【正文】 量瓶；250ml 錐形瓶；50ml 量瓶；5ml移液管和5ml吸管；1ml；10ml量筒；125ml分液漏斗；水浴鍋等。4 檢驗(yàn)步驟 鹽酸滴定液（1mol/l）的配制與標(biāo)定 鹽酸滴定液（1mol/l）的配制取鹽酸90ml，加水至1000ml，搖勻即得。 甲基紅—溴甲酚綠乙醇混合指示液的配制%甲基紅乙醇溶液20ml，搖勻即得。 鹽酸滴定液（1mol/l）的標(biāo)定取270—300℃，加水50ml使溶解，加甲基紅—溴甲酚綠混合指示液10滴，將待標(biāo)定的鹽酸滴定液滴入制備好的碳酸鈉溶液中至溶液由綠色變成紫紅色，煮沸2分鐘，冷卻至室溫，繼續(xù)滴定至溶液由綠色變?yōu)榘底仙Ｃ?ml的鹽酸滴定液（1mol/l），算出鹽酸滴定液的濃度，用F值表示。記錄如下： 1 2 3基準(zhǔn)物+稱量瓶重第一次干燥后重（g）基準(zhǔn)物+稱量瓶重第二次干燥后重（g）傾出基準(zhǔn)物后稱量瓶重（g）基準(zhǔn)無水碳酸鈉重（g）鹽酸滴定液初讀數(shù)（ml）鹽酸滴定液終讀數(shù)（ml）鹽酸滴定液消耗數(shù)（ml） F= W247。（VT）W=稱取的基準(zhǔn)無水碳酸鈉的量（mg）；V=滴定時(shí)消耗的鹽酸ml數(shù)。T=鹽酸滴定液（1mol/l）對(duì)基準(zhǔn)無水碳酸鈉的滴定度mg/ml。標(biāo)定一般要做3份，%。 氫氧化鈉滴定液（1mol/l）的配制取氫氧化鈉106g，加水100ml，振搖使溶解成飽合溶液，冷卻后，置聚乙烯塑料瓶中，靜置數(shù)日，取澄清的氫氧化鈉飽合溶液56ml，加新煮沸過的冷水使成1000ml，搖勻。 甲醛溶液的含量測(cè)定取甲醛溶液（GR或AR），精密稱定，置錐形瓶中，加水10ml，溴麝香草酚藍(lán)指示液2滴，滴加氫氧化鈉滴定液（1mol/l）至溶液呈藍(lán)色，加過氧化氫試液25ml，再精密加入氫氧化鈉滴定液（1mol/l）25ml，瓶口置一小漏斗，在水浴上加熱5分鐘，不時(shí)振搖，冷卻，用水洗滌漏斗，加溴麝香草酚藍(lán)指示液2滴，用鹽酸滴定液（1mol/l）滴定至溶液顯黃色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，即得。每1ml的氫氧化鈉滴定液（1mol/l）?？瞻自囼?yàn) 取過氧化氫試液25ml和精密量取氫氧化鈉滴定液（1mol/l）25ml，置錐形瓶中，加水10ml與溴麝香草酚藍(lán)指示液2滴，用鹽酸滴定液(1mol/l)滴定至溶液顯黃色。 1 2 3空白試驗(yàn)供試品+滴瓶重（g）/滴出供試品后+滴瓶重（g）/稱取供試品重（g）/鹽酸滴定液初讀數(shù)（ml）鹽酸滴定液終讀數(shù)（ml）鹽酸滴定液消耗數(shù)（ml）含量計(jì)算：甲醛含量=TF（V空—V滴）247。W100%V空白=空白滴定消耗鹽酸滴定液的ml數(shù) V滴=滴定消耗鹽酸滴定液的ml數(shù)F=鹽酸滴定液的濃度校正因素T=每1ml氫氧化鈉滴定液（1mol/l）相當(dāng)于甲醛的mg數(shù)， 對(duì)照品溶液的配制取上述已測(cè)定含量的甲醛溶液適量，精密稱定，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取上述溶液5ml于50ml量瓶中，加20%吐溫—80乙醇溶液10ml，再加水至刻度。配制對(duì)照品溶液時(shí)所取已測(cè)定含量的甲醛溶液的量可用下公式計(jì)算： W=247。P%100W=取已測(cè)定含量的甲醛溶液的量（mg） P%=測(cè)定的甲醛溶液的含量 試液制備 醋酸——醋酸銨緩沖液（）醋酸液 醋酸（AR）。醋酸銨液 醋酸銨（AR）。醋酸液40ml 與醋酸銨液1000ml混合，置冷暗處保存。 乙酰丙酮試液乙酰丙酮（AR）7ml，加乙醇14ml混合，加水至1000ml。 供試品溶液的制備用5ml刻度吸管量取本品5ml，置50ml量瓶中，用20吐溫—80乙醇溶液10ml，分次洗滌吸管，洗液并入50ml量瓶中，搖勻，加水稀釋至刻度，強(qiáng)烈振搖，靜置分層，下層液如不澄清，過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液即得。 檢驗(yàn)法，分別加醋酸—醋酸銨緩沖液10ml，乙酰丙酮試液10ml，混勻，置60℃恒溫水浴15分鐘，冷水冷卻5分鐘，放置20分鐘后，按分光光度法，在410nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收值并記入下表。 記錄與計(jì)算甲醛（按40%計(jì)）含量%=(247。)(A1247。A2)A1 供試品溶液的吸收度 A2對(duì)照品溶液的吸收度 對(duì)照品溶液的濃度% (按40%計(jì)) 結(jié)果判定將檢驗(yàn)結(jié)果與產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比，按照產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定進(jìn)行判定。5 檢驗(yàn)法 ，，只60℃恒溫水浴15分鐘，冷水冷卻5分鐘，放置20分鐘后，照《分光光度法》進(jìn)行，在410nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。 甲醛溶液（40%）含量%(g/ml)=（供試品溶液的吸收度/對(duì)照品溶液的吸收度）%附注：試液制備1 醋酸 醋酸銨緩沖液()醋酸液 醋酸（AR）。醋酸銨液 醋酸銨（AR）。醋酸液40ml與醋酸銨液1000ml混合，只冷暗處保存。2 乙酰丙酮試液 乙酰丙酮(AR)7ml，加乙醇14ml混合，加水至1000ml。甲醛溶液含量標(biāo)定 ，精密稱定，置錐形瓶中，加水10ml，與溴麝香草酚蘭指示液2滴，滴加氫氧化鈉滴定液（1mol/L）至溶液呈藍(lán)色，加過氧化氫試液25ml，瓶口置一玻璃小漏斗，在水浴上加熱15分鐘，不時(shí)振搖，冷卻，用水洗滌漏斗，加溴麝香草酚蘭指示液2滴，用鹽酸滴定液（1mol/L)滴定至溶液顯黃色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的氫氧化鈉滴定液（1mol/L）10. EID50測(cè)定法1 技術(shù)依據(jù)及原理病毒含量的高低直接反映了產(chǎn)品的質(zhì)量，因此用雞胚接種測(cè)定病毒含量可作為判定產(chǎn)品質(zhì)量的依據(jù)。2 注意事項(xiàng) 所用雞胚必須為SPF或健康易感雞胚 嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作。3 材料、儀器、試劑的準(zhǔn)備及基本要求 儀器及設(shè)備 溫箱。 試劑 滅菌生理鹽水，雞紅細(xì)胞懸液。 檢驗(yàn)器具 試管，吸管(1ml，5ml，10ml)，注射器(1m1)，50孔板，記號(hào)筆。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF雞胚或健康易感雞胚 樣品 每批樣品1瓶 其他 檢驗(yàn)記錄紙、筆4 檢驗(yàn)步驟 隨機(jī)抽取檢品1瓶，放置在操作臺(tái)上。 準(zhǔn)備好試管和吸管等試驗(yàn)器具。 取一定數(shù)量的試管依次排列到試管架上，分別標(biāo)明0、2等。 。 將生理鹽水加入到疫苗瓶中，按檢品瓶簽注明的羽份加入適量生理鹽水， ml加到0試管中(1羽份／)，以此為基礎(chǔ)進(jìn)行10倍系列稀釋，根據(jù)檢品的種類和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)確定合適的稀釋滴度。 選取9～10日齡雞胚，作好蛋殼表面消毒后，打眼。取后三個(gè)稀釋度，經(jīng)雞胚尿囊腔途徑接種，每個(gè)稀釋度接種雞胚5枚，接種后用石蠟密封接種孔并置37186。C繼續(xù)孵化。 每日照蛋兩次，接種后24小時(shí)前（雞新城疫低毒力活疫苗為接種后48h前）死亡雞胚作為非特異死亡胚棄去不記，以后隨時(shí)取出死亡雞胚，放4～8186。C冷藏。 根據(jù)檢品的種類和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求確定雞胚的觀察時(shí)間，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，檢查雞胚病變，或吸取尿囊液作紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)以判定雞胚是否感染。5 安全措施檢驗(yàn)過程中注意防止對(duì)檢驗(yàn)人員和環(huán)境的污染，檢驗(yàn)人員必須穿戴工作服和口罩，滴灑在操作臺(tái)、地面的產(chǎn)品要進(jìn)行消毒處理，檢驗(yàn)完畢后開封的產(chǎn)品、用過的器具、雞胚和廢棄液體要經(jīng)過高壓滅菌處理。6 記錄與計(jì)算詳細(xì)記錄檢驗(yàn)過程和結(jié)果，并根據(jù)雞胚感染數(shù)按照以下公式(Karber氏法)計(jì)算檢品的EID50。LogEID50＝L－d（S－） L＝最高濃度接種組稀釋度的對(duì)數(shù) d＝相鄰稀釋度對(duì)數(shù)之差 S＝各稀釋度(劑量組)雞胚感染陽性胚比率之和7 結(jié)果判定將檢驗(yàn)結(jié)果與產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比，按照產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定進(jìn)行判定。1 技術(shù)依據(jù)及原理病毒含量的高低直接反映了產(chǎn)品的質(zhì)量，因此用雞胚接種測(cè)定病毒含量可作為判定產(chǎn)品質(zhì)量的依據(jù)。2 注意事項(xiàng) 所用雞胚必須為SPF雞胚或健康易感雞胚。 嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作。3 材料、儀器、試劑的準(zhǔn)備及基本要求 儀器及設(shè)備 孵化器，微量震蕩器 試劑 滅菌生理鹽水，雞紅細(xì)胞懸液 檢驗(yàn)器具 試管，吸管(1ml，5ml，10ml)，注射器(1ml)，50孔板，記號(hào)筆。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF雞胚或健康易感雞胚。 樣品 每批樣品1瓶 其他 檢驗(yàn)記錄紙、筆4 檢驗(yàn)步驟 隨機(jī)抽取檢品1瓶，放在操作臺(tái)上。 準(zhǔn)備好試管和吸管等試驗(yàn)器具。 取一定數(shù)量的試管依次排列到試管架上，分別標(biāo)明0、2等。 。 將生理鹽水加入到疫苗瓶中，按檢品瓶簽注明的羽份加入適量生理鹽水， ml加到0試管中(1羽份／)，以此為基礎(chǔ)進(jìn)行10倍系列稀釋，根據(jù)檢品的種類和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)確定合適的稀釋滴度。 尿囊腔途徑接種時(shí)選取9～10日齡雞胚，絨毛尿囊膜途徑接種時(shí)選取10～11日齡雞胚，作好蛋殼表面消毒后，打眼或做人工氣室。取后三個(gè)稀釋度，經(jīng)雞胚尿囊腔或絨毛尿囊膜途徑接種，每個(gè)稀釋度接種雞胚5枚，接種后石蠟密封接種孔并置37℃繼續(xù)孵化。 每日照蛋，24小時(shí)前死亡雞胚視為非特異死亡棄去不記，以后隨時(shí)取出死亡雞胚放2～8176。C冷藏。 根據(jù)檢品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)確定雞胚的觀察時(shí)間，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)檢查雞胚是否因接種物引起的特異性死亡，檢驗(yàn)雞新城疫中等毒力活疫苗時(shí)可吸取尿囊液做紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)。5 安全措施檢驗(yàn)過程中注意防止對(duì)檢驗(yàn)人員和環(huán)境的污染，檢驗(yàn)人員必須穿戴工作服和口罩，滴灑在操作臺(tái)、地面的產(chǎn)品要進(jìn)行消毒處理，檢驗(yàn)完畢后開封的產(chǎn)品、器具和廢棄液體要經(jīng)過高壓滅菌處理。6 記錄與計(jì)算詳細(xì)記錄檢驗(yàn)過程，并根據(jù)雞胚特異死亡數(shù)按照以下公式(Karber 氏法)計(jì)算檢品的ELD50。LogELD50＝L－d（S－）L＝最高濃度接種組稀釋度的對(duì)數(shù) d＝相鄰稀釋度對(duì)數(shù)之差 S＝各稀釋度(劑量組)感染死亡雞胚比率之和7 結(jié)果判定 將檢驗(yàn)結(jié)果與產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比，按照產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定進(jìn)行判定。