【正文】 入 10ml 含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處 可用棉拭子直接涂擦采樣。 檢測方法 (1)細(xì)菌總數(shù)檢測：將采樣管在混勻器上振蕩 20s 或用力振打 80 次，用無菌吸管吸取 待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種 2個平皿，內(nèi)加入已溶化的 45℃ ~48℃的營養(yǎng)瓊脂 15ml~18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃177。 1℃溫箱培養(yǎng) 48h，計數(shù)菌落數(shù)。 采樣結(jié)果計算方法： 平板上菌落數(shù)179。稀釋倍數(shù) 細(xì)菌總數(shù) (cfu/cm2)=──────────────── 采樣面積 (cm2) (2)致病菌檢測：按 的原則執(zhí)行。 結(jié)果判 定 (1)消毒洗手 Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤ 5cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格。 Ⅲ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤ 10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。 Ⅳ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤ 15cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。 母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。 (2)皮膚黏膜：參照手的衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。 注意事項 皮膚粘 膜采樣處 ,若表面不足 5cm179。 5cm 可用相應(yīng)面積的規(guī)格板采樣。 物品和環(huán)境表面消毒效果的監(jiān)測 采樣時間：在消毒處理后進(jìn)行采樣。 采樣方法：用 5cm179。 5cm 的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積≥ 100cm2，連續(xù)采樣 4 個，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子 1 支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各 5次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 10ml 含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。 門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。 檢測 方法 (1)細(xì)菌總數(shù)檢測：檢測方法按 (1)執(zhí)行。小型物體表面的結(jié)果計算 ,用 cfu/件表示。 (2)致病菌檢測：檢測方法按 原則執(zhí)行。 結(jié)果判定 Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤ 5cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。 Ⅲ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤ 10cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。 Ⅳ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤ 15cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。 母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門菌。 注意事項 (1)采樣時間：按 執(zhí)行。 (2)樣本量及處理：按 (1)執(zhí)行。 空氣消毒效果的監(jiān)測 采樣時間：在消毒處理后、操作前進(jìn)行采樣。 采樣方法：平板暴露法 (1)布點方法：室內(nèi)面積≤ 30m2，設(shè)內(nèi)、中、外對角線 3 點，內(nèi)、外點布點部位距墻壁 1M 處；室內(nèi)面積 30m2，設(shè) 4 角及中央 5點， 4角的布點部位距墻壁 1m 處。 (2)采樣方法：將普通營養(yǎng)瓊脂平板 (直徑為 9cm)放在室內(nèi)各采樣點處，采樣高度為距地面 采樣時將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露 5min，蓋好立即送檢。 檢測方法：按照 要求進(jìn)行。 平板暴露法結(jié)果計算公式： 細(xì)菌總數(shù) (cfu/m3)=50000N/(A179。 T) 式中 A 為平板面積 (cm2)； T 為平板暴露時間 (min)； N 為平均菌落數(shù) (cfu)。 結(jié)果判定 Ⅰ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤ 10cfu/m3(或 ),未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格； Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤ 200cfu/m3(或 4cfu/平板 )，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格； Ⅲ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤ 500cfu/m3(或 10cfu/平板 )，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。 注意事項 采樣前，關(guān)好門、窗，在無人走動的情況下，靜止 10min 進(jìn)行采樣。 消毒液的監(jiān)測 常用消毒液有效成分測定 (1)有效氯含量測定：按 的方法進(jìn)行。 (2)有效碘含量的測定：按 的方法進(jìn)行。 上二種消毒劑的簡易濃度試紙測定法按 的方法進(jìn)行；水中余氯測定按 的方法進(jìn)行。 (3)戊二醛 (C5H8O2)含量的測定：按 的方法進(jìn)行。 (4)過氧化氫 (H2O2)濃度的測定：按 的方法進(jìn)行。 (5)過氧乙酸 (C2H4O3)濃度的測定：按 的方法進(jìn)行。 (6)二氧化氯 (ClO2)含量的測定：按 的方法進(jìn)行。 (7)二溴海因含量測定：按 的方法進(jìn)行。 (8)乙醇含量測定：按 的方法進(jìn)行。 (9)醋酸氯己定 (C22H30Cl2N10178。 2C2H4O2)含量的測定： 的方法進(jìn)行。 (10)臭氧含量測定：按 的方法進(jìn)行。 (11)苯扎溴銨含量測定：按 的方法進(jìn)行。 使用中消毒液染菌量測定 (1)檢測方法： 1)涂抹法：用無菌吸管吸取消毒液 ，加入 含有相應(yīng)中和劑的采樣管內(nèi)混勻，用無菌吸管吸取上述溶液 ，滴于干燥普通瓊脂平板，每份樣品同時做 2個平行樣，一平板置 20℃培養(yǎng) 7d，觀察霉菌生長情況，另一個平板置 35℃溫箱培養(yǎng) 72h 記數(shù)菌落數(shù)，同時按 的原則檢測致病菌。 消毒液染菌量 (cfu/ml)=每個平板 上的菌落數(shù)179。 50 2)傾注法：用無菌吸管吸取消毒液 ,加入到 含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水采樣管中混勻 ,分別取 放入 2只滅菌平皿內(nèi) ,加入已熔化的 45℃ ~48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml~18ml,邊傾注邊搖勻 ,待瓊脂凝固 ,一平板置 20℃培養(yǎng) 7d,觀察霉菌生長情況；另一個平板置 36℃177。 1℃培養(yǎng) 72h,計數(shù)菌落數(shù) ,同時按 的原則檢測致病菌。 消毒液染菌量 (cfu/ml)=每個平板上的菌落數(shù)179。 20 (2)結(jié)果判斷：消毒液染菌量≤ 100cfu/ml，并未檢出致病菌為合格。 (3)注意事項： 采樣后 1h內(nèi)檢測。 餐具消毒效果監(jiān)測 采樣時間：在消毒后、使用前進(jìn)行采樣。 采樣方法：將 179。 滅菌濾紙片于無菌洗脫液中浸濕均勻，貼在食具表面，經(jīng) 5min 取下，每 10 張濾紙合為一份樣本 (相當(dāng)于 50cm2 采樣面積 )，投入含 50ml 生理鹽水的 100ml 三角燒瓶中，于 4h 內(nèi)送檢。 檢測方法 (1)細(xì)菌總數(shù)的檢測：按 .(1)執(zhí)行。 (2)大腸菌群的檢測：取 1ml 采樣液，加入相應(yīng)的單倍或雙倍乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，置 37℃溫箱 培養(yǎng) 24h，若乳糖膽鹽發(fā)酵管不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，則可報告大腸菌群陰性。如果有疑慮則進(jìn)行分離培養(yǎng)。 紡織品：細(xì)菌總數(shù)≤ 5cfu/cm2，大腸菌群未檢出。 注意事項：餐具若用化學(xué)消毒劑消毒，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。 衛(wèi)生潔具消毒效果監(jiān)測 (1)采樣時間：在消毒后、使用前進(jìn)行采樣。 (2)采樣方法：便器、尿壺等容器可用沾有含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水的棉拭子，反復(fù)涂擦容器的內(nèi)表面及內(nèi)口處，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入5ml 無菌生理鹽水試管中 ,立即送檢。 拖把、抹布等物品可用無菌的方法剪取 1cm179。 3cm，直接投入 5ml 含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水中，立即送檢。 (3)檢測方法：將采樣管在混勻器上振蕩 20s或用力振打 80 次，取采樣液按 的原則檢測致病菌。 (4)結(jié)果判定：未檢出致病菌為消毒合格 . 內(nèi)鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測 采樣時間：在消毒滅菌后、使用前進(jìn)行采樣。 采樣方法：用沾有含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水的棉拭子 ,在被檢內(nèi)鏡上從鏡頭至鏡身反復(fù)涂擦，剪去手接觸部位，將棉拭子投入到 5ml 含相應(yīng)中和劑的生理鹽 水采樣管中，立即送檢。 檢測方法 (1)細(xì)菌總數(shù)的檢測：按 .(1)執(zhí)行。 (2)致病菌檢測：將采樣管在混勻器上振蕩 20s 或用力振打 80 次，按 原則檢測致病菌。 結(jié)果判定：滅菌后內(nèi)鏡，未檢出任何微生物為合格。 消毒后的內(nèi)鏡，細(xì)菌總數(shù)≤ 20cfu/件，并未檢出致病菌為合格。 注意事項：采樣面積按 執(zhí)行。 醫(yī)用污物消毒效果監(jiān)測 采樣時間：在消毒后、清運前進(jìn)行采樣。 焚化 消毒效果監(jiān)測：可焚化物品的消毒效果監(jiān)測，以污物燃燒充分、徹底為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行直接檢查。 堿化消毒效果監(jiān)測：以熟石灰為消毒劑的堿化消毒，日常監(jiān)測以 pH 為指標(biāo)。消毒后 30min 檢查 pH 值，若 pH=12，繼續(xù)作用 24h 為消毒合格。 氯化消毒效果監(jiān)測：氯化消毒效果的日常監(jiān)測，以余氯量為指標(biāo)，在消毒接觸時間 2h 后測定余氯量，余氯量 200mg/L，為消毒合格。 其它消毒因子消毒效果監(jiān)測。 (1)采樣方法：取 1ml消毒后待檢污物 (固體稱取 2g)，置于 5ml含相應(yīng)中和劑的無 菌生理鹽水的采樣管中 ,立即送檢。 (2)檢測方法：將采樣管在混勻器上振蕩 20s或用力振打 80 次，取采樣液按 原則檢測致病菌。 結(jié)果判定：未檢出致病菌為消毒合格。 織物消毒效果監(jiān)測 采樣時間：在消毒烘干后進(jìn)行采樣。 采樣方法：按 的原則執(zhí)行。 檢測方法：按 的原則檢測致病菌。 結(jié)果判定：未檢出致病菌為消毒合格。 致病菌的檢測 檢測原則：致病菌的檢測依據(jù)污染情況進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測。 金黃色葡萄球菌檢測。 (1)增菌、分離 取采樣液 1ml，接種于 5ml SCDLP 液體培養(yǎng)基中，于 36℃177。 1℃增菌 24h。取 1 白金耳上述增菌液，在血平板上作劃線分離， 36℃177。 1℃培養(yǎng) 24h。 (2)觀察菌落特征：在血瓊脂平板上菌落形態(tài)為金黃色、圓形凸起、表面光滑、周圍有溶血圈。 (3)鏡檢：挑取典型菌落作涂片染色鏡檢，鏡下為革蘭陽性、成葡萄狀排列的球菌。 (4)生化反應(yīng)：取可疑菌落作觸酶、葡萄糖發(fā)酵、血漿凝固酶、甘露醇 發(fā)酵、新生霉素敏感試驗 ,均為陽性者即為金黃色葡萄球菌。 1)甘露醇發(fā)酵試驗：取上述可疑菌落接種于甘露醇培養(yǎng)基，于 36℃177。 1℃培養(yǎng) 24 h，發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者為陽性。 2)血漿凝固試驗：①玻片法：潔凈玻片一端滴一滴滅菌生理鹽水，另一端滴一滴血漿，用白金耳挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混勻， 5min 內(nèi)觀察有無固體顆粒狀物，若血漿出現(xiàn)凝塊，生理鹽水均勻混濁為陽性，兩者均混濁為陰性。②試管法：吸取 1： 4新鮮血 ，放在滅菌小試管中，再加入等量待檢菌 24h 肉湯培養(yǎng)物，混勻后放入 36℃177。 1℃孵箱中，同時以已知血漿凝固 酶陽性和陰性菌肉湯培養(yǎng)物作對照，每 ,6h 內(nèi)出現(xiàn)凝塊者為陽性。 乙型溶血性鏈球菌檢測 (1)增菌、分離：取樣品 1ml，接種于 1%葡萄糖肉湯， 37℃增菌 24h。取 1白金耳增菌液在血平板上作劃線分離， 36℃177。 1℃培養(yǎng) 24h。 (2)觀察菌落特征：菌落形態(tài)為灰白色、半透明或不透明、針尖狀突起、表面光滑、邊緣整齊、周圍有β溶血圈。 (3)鏡檢：挑取典型菌落作涂片染色鏡檢，鏡下為革蘭陽性、呈鏈狀排列的球菌。 (4)生化反應(yīng)：取可疑菌落作如下生化試驗 ,如觸酶陰性、鏈激酶試驗陽性、對桿菌肽 敏感者 ,即為乙型溶血性鏈球菌。 鏈激酶試驗：吸取草酸鉀血漿 ( 草酸鉀加 5ml 人血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清 )，加入 滅菌生理鹽水混勻后再加入待檢菌 24h 肉湯培養(yǎng)物 和 %氯化鈣 ，混勻，放入 36℃177。 1℃水浴中，每 2min觀察一次 (一般 10min 內(nèi)可凝固 )，待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄溶化的時間，如 2h 內(nèi)不溶化，移入孵箱觀察 24h的結(jié)果，如全部溶化為陽性； 24h 仍不溶解者為陰性。 桿菌肽敏感試驗：將被檢菌濃菌液涂于血平板上，用滅菌鑷子取含菌 單位桿菌肽紙 片放在平板表面上。同時以已知陽性菌株作對照，于 36℃177。 1℃18h~24h，有抑菌帶者為陽性。 沙門菌檢測：參照 GB (食品中沙門菌檢測方法 )。 試劑與培養(yǎng)基的配制：按附錄 A 進(jìn)行。 廣州市番禺珠江化工研究所廣州市九九消毒劑有限公司 地址：廣州市番禺區(qū)石樓鎮(zhèn)梅花崗工業(yè)大廈電話： 02082382246 28021230傳真： 02028029137 聯(lián)系人：付先生、李小姐 18929589759 工作 ：993666957 特別聲明： 1：資料來源于互聯(lián)網(wǎng)，版權(quán)歸屬原作者 2：資料內(nèi)容屬于網(wǎng)絡(luò)意見，與本賬號立場無關(guān) 3：如有侵權(quán)，請告知，立即刪除。