【正文】 nil清水對照 CK處 理 Treatment菌核數(shù)（個）Sclerotium number EC50EC90圖 8 T111 發(fā)酵產(chǎn)物對核盤菌菌核形成數(shù)量的影響Fig. 8 Effect of antifungal substance of T111 on sclerotium number of S. sclerotiorum T111 發(fā)酵產(chǎn)物對核盤菌菌核萌發(fā)的影響結(jié)果經(jīng)放線菌 T111 發(fā)酵產(chǎn)物 250181。g/mL 的濃度（EC 50濃度的 20 倍）處理后，菌核的萌發(fā)與清水對照相比雖然延遲了 3d，且萌發(fā)率有所降低，但并不能被完全抑制。對照藥劑乙霉威和嘧霉胺在約相當于其 EC50濃度的 20 倍時（分別為 80181。g/mL 和15181。g/mL）也不能完全抑制菌核的萌發(fā)。 T111 發(fā)酵產(chǎn)物對核盤菌菌絲體細胞膜滲透勢的影響結(jié)果黃瓜菌核病菌菌絲體在經(jīng)放線菌 T111 發(fā)酵產(chǎn)物處理后，隨時間的延長及發(fā)酵產(chǎn)物濃度的提高，其電導率并未顯著升高，在處理 150min 后，仍與未處理時（即0 分鐘時）無顯著差異。而對照藥劑嘧霉胺可以使電導率在 5min 內(nèi)迅速提高，且隨時間的延長，電導率不斷增大（圖 9 A，B） 。這表明二者的在此方面的抑菌作用機制有顯著不同。010203040506070800 5 15 30 60 120 150時 間 Time/min電導率Conductivity（us/cm）CK發(fā) 酵 液 發(fā) 酵 液 發(fā) 酵 液 25181。g/mLA0510152025300 20 40 60 80 100 120 140時 間 （ 分 鐘 ）Time（ min）電導率(μs/cm)Electrical conductivity(μs/cm)B圖 9 T111 發(fā)酵產(chǎn)物對核盤菌菌絲細胞膜透性的影響注：A 發(fā)酵產(chǎn)物處理 B 嘧霉胺處理Fig. 9 Effect of antifungal substance of T111 on membrane osmotic potential of S. sclerotiorumNote: A, antifungal protein of Bacillas pumilus strain BSH4 B, pyrimethanil4 討論在獲得一株有效的放線菌后，需要明確其抑菌譜及對靶標致病菌的作用機制。再根據(jù)放線菌的生態(tài)習性及將要應用的環(huán)境，確定適宜的生產(chǎn)及使用劑型。由于放線菌具有特殊的生物學及生態(tài)學習性在大量發(fā)酵生產(chǎn)后如何將其制成高活性、適宜較長期保存的制劑，是一個亟待研究解決的課題。要克服對環(huán)境敏感的放線菌活菌劑在田間防病效果不穩(wěn)定的弊端，在實際應用中可以人工改造自然的放線菌獲得具有抗藥性的菌株,與低劑量的高效、低毒、低殘留的殺菌劑混合使用，這不僅能夠明顯提高放線菌的防病效果，也會增加其生態(tài)競爭能力。國內(nèi)、外防治菌核病菌等核盤類真菌病害的鏈霉素菌株尚不多見，董美玉等[20]分離到一株能夠拮抗油菜菌核病菌的放線菌株ZY105，在高溫、強酸和強堿的環(huán)境下抑制活性變化不大。齊艷春 [21]從土壤中分離到一株黃色鏈霉菌A01，噴施A01發(fā)酵液，有效降低了甜葉菊斑枯病病情指數(shù)，%，且明顯提高了甜葉菊葉片產(chǎn)量，%。另外，曾慶飛 [22]等利用放線菌菌株DA07118發(fā)酵液用于根結(jié)線蟲的防治，%。本實驗室分離獲得的黃色鏈霉菌T111除了對黃瓜菌核病菌表現(xiàn)出強烈的抑制活性外，對棉花紅腐病菌等11種供試菌均表現(xiàn)出不同程度的抑制；另外T111發(fā)酵液的熱穩(wěn)定性、貯存穩(wěn)定性、紫外光穩(wěn)定性良好，在對菌核病等真菌病害的生物防治上具有一定的應用潛力。關(guān)于放線菌發(fā)酵液對核盤菌的作用機制的探索，國內(nèi)外的文獻的報道非常有限，多數(shù)文獻只是從發(fā)酵液對病原菌孢子萌發(fā)和菌絲生長的抑制作用入手，探索其對病原菌菌絲造成生長緩慢，扭曲，腫大，畸形，有的頂部出現(xiàn)膨大的泡囊，有的原生質(zhì)體外露 [23]。因而使菌絲不能向前擴展，失去了侵襲能力。同時產(chǎn)孢能力下降，孢子萌發(fā)率及芽管長度下降。這可能與發(fā)酵液抑制菌絲和孢子的呼吸作用有關(guān)。有報道殺稻瘟菌素S 便是通過抑制孢子和菌絲的呼吸作用而強烈抑制孢子萌發(fā)和菌絲生長的 [24]。此外，發(fā)酵液造成敏感菌菌絲尖端形成膨脹泡而破裂，原生質(zhì)外泄，從而造成溶菌現(xiàn)象，這可能是由于發(fā)酵液中的活性物質(zhì)作用于病原菌的細胞壁、細胞膜，造成細胞壁、細胞膜破裂而引起的，有此類現(xiàn)象的抗生素很多，研究清楚的為多氧霉素D 和多烯類抗生素，多氧霉素主要是作為幾丁質(zhì)合成酶的競爭性抑制劑抑制幾丁質(zhì)的合成從而破壞病原菌的細胞壁。多烯類抗生素通過與質(zhì)膜中含有的麥角醇作用損傷細胞質(zhì)膜造成細胞內(nèi)物質(zhì)泄漏，而使菌體減少造成溶菌，而放線菌 T111 發(fā)酵產(chǎn)物處理黃瓜菌核病菌菌絲體，隨時間的延長及發(fā)酵液濃度的提高，其電導率并未顯著升高，在處理 150min 后，仍與未處理時（即 0 分鐘時）無顯著差異，這表明發(fā)酵液對細胞壁、細胞膜的作用極小，不同于以往研究的放線菌產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)。關(guān)于其抑菌作用機制，還要進一步研究。5 參考文獻[1] 王玉菊, 祁紅英, 等. 植物土傳病害的微生物防治研究進展[J].世界農(nóng)業(yè), 1995, 1: 3739. [2] Baker K. F. Evolving concepts of biological control of plant pathogens[J]. Annual Review of Phytopathology, 1987, 25: 6785.[3] Handelsman J.,Stabb E. V.. Biocontrol of soilborne plant pathogens [J].The plant cell, 1996, 8, 18551869. [4] 裴炎, 李先碧, 等. 抗真菌多肽 APS1 [J], 1999, 39(4): 344349.[5] 文成敬 , 牛應澤, 等. 與油菜菌核菌在土壤中存活有關(guān)的木霉及其生物防治潛在能力[J]. 四川農(nóng)業(yè)大學學報, 2022, 19(6): 133136.[6] Assis S. M. P., Silveira E. B., Mariano L. R., et al. Summa phytopathlogica. 1998, 24: 216220.[7] Chanway C. P.. Introduction of tree roots with plant growth promoting soil bacteria:An emerging technology for reforestation[J]. Forest Science, 1997, 43(1): 99112.[8] 范青, 田世平, 等. 枯草芽孢桿菌( B912) 對桃和油桃褐腐病的抑制效果[J]. 植物學報, 2022, 42(11): 11371143.[9] 田宏先 , 崔林, 等. , 2022, 29(2): 4345.[10] Mari M, Guizzardi M, Pratella G C. Biological control of gray mold in pears by antagonistic bacteria[J]. Biological Control, 1996, 7(1): 3037.[11] 廖曉蘭, 羅寬. 油菜花上細菌的分離及其對油菜菌核菌的拮抗作用[J]. 湖南農(nóng)業(yè)大學學報, 2022, 26(4): 296298.[12] 林東, 徐慶, 等. 枯草芽孢桿菌 SO113 分泌蛋白的抑菌作用及抗菌蛋白的分離純化[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報, 2022, 9(1): 7780.[13] 游春平, 肖愛萍, 等. 稻瘟病菌拮抗微生物的篩選與鑒定[J].江西農(nóng)業(yè)大學學報, 2022, 23(4): 520522.[14] 余桂容, 張敏, 等. 小麥赤霉病的生物防治研究Ⅰ.拮抗芽孢桿菌的分離、篩選、鑒定和防病效果. 四川農(nóng)業(yè)大學學報,1998, 16(3): 314318.[15] 張學君, 劉煥利, 等 . 小麥紋枯病生防菌株 B_3 產(chǎn)生抗菌物質(zhì)條件的研究[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學學報, 1995, 18(1): 26 30.[16] 魏春妹, 張春明, 等. 番茄青枯病生防制劑的研制與應用[J].上海農(nóng)業(yè)學報, 2022, 16(增刊), 6972.[17] 程亮, 游春平, 等. 拮抗細菌的研究進展[J]. 西北農(nóng)業(yè)大學學報, 2022, 25(5): 732737.[18] 阮繼生, 劉志恒, 等. , 1990.[19] 方羽生, 楊衛(wèi)華, 等. 放線菌對 4 , 2022, (5): 3941.[20] 董美玉, 許鳳春, 等 . 一株拮抗放線菌 ZY105 菌株發(fā)酵液抗菌譜及穩(wěn)定性的研究[J]. 貴州大學學報. 2022, 25(6): 652655.[21] 齊艷春 . 甜葉菊斑枯病生物防治拮抗菌株的篩選[J]. 中國農(nóng)學通報. 2022 (11): 6568[22] 曾慶飛, 李傳浩, 等. 根結(jié)線蟲拮抗放線菌 DA07118 的篩選與鑒定及其發(fā)酵條件的優(yōu)化[J]. 中國生物防治. 2022 (25): 255259[23] 張楠, 劉訓理, 等. 拮抗放線菌BS2112 的鑒定及抗菌物質(zhì)粗提物對家蠶主要病原菌的抑制作用[J] 蠶業(yè)科學, 2022, 35(4): 796802[24] 祁碧菽, 楊文香. 鏈霉菌對玉米彎孢霉菌抑制作用的初步研究[J]. 河北農(nóng)業(yè)大學學報, 2022, 23(3): 7679.6 致謝本論文是在導師劉峰副教授和慕衛(wèi)副教授的悉心指導下完成的，兩位導師在我的學習、生活中所給予的關(guān)心和幫助無以言表。導師高尚的人格、淵博的學識、忘我的工作精神和嚴謹?shù)目茖W態(tài)度時刻影響、教育著我，成為今后工作生活中一筆寶貴的精神財富。值此論文完成之際，特向劉老師和慕老師表達我誠摯的敬意?；貞涍^去，是為了展望更好的未來，更是鞭策自己。短暫的本科生學習經(jīng)歷，使我認識到求學就是在困擾和挫折中不斷思考和超越自我的過程，沒有壓力和困難就不會有更大的進步。研究生期間，我積極進取、奮發(fā)向上，努力使自己戰(zhàn)勝惰性、拒絕浮躁，當面對困難時能夠獨立的思考，及時發(fā)現(xiàn)問題、解決問題，在實踐中尋找到解決問題的方法。 韓紅寧 2022 年 6