酶的生產(chǎn)與分離純化瑤瑤-資料下載頁
2025-05-26 22:01本頁面
【正文】 68 葡聚糖凝膠 瓊脂糖凝膠 聚丙烯酰胺凝膠 69 生物分子與配基之間所具有的 專一而又可逆 的親和力 酶與底物 酶與競爭性抑制劑 抗原與抗體 酶 RNA與互補的 RNA分子或片段 RNA與互補的 DNA分子或片段 親和層析 70 根據(jù)欲分離組分與配基的結(jié)合特性 ,親和層析可以分為： 共價親和層析 疏水層析 金屬離子親和層析 免疫親和層析 染料親和層析 凝集素親和層析 71 分配層析 利用各組分在兩相中的分配系數(shù)不同 固定相、流動相 在流動相的帶動流經(jīng)固定相 動態(tài)分配。 紙上層析 分配薄層層析 分配氣相層析 72 電泳分離 使用的支持體的不同： 薄層電泳 紙層析 薄膜電泳 凝膠電泳 自由電泳 等電聚焦電泳 本身所帶的凈電荷量 、 顆粒形狀顆粒大小 、 電場強度 、 溶液pH值 、 離子強度 、 支持體的特性 73 過濾與膜分離 借助于 過濾介質(zhì)，濾紙、濾布、纖維 過濾 非膜過濾：采用高分子膜以外的物質(zhì)作為過濾介質(zhì) 膜過濾：采用各種 高分子膜 為過濾介質(zhì) 74 膜分離過程中，薄膜的作用是 選擇性地讓 小于其孔徑的物質(zhì)顆粒或分子通過 ，而把大于其孔徑的顆粒截留。 膜分離 加壓膜分離 微濾 超濾 反滲透 電場膜分離 電滲析 離子交換膜電滲析 擴散膜分離 透析 75 酶分離、純化的評價 ? 酶的產(chǎn)量是以活力單位表示， ? 比活力、總活力 76 ? 酶活力的測定 ? 酶活力 (Enzyme activity)：酶催化反應的能力，酶的含量。 1 min催化 1μmol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量為該酶的一個活力單位 ( 國際單位 ) ，溫度為 25 ℃ ，其它條件 (pH、離子強度 ) 采用最適條件。 重要 77 ? 酶的總活力為樣品的全部酶活力。 總活力 = 酶活力 總體積 (mL) 或 = 酶活力 總質(zhì)量 (g) 78 ? 比活力 (Specific activity) ：單位蛋白質(zhì) 所含有的酶活力 。 酶純度 重要 79 ? 回收率 (Yield percent) ：提純前與提純后酶的 總活力 之比。酶的損失程度 ? 提純倍數(shù) ：提純前后兩者 比活力 之比。 酶活力是一般采用 測定產(chǎn)物的生成量 80 酶純度的評價 ? 電泳法 ? 層析法 ? 沉降法 ? 分光光度計法 ? 結(jié)晶法 ? 免疫法 81 ? 電泳法： 僅有一條區(qū)帶 ? 層析法：經(jīng)層析后各部分比活力一致 82 ? 免疫化學法：免疫電泳 ? 超速離心沉降分析法 ? 分光光度法：根據(jù) A280/A260應為的比值確定，純酶的比值為 ? 結(jié)晶法 83 酶的保存方法 ? ① 底物、抑制劑和輔酶，不穩(wěn)定狀態(tài) 穩(wěn)定狀態(tài)。 ② 巰基酶，加入－ SH保護劑。 GSH、DTT ③ Ca2+保護 α－淀粉酶， Mn2+穩(wěn)定溶菌酶， Cl－ 穩(wěn)定透明質(zhì)酸酶。
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