利用實(shí)時(shí)定量pcr和2ct法分析基因相對(duì)表達(dá)量-資料下載頁(yè)
2025-06-30 18:39本頁(yè)面
【正文】 所描述的一樣， 相對(duì)量通常和內(nèi)標(biāo)和參照樣本一起計(jì)算而很少直接用值來(lái)表示，除非我們想檢驗(yàn)重復(fù)樣本之間的差別。為了向大家顯示這一點(diǎn)，我們用 通過(guò) 來(lái)檢測(cè)相同 的 個(gè)重復(fù)反應(yīng)。所有反應(yīng)組分在同一管中混好後分裝到 個(gè)管中，做實(shí)時(shí) 分析，得到了每一個(gè)樣本的 值。為了比較樣品間變化，計(jì)算了 個(gè)樣本的平均177。，如果通過(guò)原始值計(jì)算，平均 177。 是177。， 為 。但是如果把原始 值用 轉(zhuǎn)化成線性形式，平均177。是 177。 ， 為 。從這個(gè)簡(jiǎn)單的例子我們可以看出，通過(guò)原始值來(lái)反映變化是錯(cuò)誤的，應(yīng)該避免。用－ 將單個(gè)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化成線性形式來(lái)說(shuō)明重復(fù)樣本之間的變化和差異更準(zhǔn)確可靠。. 結(jié)論實(shí)時(shí)定量 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)分析可以采用相對(duì)定量和絕對(duì)定量?jī)煞N方法，研究人員在設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)定量 實(shí)驗(yàn)分析基因表達(dá)的時(shí)候首先要問(wèn)的一個(gè)問(wèn)題就是：數(shù)據(jù)最後會(huì)以一個(gè)什么樣的形式得到。如果需要知道絕對(duì)的拷貝數(shù)，就必須用絕對(duì)定量的方法，否則只需要給出基因表達(dá)相對(duì)量就足夠了。相對(duì)定量可能比絕對(duì)定量要更容易一些，因?yàn)樗恍枰鳂?biāo)準(zhǔn)曲線。本文所給出的公式對(duì)于每個(gè)用相對(duì)定量的方法分析基因表達(dá)差異的研究人員都足夠了。下面，我們總結(jié)一下實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和評(píng)估中的一些重要步驟：選擇一個(gè)內(nèi)標(biāo)基因。確定內(nèi)標(biāo)的有效性，確保它不會(huì)受到實(shí)驗(yàn)處理的影響。通過(guò) 擴(kuò)增目標(biāo)基因和內(nèi)標(biāo)基因 或 的一系列梯度稀釋模板確保它們的擴(kuò)增效率相同。最後通過(guò)－△ 計(jì)算將統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化成線性形式而不是原始值。參考文獻(xiàn). , . ., , . ., , . ., , . ., , . . () , –.. , . ., , ., , . ., , . ., . ., , . ., , . ., , . ., , , . ., , . . () . . . . , –.. , ., . () . , –.. , . ., , ., , . ., , . . () . , –.. , ., , . ., , ., , . . () . . , –.. , . ., , . ., , . ., , ., , . ., , . . () . . , –. . , . ., , . . () . . , –.. , . ., , . . () . . . , –.. , . ., . () , –.. , ., , ., , ., , ., , ., , . () , –.. , . . . () , –.9 / 9
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