【導讀】國家高技術研究發(fā)展計劃。課題中期執(zhí)行情況報告。所屬專題/項目：農業(yè)生物藥物創(chuàng)制。課題起止年限：2020年10月至2020年10月。中華人民共和國科學技術部制

　　

【正文】 黃瓜尖孢鐮刀菌 （ 119）培養(yǎng) 48h、 96h、 120h，在加蔗糖培養(yǎng)基菌落生長直徑分別 為為 、 、 ，分別比同期對照組增加 %、 %、 %（圖1圖 17）。 024681048 96 120培養(yǎng)時間 ( h )菌落直徑(cm)不加蔗糖加蔗糖 0102030405048 96 120培養(yǎng)時間( h )增長率(%) 圖 16 黃瓜尖孢鐮刀菌（ 119）菌落生長 圖 17 黃瓜尖孢鐮刀菌（ 119）菌落增長率 甜瓜尖孢鐮刀菌 （ 132）培養(yǎng) 48h、 96h、 120h，在加蔗糖培養(yǎng)基菌落生長直徑分別為為 、 、 ，分別比同期對照組增加 %、 %、 %（圖 1圖 19）。 02468101248 96 120培養(yǎng)時間 ( h )菌落直徑(cm)不加蔗糖加蔗糖 010203040506070809048 96 120培養(yǎng)時間( h )增長率(%) 圖 18 甜瓜尖孢鐮刀菌（ 132）菌落生長 圖 19 甜瓜尖孢鐮刀菌（ 132）菌落增長率 辣椒尖孢鐮刀菌 （ 147）培養(yǎng) 48h、 96h、 120h，在加蔗糖培養(yǎng)基菌落生長直徑分別為為 、 、 ，分別比同期對照組增加 %、 %、 %（圖 圖 21）。 24 024681048 96 120培養(yǎng)時間 ( h )菌落直徑(cm)不加蔗糖加蔗糖 0102030405060708048 96 120培養(yǎng)時間( h )增長率(%) 圖 20 辣椒尖孢鐮刀菌（ 147）菌落生長 圖 21 辣椒尖孢鐮刀菌（ 147）菌落增長率 甜椒尖孢鐮刀菌 （ 149）培養(yǎng) 48h、 96h、 120h，在加蔗糖培養(yǎng)基菌落生長直徑分別為為 、 、 ，分別比同期對照組增加 %、 %、 %（圖2圖 23）。 024681048 96 120培養(yǎng)時間 ( h )菌落直徑(cm)不加蔗糖加蔗糖 0102030405060708048 96 120培養(yǎng)時間( h )增長率(%) 圖 22 甜椒尖孢鐮刀菌（ 149）菌落生長 圖 23 甜椒尖孢鐮刀菌（ 149）菌落生長增長率 尖孢鐮刀菌在不同濃度蔗糖培養(yǎng)基上生長差異， 方差分析表明，尖孢鐮刀菌之間在培養(yǎng) 48h 條件下菌落生長差異顯著（ P），甜瓜菌株（ 132）和黃瓜菌株（ 119）之間差異顯著（ P），其余之間差異不顯著。在培養(yǎng) 96h 條件下，甜瓜菌株（ 132）和辣椒之間差 異極顯著（ P），其余菌株之間差異不顯著。在培養(yǎng) 120h 條件下菌落生長差異極顯著（ P），甜瓜菌株（ 132）和辣椒之間差異極顯著（ P），其余菌株之間差異不顯著 ,表明供試尖孢鐮刀菌在不同蔗糖濃度培養(yǎng)基上菌落直徑變化存在差異，菌落生長趨勢相近。綜上所述， 不同蔗糖濃度的培養(yǎng)基上尖孢鐮刀菌的生長在培養(yǎng) 48 h， 96 h 和 120 h 后測定其菌落直徑，在總體變化趨勢上是相同的，都隨著培養(yǎng)之間的增加，菌落直徑逐漸增大。除甜瓜菌株 (132)對蔗糖的利用率較高外，其他菌株菌落生長差異不大。說明培養(yǎng)基 中蔗糖含量由 1%增加到 6%時，除個別菌株外，對尖孢鐮刀菌的生長影響趨向同質。 蔗糖濃度對尖孢鐮刀菌生長的影響結果表明，尖孢鐮刀菌在加蔗糖和不加蔗糖培養(yǎng)基上菌落生長差異極顯著，加蔗糖組尖孢鐮刀菌比未加蔗糖的對照組生長速度快。培養(yǎng) 48h，加蔗糖組的各菌株菌落直徑比對照增加 %%；培養(yǎng) 96h，加蔗糖組的各菌株菌落直徑比對照增加%%；培養(yǎng) 120h，加蔗糖組的各菌株菌落直徑比對照增加 %%。 聚類分析結果表明，當 λ=，可將菌株分為 3 類，第 1 類 包括了 （ 107）和 （ 119），分別采至班兜和黃瓜寄主，其特點表現為對蔗糖利用率較低；第 2 類包括了 （ 149）和 （ 147），分別采至甜椒班兜和辣椒寄主，其特點表現為對蔗糖利用率中等；第 3 類包括了 （ 132），采至甜瓜寄主，其特點表現為對蔗 25 糖利用率較高。 培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分對尖孢鐮刀 菌生長發(fā)育有著重要的影響。據報道碳氮比對于尖到鐮刀菌色素的形成和孢子的長度、分隔都有影響。通常低 C/N 產生短而分隔少的孢子；而在相反的情況下，高C/N 則形成較長的孢子，并增多孢子的分隔。 培養(yǎng)基成份中影響最大的是碳源，其次是氮源。在碳源中，蔗糖、乳糖和淀粉比葡萄糖有利于尖孢鐮刀菌的產孢。王拱 辰等 (1995) 選用硝酸鉀、磷酸二氫鉀，再加維生素 B 和 C 組成 VBC 培養(yǎng)基，結果證明能促進多數尖孢鐮刀菌產孢。 Bilai39。s 培養(yǎng)基和VBC 培養(yǎng)基營養(yǎng)成份均較全面，都是較好地適應尖孢鐮刀菌產孢的培養(yǎng)基（王拱辰等， 1995）。 為研究培養(yǎng)基營養(yǎng)成分對尖孢鐮刀菌生長的影響，試驗選用 Bilai39。s 培養(yǎng)基和 VBC 培養(yǎng)基兩種培養(yǎng)基，改變 碳源和氮源比例，采用固體平板培養(yǎng)法， 研究不同營養(yǎng)條件對尖胞鐮刀菌產孢的影響。研究過程將尖孢鐮刀菌多細胞分生孢子定義為大型分生孢子，單細胞分生孢子定義為小型分生孢子。分析不同營養(yǎng)條件下小型分生孢子的產生特性。供試菌株為從黃瓜上分離到的尖孢鐮刀菌菌株（菌株編號 119）、 （菌株編號 120）、 （菌株編號 123）， 從甜瓜上分離到的尖胞鐮刀菌菌株 （菌株編號 130），從西瓜上分離到的尖胞鐮刀菌菌株 西瓜（菌株編號 142）。在培養(yǎng)基設計上， Bilai39。s 培養(yǎng)基和 VBC為基礎，設計培養(yǎng)基配方， (A)全糖型采用 Bilai39。s 培養(yǎng)基， (B)淀粉型將 Bilai39。s 培養(yǎng)基中蔗糖和葡萄糖成分取消， (C)低糖型將 Bilai39。s 培養(yǎng)基中葡萄糖和蔗糖含量減半， (D)尿素型將 Bilai39。s 培養(yǎng)基中 KNO3更換為尿素， (E)低氮型將 Bilai39。s 培養(yǎng)基中 KNO3 含量減半， (F)VBC 型采用 VBC 培養(yǎng)基 (表 8)。 表 11 尖孢鐮刀菌培養(yǎng)基營養(yǎng)成分設計 類型 營養(yǎng)成分配方 (A)全糖型 KH2PO41g； KNO31g； ； ；淀粉 ；葡萄糖 ；蔗糖 ；蒸餾水 1L。 (B)淀粉型 KH2PO41g； KNO31g； ； ；淀粉 ；蒸餾水 1L。 (C)低糖型 KH2PO41g； KNO31g； ； ；淀粉 ；葡萄糖 ；蔗糖 ；蒸餾水 1L。 (D)尿素型 KH2PO41g；尿素 1g； ； ；淀粉 ；葡萄糖 ；蔗糖 ；蒸餾水 1L。 (E)低氮型 KH2PO41g； ； ； ；淀粉 ；葡萄糖 ；蔗糖 ；蒸餾水 1L。 (F)VBC 型 KH2PO41g； KNO31g；復合維生素 B1 片；維生素 C1 片；蒸餾水 1L。 5 株菌株分別于 PSA 平板上培養(yǎng) 7d 后，用直徑為 6mm 的打孔器切取大小均一的菌片。將菌片分別接于不同營養(yǎng)成分的固體平板培養(yǎng)基中央，每個培養(yǎng)皿放 5 塊菌片 ,每個處理重復 5 次。測定培養(yǎng) 5d、 7d 的菌落直徑大小；從 7d 開始，從平板的菌落大致相同的位置打取 10 塊菌片，置于 10mL的含玻璃珠的無菌水中，充分振蕩，分別計數各菌株的產孢量及小型分生孢子比例，觀察不同培養(yǎng)基狀態(tài)下的孢子形態(tài)變化。菌株 119 于 PSA 平板上培養(yǎng) 7d 后，刮下菌絲于 100mL 無菌水中，充分振勻，用雙層紗布過濾兩遍制成孢子懸液備用； 配制 上述不同成分的培養(yǎng)基（ AF）， 用 250mL 的三角瓶每瓶盛 50mL 培養(yǎng)液，高壓滅菌，待培養(yǎng)基冷卻后，各加入 1mL 已備好的鐮刀菌孢子懸浮液，另留瓶作空白對照。然后將接菌的三角瓶置于 25℃ 下， 120r/min 搖床中培養(yǎng)，光照控制為光暗交替12h： 12h，培養(yǎng)至第 1 1 15d 時，各出取 3 瓶檢測，分別計數大型和小型孢子數。以上實驗用于分析培養(yǎng)基營養(yǎng)成分對 尖孢鐮刀菌落 生長的影響，培養(yǎng)基營養(yǎng)成分對大型分生孢子產孢量的影響，培養(yǎng)基營養(yǎng)成分對大、小型 分生孢子產生比例的影響， 培養(yǎng)基營養(yǎng)成分對小型 胞分生孢子產孢量 的影響。 26 試驗結果見表 12 和圖 24。不同營養(yǎng)條件對黃瓜上分離的尖孢鐮刀菌及對黃瓜、甜瓜、西瓜三種作物上分離的鐮刀菌菌落生長速度差異顯著；以 119 菌株培養(yǎng) 5 天為例，直觀比較菌絲生長的濃密度遞減順序為 D 培養(yǎng)基 E 培養(yǎng)基 C 培養(yǎng)基 F 培養(yǎng)基 A 培養(yǎng)基 B 培養(yǎng)基。不同菌株間的差異與菌株本身的生長特性有關。 表 12 不同培養(yǎng)基條件下尖孢鐮刀菌菌落的生長速度 供試 培養(yǎng)基 菌落直徑大?。?cm） 5d 7d 119 120 123 130 142 119 120 123 130 142 (A)全糖型 (B)淀粉型 (C)低糖型 (D)尿素型 (E)低氮型 (F)VBC 型 將培養(yǎng) 5d 的不同菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落直徑進行方差分析， 不同培養(yǎng)基和不同尖孢鐮刀菌的培養(yǎng) 5d 菌落直徑均值和標準差統計見表表 10；不同培養(yǎng)基和不同尖孢鐮刀菌的培養(yǎng) 5d 菌落直徑方差分析見表 10；不同培養(yǎng)基培養(yǎng) 5d 菌落直徑 Tukey 法多重比較見表 11；不同培養(yǎng)基培養(yǎng) 5d 菌落直徑顯著性檢驗見表 12；不同尖孢鐮刀菌培養(yǎng) 5d 菌落直徑 Tukey 法多重比較見表 13；不同尖孢鐮刀菌培養(yǎng) 5d 菌落直徑顯著性檢驗見表 14。生長 7d 后的菌落直徑情況類似 ，不作分析。 (A)全糖型 培養(yǎng)基 (B)淀粉型 培養(yǎng)基 (C)低糖型 培養(yǎng)基 (D)尿素型 培養(yǎng)基 (E)低氮型 培養(yǎng)基 (F)VBC 型 培養(yǎng)基 圖 24 不同培養(yǎng)基條件下培養(yǎng) 5d 的尖孢鐮刀菌 119 菌株菌落形態(tài) 表 12 不同培養(yǎng)基和不同尖孢鐮刀菌的培養(yǎng) 5d 菌落直徑均值和標準差 培養(yǎng)基類型 均值 標準差 (A)全糖型 (B)淀粉型 (C)低糖型 (D)尿素型 (E)低氮型 (F)VBC 型 27 尖孢鐮刀菌菌株 119 120 123 130 142 表 11 不同培養(yǎng)基和不同尖孢鐮刀菌的培養(yǎng) 5d 菌落直徑方差分析表 變異來源 平方和 自由度 均 方 F 值 顯著水平 處理 1 間 （培養(yǎng)基） 5 處理 2 間 （菌株間） 4 誤差 20 總變異 29 表 12 不同培養(yǎng)基培養(yǎng) 5d 菌落直徑 Tukey 法多重比較 (下叁角為均值差 ,上叁角為顯著水平 ) 培養(yǎng)基 均值 (E)低氮型 (F)VBC 型 (D)尿素型 (A)全糖型 (C)低糖型 (B)淀粉型 (E)低氮型 (F)VBC 型 (D)尿素型 (A)全糖型 (C)低糖型 (B)淀粉型 表 13 不同培養(yǎng)基培養(yǎng) 5d 菌落直徑顯著 性檢驗 培養(yǎng)基 均值 5%顯著水平 1%極顯著水平 (E)低氮型 a A (F)VBC 型 a A （ D)尿素型 a A (A)全糖型 a A (C)低糖型 a A (B)淀粉型 a A 方差分析結果表明，不同培養(yǎng)基和不同尖孢鐮刀菌的培養(yǎng) 5d 菌落直徑，在不同培養(yǎng)基之間差異不顯著 (p)，不同培養(yǎng)基培養(yǎng)形成的菌落直徑在 之間；而在不同尖孢鐮刀菌之間差異極顯著（ P），黃瓜尖孢鐮刀菌 （菌株編號 119）菌落直徑為 、（菌株編號 120）為 cm、 （菌株編號 123）為 cm，甜瓜尖胞鐮刀菌菌株 （菌株編號 130）為 cm，西瓜尖胞鐮刀菌（菌株編號 142）為 cm。其中菌落直徑最大的是 130 菌株，最小的是 119菌株。不同寄主菌株之間菌落生長存在差異，同一寄主不同菌株之 間菌落生長也存在差異，這種差異甚至超過不同寄主的菌株。 表 14 不同尖孢鐮刀菌培養(yǎng) 5d 菌落直徑 Tukey 法多重比較 (下叁角為均值差 ,上叁角為顯著水平 ) 菌株 均值 4 3 2 5 1 28 130 123 120 142 119 表 15 不同尖孢鐮刀菌培養(yǎng) 5d 菌落直徑顯著性檢驗 處理 均值 5%顯著水平 1%極顯著水平 130 a A 123 b AB 120 bc BC 142 bc BC 119 c C 培養(yǎng)基營養(yǎng)成分對 尖孢鐮刀菌生長具有很大的影響。 在不同類型培養(yǎng)基上，不同寄主尖孢鐮刀菌菌落生長存在差異，同 一寄主不同菌株之間菌落生長也存在差異，這種差異甚至超過不同寄