【正文】 動(dòng)相為1%磷酸99%甲醇，進(jìn)樣體積為10μg，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。（1）流動(dòng)相的選擇 本次研究選擇大黃素為分析對(duì)象，這種大黃蒽醌類化合物均為極性化合物，固選擇以甲醇為流動(dòng)相，用微柱高效液相色譜進(jìn)行分離。為了避免脫尾現(xiàn)象，%的磷酸調(diào)節(jié)，來(lái)抑制分析物的離解。實(shí)驗(yàn)表明：隨著磷酸體積的增加各組分的保留時(shí)間也增加，但對(duì)分離度的影響不大。因此選擇甲醇:%磷酸(80:20)作為流動(dòng)相。（2） 波長(zhǎng)的選擇 大黃中的蒽醌成分多屬于大黃素型和茜草素型[27]，這兩類蒽醌衍生物主要為三取代和四取代蒽醌[28]，研究表明用254nm為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)曲線關(guān)系良好，因此選擇波長(zhǎng)為254nm，考慮到分析速度和分離度。 綜合以上條件，本次試驗(yàn)選定的條件為色譜柱：應(yīng)用EclipseXDBC18色譜柱（250mm，5μm）流動(dòng)相選擇甲醇:%磷酸比為80:20，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，進(jìn)樣體積10μL，柱溫為30℃。 實(shí)驗(yàn)方法 ，以色譜純甲醇溶解定容至50mL的濃度分別為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。 在60177。5℃下干燥恒重并將大黃樣品粉碎后過(guò)200目篩，準(zhǔn)確稱取1g并加入50mL分析純氯仿加熱回流120min，冷卻，蒸干氯仿，用20%硫酸溶解殘?jiān)?，以色譜純甲醇定容至50mL，即制得樣品試液。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析討論 在選定條件下，用所配置的大黃素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行液相色譜，所得色譜圖如圖1所示，由圖可見(jiàn)大黃素在 min時(shí)達(dá)到了分離，隨后的樣品分析結(jié)果也表明所測(cè)定樣品中各組分在此條件下均能實(shí)現(xiàn)良好分離，可以滿足實(shí)際樣品測(cè)定的需要。圖1 大黃素對(duì)照品液相色譜圖圖2 大黃樣品1液相色譜圖圖3 大黃樣品2液相色譜圖 線性關(guān)系考察 精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照液120按上述色譜條件進(jìn)行液相色譜測(cè)定峰面積（Y），以峰面積分別對(duì)各進(jìn)液量(X)回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：大黃素 A=100C+ R178。= A表示峰面積 C表示各組分濃度（μL/mL） 精密度試驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液10微升，重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算大黃素的峰面積平均值和RSD見(jiàn)表1 表1名稱大黃素峰面積平均值RSD% 樣品含量的測(cè)定表2 樣品中大黃素測(cè)定結(jié)果樣品類型 產(chǎn)地 大黃素 含量 RSD 大黃 清水 白河 正交實(shí)驗(yàn)：以回流時(shí)間（A）、溶劑用量（B）和溶劑（C）為考查因素進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)條件如下表表3序號(hào)條件A/hB/mLC/氯仿:乙醇11001:021801:132501:2 表4 氯仿和乙醇混合溶劑提取結(jié)果分析A/hB/mL氯仿:乙醇大黃素/g1501:22801:131001:041501:051801:2611001:172501:182801:0921001:2 由表4可得最佳條件為A（2h）B(100) C(氯仿比乙醇1:2)，在此條件下大黃素的分離效果最好3 結(jié)論通過(guò)查閱資料，本文建立了一個(gè)通過(guò)高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定藥用大黃中大黃素的方法，與參考資料比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較接近，得到了預(yù)期的效果，驗(yàn)證了此方法的可行性。此方法具有快速、簡(jiǎn)單、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，可大黃中有效成分的分析與測(cè)定提供一定的參考價(jià)值。參考文獻(xiàn)[1] 中華人民共和國(guó)藥典[ M ] .:化學(xué)工業(yè)出版社, 2005:附錄181 182.[2] [ M ].北京:人民衛(wèi)生出版社1997:2851.[3] 張丹,[J].分析化學(xué),31(4):459462.[4] 倪弘,薛小平,楊秀竹. 大黃酸抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞炎性介質(zhì)活化的作用機(jī)理[J].天津中醫(yī),2001,(01):3536.[5] 杜宏,邵加慶,顧萍. 大黃酸治療對(duì)db/db小鼠第1相胰島素分泌的影響[J].中國(guó)中藥雜志,2010,(20):27642767.[6] 禹莉,凌云志,[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,(8)[7] 范仁根,單湘湘,[J],河北醫(yī)學(xué),2008,(11).[8] 胡凱文,侯麗,[J],中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,1998,(11).[9] 南海江,許旭東,[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),2009,21(4):690701.[10]　紀(jì)松崗,. 分析化學(xué)[J ].1998, 26 (11) : 1388.[11]　茍奎斌,袁海龍,[J ],1999, 34 (9) : 619.[12]　夏之寧,周闖,[J ].1999, 21 (9): 478.[13]　[J ],1963,10:725.[14]　李軍林,李家實(shí),[J ].1996,10 (2):43.[15]　孫陽(yáng),[J ],1985,5 (5):294.[16]　汪寶琪,龐志功,[J ],1991,22 (6):375.[17]　何麗一,[J ],1980,15 (9):555.[18]　Dem izu,Yuk io O hshima et al . J. Ch romatogr [J ].360 (1986):307.[19] 袁萍,周東斌,[J],天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),2011,(4)[20]　毛平,文小平,[J ].1995,217 (2):37.[21]　Liu CL,Zhu P L,LiuM C. J. Ch romatogr [J ].1999,857:167.[22]　宗玉英,余滿堂,[J ].1995,30 (8):594.[23]　Sheu SJ,Chen H R. A nal . Ch im. A cta[J ].1995,309:361.[24]　Ji Song gang,Chai Yi feng,et romatogr [J ].1998,12:335.[25]　Li Guan bin,Chen Xiong guo,et nalyst [J ].1998,123:1501.[26]　黎艷,張志玲,[C ].2000[27] Thomson R H. Anthraquinones in: Naturallyoccurring Ed. New York: AcademicPress Inc,1971.[28] [ M ].北京:科學(xué)出版社,2004:573588. 致謝： 大學(xué)四年學(xué)習(xí)時(shí)光已經(jīng)接近尾聲，在此我想對(duì)我的母校，我的父母、親人們，我的老師和同學(xué)們表達(dá)我由衷的謝意。感謝我的家人對(duì)我大學(xué)四年學(xué)習(xí)的默默支持。感謝我的母校陜西理工學(xué)院給了我大學(xué)四年深造的機(jī)會(huì)，讓我能繼續(xù)學(xué)習(xí)和提高。感謝季曉暉、劉軍海、李志洲等老師和同學(xué)們?nèi)陙?lái)的關(guān)心和鼓勵(lì)。老師們課堂上的激情洋溢，課堂下的諄諄教誨。同學(xué)們?cè)趯W(xué)習(xí)中的認(rèn)真熱情，生活上的熱心主動(dòng)，所有這些都讓我的四年充滿了感動(dòng)。這次畢業(yè)論文設(shè)計(jì)我得到了很多老師和同學(xué)的幫助，其中我的論文指導(dǎo)老師季曉暉老師對(duì)我的關(guān)心和支持尤為重要。每次遇到難題，我最先做得就是向季曉暉老師尋求幫助，而季曉暉老師每次不管忙或閑，總會(huì)抽空來(lái)找我面談，然后一起商量解決的辦法。 我做畢業(yè)設(shè)計(jì)的每個(gè)階段，從選題到查閱資料，論文提綱的確定，中期論文的修改，后期論文格式調(diào)整等各個(gè)環(huán)節(jié)中都給予了我悉心的指導(dǎo)。這幾個(gè)月以來(lái)，季曉暉老師不僅在學(xué)業(yè)上給我以精心指導(dǎo)，同時(shí)還在思想給我以無(wú)微不至的關(guān)懷，在此謹(jǐn)向季曉暉老師致以誠(chéng)摯的謝意和崇高的敬意。 同時(shí)，本片畢業(yè)論文的寫(xiě)作也得到了郭衛(wèi)國(guó)、任瑞妮等同學(xué)的熱情幫助。感謝在整個(gè)畢業(yè)設(shè)計(jì)期間和我密切合作的同學(xué)，和曾經(jīng)在各個(gè)方面給予過(guò)我?guī)椭幕锇閭?，在此，我再一次真誠(chéng)地向幫助過(guò)我的老師和同學(xué)致以感謝!第 12 頁(yè) 共 20 頁(yè)