【導(dǎo)讀】毒管理辦法》制訂本規(guī)范。本規(guī)范含總則、消毒檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)范、醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范。和疫源地消毒技術(shù)規(guī)范四個(gè)部分。生機(jī)構(gòu)以及傳染病疫源地和其他一切需要消毒的場所。將適當(dāng)載體染以一定量的特定微生物，用于指示消毒或滅菌效果的制品。用于殺滅傳播媒介上的微生物使其達(dá)消毒或滅菌要求的制劑。指僅可殺滅細(xì)菌繁殖體和親脂病毒，達(dá)到消毒要求的制劑。（有效碘及有效溴的定義和表示法與有效氯。消毒劑，使其失去對微生物抑制和殺滅作用的試劑。的集落，稱為菌落形成單位，以其表達(dá)活菌的數(shù)量。在微生物殺滅試驗(yàn)中，用百分率表示微生物數(shù)量減少的值。有傳染源存在時(shí)對其排出的病原體可能污染的環(huán)境和物品及時(shí)進(jìn)行的消毒。傳染源離開疫源地后進(jìn)行的徹底消毒。檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取封閉式布局，建筑應(yīng)便于清潔、消毒。均應(yīng)立即對污染及可能波及的區(qū)域進(jìn)行消毒處理；在理化試驗(yàn)時(shí)，需檢測3批樣品，每批取1個(gè)樣品平行測定2次，取平均值報(bào)告結(jié)果。

　　

【正文】 ，達(dá)到規(guī)定消毒時(shí)間 終點(diǎn)時(shí)，要求立即終止殘留消毒劑的繼續(xù)作用，以便準(zhǔn)確檢測出消毒體系中殘留存活的微生物及其數(shù)量。因?yàn)橄倔w系中殘留的消毒劑，可能對微生物的生長繁殖具有一定抑制作用，從而可導(dǎo)致對殺菌效果偏高的錯(cuò)誤判斷，甚至產(chǎn)生假陰性結(jié)果。殘留消毒劑的去除（下簡稱除藥），可排除殘留消毒劑對微生物的抑制，從而使試驗(yàn)獲得正確結(jié)果。 除藥的原則 （ 1）可有效去除殘留的消毒劑。 （ 2）對微生物無害，不減少微生物應(yīng)有的回收量。 （ 3）不破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份，不影響其透明度。 （ 4）必須按規(guī)定方法進(jìn)行鑒定試驗(yàn)，并認(rèn)為合格者 方可在相應(yīng)的消毒試驗(yàn)中使用。 除藥的方法 （ 1）化學(xué)中和法：又稱中和劑法，是指在消毒劑與微生物作用到達(dá)規(guī)定時(shí)間的終點(diǎn)時(shí)，取樣加于適宜種類和濃度的中和劑中，將殘留消毒劑迅速中和，使其不再持續(xù)抑制或殺滅微生物的方法。本法同時(shí)含有稀釋作用效果（至少 1:1稀釋，常用 1:10稀釋） ， 是最為普遍使用的方法。 對常用消毒劑，雖有一些中和劑介紹，但在實(shí)際應(yīng)用中由于情況多變，效果不一定都理想。所以，在消毒試驗(yàn)前仍應(yīng)將擬用中和劑按試驗(yàn)具體情況，經(jīng)鑒定合格后再使用。 操作要點(diǎn)： ① 對接觸消毒劑的微生物樣本，在達(dá) 到規(guī)定作用時(shí)間，即刻取樣移入鑒定合格的中和劑溶液中； ② 所用中和劑的濃度與容量應(yīng)與鑒定試驗(yàn)結(jié)果規(guī)定的相同； ③ 即刻混勻，并按規(guī)定時(shí)間吸取樣液進(jìn)行隨后的培養(yǎng)檢測； ④ 在將樣本接種培 養(yǎng)基以前的操作，應(yīng)按規(guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行，以免微生物與中和劑或中和產(chǎn)物接觸過久。 （ 2）過濾沖洗法 將經(jīng)消毒劑作用過的微生物樣本，立即加入適量稀釋液中混勻（通過適量稀釋，可減輕消毒劑的持續(xù)作用），并傾入裝有微孔濾膜的濾器內(nèi)，接真空泵抽吸過濾（或加壓過濾）后，再加適量稀釋液沖洗，同時(shí)過濾，可去除殘留的消毒劑。多用于難以找到適宜中和劑的消毒 — 21— 劑試驗(yàn)中 ，如以植物提取物制備的消毒劑。本除藥方法應(yīng)按擬進(jìn)行試驗(yàn)具體情況，經(jīng)鑒定合格后再使用。 操作要點(diǎn)： ① 準(zhǔn)備好裝有相應(yīng)孔徑微孔濾膜的濾器； ② 濾膜及濾器需先經(jīng)滅菌處理； ③初次過濾后，應(yīng)使用一定量對微生物無害的稀釋液進(jìn)行沖洗，沖洗次數(shù)一般以洗凈消毒劑為準(zhǔn)； ④ 最后一次沖洗、濾凈后，將微孔濾膜以無菌操作法取出，進(jìn)行隨后的培養(yǎng)檢測。 （ 3）稀釋法 將經(jīng)消毒劑作用過的微生物樣本，用稀釋液稀釋，降低殘留消毒劑濃度，以消除對微生物的抑制作用。但若稀釋過多，微生物濃度下降，可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。本法可單獨(dú)使用，但更常見的是與其它方法同 時(shí)使用。單獨(dú)使用時(shí)，一般多用于濃度系數(shù)較高的消毒劑（如醇類消毒劑）。本法應(yīng)按擬進(jìn)行試驗(yàn)具體情況，經(jīng)鑒定合格后再使用。 操作要點(diǎn)： ① 對接觸消毒劑的微生物樣本，在達(dá)到規(guī)定作用時(shí)間后，即時(shí)以對微生物無害的稀釋液稀釋，稀釋比例隨試驗(yàn)需要決定； ② 電動 混合或敲打振蕩，使之混勻； ③ 吸取稀釋樣 液進(jìn)行隨后培養(yǎng)檢測。 注意事項(xiàng) （ 1）處理時(shí)應(yīng)嚴(yán)守?zé)o菌操作要求，所有試液須無菌，接觸樣本和試液的器材（如吸管、平皿、試管、濾材等）亦均須經(jīng)滅菌，以免污染樣本，影響試驗(yàn)結(jié)果。 （ 2）每次吸液，均須更換一支無菌吸管，以 防交叉污染。此點(diǎn)由于操作繁瑣，器材需求量大，往往不能認(rèn)真執(zhí)行，應(yīng)加以注意。 （ 3）為保證試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，所用吸管的容量應(yīng)盡量與擬吸取的液體量相近，不要用大吸管吸取少量液體；試驗(yàn)樣本的混勻操作，必須認(rèn)真進(jìn)行；盡量減少中和劑或中和產(chǎn)物與試驗(yàn)微生物的接觸時(shí)間。 （ 4）所用方法適宜與否，和消毒劑性質(zhì)、復(fù)方中的附加成份、試驗(yàn)微生物種類、消毒試驗(yàn)種類等等均有關(guān)系，試驗(yàn)條件稍有改變就可能影響除藥效果。故每進(jìn)行一種消毒試驗(yàn)（包括消毒劑或微生物的更換），均需按規(guī)定對所選方法進(jìn)行鑒定試驗(yàn)，合格者方可用于正式試驗(yàn)。此步驟絕不可省略 ，否則極有可能導(dǎo)致試驗(yàn)產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。 中和劑鑒定試驗(yàn) 目 的 確定所選中和劑是否適用于擬進(jìn)行的細(xì)菌和真菌殺滅試驗(yàn)。 試驗(yàn)器材 （ 1）試驗(yàn)菌菌懸液和菌片（見 ）。 （ 2）刻度吸管（ 、 ）。 （ 3）小平皿（ 4 cm～ 6cm 直徑）。 （ 4）恒溫水浴箱。 （ 5） 稀釋液 ：見附錄 A。 （ 6） 胰蛋白胨大豆 瓊脂培養(yǎng)基 （ TSA）： 見附錄 A。 （ 7）電動混合器 試驗(yàn)設(shè)計(jì)原則 （ 1）通過所設(shè)各組試驗(yàn)結(jié)果綜合分析，應(yīng)可確定 所用中和劑是否對測試消毒劑有良好的中和作用，對試驗(yàn)用細(xì)菌以及其恢復(fù)期培養(yǎng)是否有害或不良影響。 （ 2）在確定用何種中和劑進(jìn)行鑒定試驗(yàn)有困難時(shí)，可對多個(gè)中和劑進(jìn)行初選以確定（見本 款 文后【附】）。 （ 3）試驗(yàn)中所用消毒劑的濃度應(yīng)以殺菌試驗(yàn)中使用的最高濃度為準(zhǔn)。濃度過低，則不足 — 22— 以顯示能否將高濃度消毒 劑 全部中和。 （ 4）鑒定試驗(yàn)中，消毒后去除殘留消毒 劑 組（第 2組）無菌生長，不能表明中和后 受到消毒劑作用后的細(xì)菌是否能恢復(fù)生長。 細(xì)菌是否復(fù)蘇。此時(shí)可適當(dāng)縮短作用時(shí)間 重新進(jìn)行試驗(yàn) ，但作用時(shí)間最短不得少于 30s，否則難以控制試 驗(yàn)的準(zhǔn)確性。若縮短作用時(shí)間后仍無菌生長，在排除其他原因的基礎(chǔ)上，可適當(dāng)下調(diào)殺菌試驗(yàn)中消毒 劑 濃度，再次進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)。 （ 5）同一消毒劑擬對多種微生物進(jìn)行殺滅試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)按微生物種類分別進(jìn)行鑒定試驗(yàn) 。對細(xì)菌繁殖體，在大腸桿菌（ 8099）、金黃色葡萄球菌（ ATCC 6538）、銅綠假單胞菌（ ATCC 15442）中任選其一進(jìn)行試驗(yàn)即可；對細(xì)菌芽孢，以枯草桿菌黑色變種（ ATCC 9372）芽孢進(jìn)行。 當(dāng)用其他特定微生物進(jìn)行殺滅試驗(yàn)時(shí)，均應(yīng)以該特定微生物進(jìn)行中和劑的鑒定試驗(yàn)。 （ 6）鑒定時(shí)根據(jù)所用殺菌試驗(yàn)方法，使 用相應(yīng)的懸液或載體定量試驗(yàn)。 【附】中和劑初選試驗(yàn) 中和劑鑒定試驗(yàn)前，若難確定擬檢測的中和劑，可通過本試驗(yàn)初選，而后以選中的中和劑進(jìn)行正式的鑒定試驗(yàn)。初選操作程序如下： （ 1）將 試驗(yàn)菌懸液（含菌量為 1103 cfu/ml～ 3103 cfu/ml）加入含 中和劑試管中，混勻，作用 30min后，取 ，用 TSA傾注法培養(yǎng)。 （ 2）將 試驗(yàn)菌懸液（含菌量為 1103 cfu/ml～ 3103 cfu/ml）加入含 物試管中，混勻，作用 30min后，取 ，用 TSA傾注法培養(yǎng)。 （ 3）試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽性對照組。陽性對照組以 菌懸液加入含 稀釋液試管中，混勻，作用 30min后，取 ，用 TSA傾注法培養(yǎng)。 當(dāng) 3組平板上長出的菌落數(shù)接近，如果以陽性對照組為標(biāo)準(zhǔn)（ X），前兩組長菌數(shù)為（ X177。50%X）以內(nèi)，可 進(jìn)行正式的 鑒定試驗(yàn)。 試驗(yàn)分組 第 1組 消毒劑 + 菌懸液 → 培養(yǎng) 觀察消毒劑對試驗(yàn)菌有無殺滅或抑制能力。 第 2組 （消毒劑 + 菌懸液） + 中和劑 → 培養(yǎng) 觀察殘留消毒劑被 中和后受到清毒劑作用后的試驗(yàn)菌是否能恢復(fù)生長。 第 3組 中和劑 + 菌懸液 → 培養(yǎng) 觀察中和劑是否抑菌。 第 4組 （消毒劑 + 中和劑） + 菌液 → 培養(yǎng) 觀察中和產(chǎn)物，或未被完全中和的殘留消毒劑對試驗(yàn)菌的生長繁殖是否有影響。 第 5組 稀釋液 + 菌懸液 → 培養(yǎng) 作為菌數(shù)對照。 第 6組 稀釋液 + 中和劑 + 培養(yǎng)基 → 培養(yǎng) 作為陰性對照。 中和劑懸液定量鑒定試驗(yàn)操作程序 根據(jù)試驗(yàn)分組，準(zhǔn)備足量試管和平皿，依次進(jìn)行編號。 將消毒劑按所需濃度配制好后，置 20℃177。 1℃水浴中待用 。 按 。取 ，加入 ，制成含有機(jī)干擾物質(zhì)的菌懸液，置 20℃177。 1℃水浴中備用。 （ 1）第 1 組。吸取 ， 置 20℃ 177。1℃ 水浴中 — 23— 5min 后， 再吸加 ，混勻。作用至預(yù)定時(shí)間，吸此樣液 加于含有 稀釋液的 試管中，混勻。吸取該最終樣液 ，接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 （ 2）第 2組。 吸取 ， 置 20℃ 177。1℃ 水浴中 5min 后， 再吸加 ，混勻。作用至預(yù)定時(shí)間，吸此樣液 加于含 中和劑溶液管中，混勻，作用 10min。吸取該最終樣液 ，接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 如平板生長菌落數(shù)均超過 300 個(gè)，應(yīng)以 稀釋液 對上述最終樣液作適宜稀釋后，再次進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 （ 3）第 3 組。吸取 ， 置 20℃ 177。1℃ 水浴中 5min 后， 加入 ，混勻。 加入 ，作用 10min。用中和劑 做 10倍系列稀釋 ，選適宜稀釋度懸液，各吸取 ，分別接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 （ 4）第 4 組。吸取 ， 置 20℃ 177。1℃ 水浴中 5min 后， 吸加 （以 ，作用 10min 配制而成）于試管內(nèi)，混勻。作用 10min，吸取該最終樣液 ，用中和產(chǎn)物溶液做 10 倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，各吸取 ，分別接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 （ 5）第 5組。吸取 ， 置 20℃ 177。1℃ 水浴中 5min 后， 吸加 于試管內(nèi)，混勻。 加入 ， 作用 10min ，用 稀釋液 做 10倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，各吸取 ，分別接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 （ 6）第 6 組。分別吸取稀釋液 、 中和劑 和硬水 各 ，倒入上述試驗(yàn)同批次的培養(yǎng)基 25ml，培養(yǎng)觀察。如出現(xiàn)細(xì)菌生長，可能提示試驗(yàn)材料或操作過程中有污染。應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。 中和劑載體定量鑒定試驗(yàn)操作程序 根據(jù)試驗(yàn)分組，準(zhǔn)備足量試管和平皿，依次進(jìn)行編號。各組分 別用適宜大小容量的無菌定量吸管按以下程序吸取或添加試劑和試驗(yàn)樣本。 （ 1）第 1組。吸取消毒劑 ，將其置 20℃ 177。1 ℃ 水浴中 5min后，用無菌鑷子夾入一菌片，并使浸透于消毒液中。待作用至試驗(yàn)預(yù)定的時(shí)間，立即用無菌鑷子取出菌片移入含 試管中，作用 10min。用電動混合器混合 20s，或?qū)⒃嚬苷翊?80次，吸取該最終樣液 ，接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 （ 2）第 2 組。吸取消毒劑 于無菌小平皿內(nèi)，將其置 20℃ 177。1℃ 水浴中 5min 后，用無菌鑷子夾入一菌 片，并使浸透于消毒液中，待作用至試驗(yàn)預(yù)定時(shí)間，立即用無菌鑷子取出菌片移入含 中和劑試管中，用電動混合器混合 20s，或?qū)⒃嚬苷翊?80 次。作用10min，吸取該最終樣液 ，分別接種于各平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 如平板生長菌落數(shù)均超過 300個(gè)， 應(yīng)重新吸取該最終樣液 ，用稀釋液做適當(dāng)稀釋，選適宜稀釋度懸液，吸取 ，分別接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 （ 3）第 3 組。吸取中和劑 于無菌小平皿中，將其置 20℃ 177。1 ℃ 水浴中 5min 后，用無菌鑷子夾入 1 菌 片，并使浸透于中和劑內(nèi)，作用 10min。立即用無菌鑷子取出菌片移入含 ml 中和劑試管中，用電動混合器混合 20s，或?qū)⒃嚬苷翊?80 次，混勻。吸取該最終樣液 ，用中和劑做 10 倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，吸取 ，分別接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 （ 4）第 4 組。 吸取中和產(chǎn)物溶液 （以 一片 浸有消毒劑的載體置 中和劑內(nèi)，作用 10min） 于無菌小平皿內(nèi)，將其置 20℃ 177。1℃ 水浴中 5min 后，用無菌鑷子夾入 1 菌片，并使浸透于中和產(chǎn)物溶液中。作 用 10min，用無菌鑷子取出菌片，移入含 中和產(chǎn)物溶液的試管中，用電動混合器混合 20s，或?qū)⒃嚬苷翊? 80 次，混勻。吸取該最終樣液 ， — 24— 用中和產(chǎn)物溶液做 10 倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，吸取 ，分別接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 （ 5）第 5 組。吸取稀釋液 于無菌小平皿內(nèi)，將其置 20℃ 177。1℃ 水浴中 5min 后， 用無菌鑷子夾入 1 菌片，并使浸透于稀釋液中。作用 10min，立即用無菌鑷子取出菌片移入含 稀釋液的試管中，用電動混合器混合 20s， 或?qū)⒃嚬苷翊? 80 次，混勻。吸取該最終樣液 ，用稀釋液 做 10倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，吸取 ，分別接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 （ 6）第 6 組。分別吸取稀釋液與中和劑各 ，倒入上述試驗(yàn)同批次的培養(yǎng)基 15ml～ 20ml，培養(yǎng)觀察。如出現(xiàn)細(xì)菌生長，提示試驗(yàn)材料或操作過程中可能有污染。應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。 評價(jià)規(guī)定 試驗(yàn)結(jié)果符合以下全部條件，所測中和劑可判為合格 : （ 1） 第 1 組無試驗(yàn)菌，或僅有極少數(shù)試驗(yàn)菌菌落生長。 （ 2） 第 2 組 有較第 1 組為多，但較第 5（ 組 ） 為少的試驗(yàn)菌菌落生長，并符合表 21 要求者。 表 21 中和劑鑒定試驗(yàn)合格標(biāo)準(zhǔn)中對第 1 組與第 2 組菌落數(shù)的要求 第 1 組平板平均菌落數(shù) 第 2 組平板平均菌落數(shù) 0 5 X（ 1～ 10） （ X + 5） Y（ 10） （ Y + Y） 注：對抑菌作用不明顯消毒劑（如乙醇）所用中和劑的鑒定試驗(yàn)中，當(dāng)?shù)? 1 組與第 2 組菌落數(shù)相近，難以達(dá)到本表要求時(shí)，可根據(jù)具體情況另行作出判斷和評價(jià)。 （ 3） 第 5（ 組 ） 有相似量試驗(yàn)菌生長 ， 懸液試驗(yàn)在 1107 cfu/ml～ 5107 cfu/ml之間 ，載體試驗(yàn) 在 5105 cfu/片～ 5106 cfu/片