)誤,必要時(shí)進(jìn)行抗體篩檢。其次,應(yīng)注意有無(wú)特異性同種抗體,特異性未知的同種抗體存在,或者患者的血清在室溫37℃或抗球蛋白血清中凝集所有的其他紅細(xì)胞,造成交叉配血的困難,應(yīng)進(jìn)一步作有關(guān)試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。13.兩人值班時(shí),交叉配血試驗(yàn)由兩人互相核對(duì);一人值班時(shí),操作完畢后自己復(fù)核,并填寫(xiě)配血試驗(yàn)結(jié)果。(按“交叉配血核對(duì)制度”進(jìn)行)。14.各供血者間需進(jìn)行交叉配血;已經(jīng)輸注的血液不足24 小時(shí)的,供血者間也需進(jìn)行交叉配血。15.交叉配血后的所標(biāo)本加蓋后,冰箱保存不少于7 天。第 19 頁(yè) 共 19 頁(yè)
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