利用實(shí)時定量pcr和2ct法分析基因相對表達(dá)量-資料下載頁
2025-06-30 18:39本頁面
【正文】 所描述的一樣， 相對量通常和內(nèi)標(biāo)和參照樣本一起計算而很少直接用值來表示，除非我們想檢驗重復(fù)樣本之間的差別。為了向大家顯示這一點(diǎn)，我們用 通過 來檢測相同 的 個重復(fù)反應(yīng)。所有反應(yīng)組分在同一管中混好後分裝到 個管中，做實(shí)時 分析，得到了每一個樣本的 值。為了比較樣品間變化，計算了 個樣本的平均177。，如果通過原始值計算，平均 177。 是177。， 為 。但是如果把原始 值用 轉(zhuǎn)化成線性形式，平均177。是 177。 ， 為 。從這個簡單的例子我們可以看出，通過原始值來反映變化是錯誤的，應(yīng)該避免。用－ 將單個數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化成線性形式來說明重復(fù)樣本之間的變化和差異更準(zhǔn)確可靠。. 結(jié)論實(shí)時定量 實(shí)驗設(shè)計和數(shù)據(jù)分析可以采用相對定量和絕對定量兩種方法，研究人員在設(shè)計實(shí)時定量 實(shí)驗分析基因表達(dá)的時候首先要問的一個問題就是：數(shù)據(jù)最後會以一個什么樣的形式得到。如果需要知道絕對的拷貝數(shù)，就必須用絕對定量的方法，否則只需要給出基因表達(dá)相對量就足夠了。相對定量可能比絕對定量要更容易一些，因為它不需要作標(biāo)準(zhǔn)曲線。本文所給出的公式對于每個用相對定量的方法分析基因表達(dá)差異的研究人員都足夠了。下面，我們總結(jié)一下實(shí)驗設(shè)計和評估中的一些重要步驟：選擇一個內(nèi)標(biāo)基因。確定內(nèi)標(biāo)的有效性，確保它不會受到實(shí)驗處理的影響。通過 擴(kuò)增目標(biāo)基因和內(nèi)標(biāo)基因 或 的一系列梯度稀釋模板確保它們的擴(kuò)增效率相同。最後通過－△ 計算將統(tǒng)計數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化成線性形式而不是原始值。參考文獻(xiàn). , . ., , . ., , . ., , . ., , . . () , –.. , . ., , ., , . ., , . ., . ., , . ., , . ., , . ., , , . ., , . . () . . . . , –.. , ., . () . , –.. , . ., , ., , . ., , . . () . , –.. , ., , . ., , ., , . . () . . , –.. , . ., , . ., , . ., , ., , . ., , . . () . . , –. . , . ., , . . () . . , –.. , . ., , . . () . . . , –.. , . ., . () , –.. , ., , ., , ., , ., , ., , . () , –.. , . . . () , –.9 / 9
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