rna提取準(zhǔn)備工作及注意事項-資料下載頁
2025-05-13 22:36本頁面
【正文】 得）。RNA 的電泳結(jié)果受許多因素的影響，包括二級結(jié)構(gòu)，電泳條件，上樣量，被 EB 飽和的程度等。使用非變性電泳檢測 RNA，以 DNA Marker 做對照，如果 2kb 處的 28S 和 處的 18S 條帶清晰，且 28S：18S 1，該完整性可以滿足絕大部分后續(xù)實驗要求了。A260/A280 是一個給大家?guī)碓S多困惑的指標(biāo)。首先要明確該指標(biāo)用于核酸的原始含義是：純的 RNA，其 A260/280 = 左右。純 RNA 是‘因’，A260/A280 = 2 是‘果’?，F(xiàn)在大家卻在拿 A260/A280 當(dāng)‘因’用，認(rèn)為“如果 A260/A280 = 2，所以 RNA 是純的”，自然會產(chǎn)生困惑。有興趣的話，可以在您的 RNA 樣品中加入一點(diǎn)抽提中經(jīng)常使用的試劑，如苯酚，異硫氰酸胍，PEG 等，再測 A260/A280 比值。現(xiàn)實是，許多抽提 RNA 時使用的試劑，以及樣品中的許多雜質(zhì)都在 A260 和 A280 處附近有吸收，對 A260/A280 產(chǎn)生影響。目前最具有指導(dǎo)性的做法是：對 RNA 樣品在 200300 nm 范圍掃描。純 RNA 的曲線具有如下特點(diǎn)：曲線平滑，A230 和 A260 是兩個拐點(diǎn)，A300 接近 0，A260/A280 = 左右，A260/A230 = 左右。如果沒有掃描數(shù)據(jù)，也一定要測定 A260/A230 比值，因為該比值對所有影響酶反應(yīng)的雜質(zhì)的殘留更敏感。要考慮設(shè)備的線形范圍 （A260 要處于 – 之間）。另外有兩個有用的現(xiàn)象：在水中測定 A260/A280，比值將變低 左右；而在 10mM EDTA 中測定的比值比在 1mM EDTA 中測定的高 左右。RNAguard：抑制組織/細(xì)胞內(nèi)源酶的試劑綜上所述，確保 RNA 不降解的傳統(tǒng)做法是：在取組織前將含液氮的容器放在手邊，一旦取出所需組織，立即切割小后投入液氮中。抽提前先在碾缽中加入適量的液氮，再將組織從液氮中取出迅速放入已加入液氮的碾缽中碾磨。碾磨過程中要及時補(bǔ)充液氮以防止組織融化。待組織徹底碾磨碎后，等待剩余液氮恰好揮發(fā)完時，立即將碾磨碎的組織移入裂解液中快速勻漿......安全的稱重幾乎不可能。這么嚴(yán)格的操作，是沒有多少實驗人員去認(rèn)真執(zhí)行的。RNAguard 能快速抑制樣品中的內(nèi)源酶活性，確保動物組織/細(xì)胞中的 RNA 在 37C 一天不降解，25C 一周不降解，4C 一個月不降解，20C 一年以上不降解。RNAguard適用的樣品包括：動物組織，培養(yǎng)細(xì)胞，昆蟲，及部分植物組織。經(jīng)過 RNAguard 處理的樣品可以用幾乎所有常用的 RNA 方法/試劑抽提 RNA，所有的操作與用新鮮組織沒有什么不同。使用 RNAguard 的操作非常簡單：在取組織前預(yù)先估計組織的重量，在一個容器中加入 510 倍體積的 RNAguard，放在手邊。取出所需組織后，立即切割成厚度小于 厘米，放入含 RNAguard 的容器中即可。抽提前先用鑷子將組織從 RNAguard 中取出，在室溫進(jìn)行切割和稱重后，移入裂解液中快速勻漿。
醫(yī)療健康相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1