動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)-資料下載頁
2025-05-12 18:01本頁面
【正文】 細(xì)胞一樣 ,需要在恒足溫度下才能生存 ,溫差變化一般不應(yīng)超過 ，因此培養(yǎng)箱對溫度應(yīng)具有較高靈敏度。 CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點(diǎn)在于能恒定地供應(yīng)一定量的 CO2,一般 5%即可 維持培養(yǎng)液 PH值穩(wěn)定 。 冰箱 ? 細(xì)胞培養(yǎng)的冰箱應(yīng)特別注意清潔， 防止污染。 ? 水純化裝置 細(xì)胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高。一般需要使用重蒸或三蒸水配置各種培養(yǎng)用液。 過濾裝置 ? 各種培養(yǎng)用液只能用過濾的方法進(jìn)行除菌消毒處理。微化濾膜濾器是目前應(yīng)用最廣泛的過濾裝置。 ? 細(xì)胞冷凍貯存器 細(xì)胞冷凍貯存具有經(jīng)濟(jì)、省力和較好保持細(xì)胞生物學(xué)特性的優(yōu)點(diǎn)，目前各實(shí)驗(yàn)室主要使用液氮容器貯存細(xì)胞。 ? 培養(yǎng)器皿 培養(yǎng)器皿包括各種規(guī)格的玻璃、塑料培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿，吸管，離心管等。 ? 洗刷消毒間： 烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。 ? 分析間： 顯微鏡、計(jì)算機(jī)及打印機(jī)等。 無菌操作的要領(lǐng) ? 由于體外培養(yǎng)的細(xì)胞缺乏機(jī)體抗感染功能，所以在一切操作中要努力作到最大限度的無菌，防止污染。 ? 超凈工作臺消毒 打開紫外線殺菌燈照射消毒 20～ 30分鐘，然后關(guān)閉紫外燈，打開風(fēng)機(jī)，流入的空氣是經(jīng)過除菌板過濾的空氣，工作臺可保持無菌環(huán)境。 ? 洗手 操作時因整個前臂伸入工作臺內(nèi)，所以洗手一定要刷洗到肘部，然后用 %新潔爾滅或 75%的酒精棉球擦拭。 火焰消毒 ? 所使用物品均應(yīng)經(jīng)過燒灼，所用瓶口等開啟或封蓋時均需迅速旋轉(zhuǎn)過火焰進(jìn)行消毒。 注意金屬器械不能在火焰上燒灼時間過長。 ? 燒過的用具均要待冷卻后再接觸組織細(xì)胞。 ? 吸取營養(yǎng)液后的吸管不能再經(jīng)火焰燒灼 ,否則會燒焦形成炭膜 ,再用時會將有害物質(zhì)帶入培養(yǎng)液。 ? 合理布局 右手使用方便的用品放右側(cè)，左手使用方便的用品放左側(cè)。 酒精燈置于中央，打開的培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等應(yīng)保持斜立或平放（瓶口長時間開口直立 ,易增加落菌機(jī)會）。 ? 吸取各種用液應(yīng)分別使用吸管，不能混用。 五 )、培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)分析 ? 培養(yǎng)細(xì)胞隨貼附支持物形狀不同而形態(tài)各異，最常見的是貼附于平面支持物細(xì)胞。在一般光鏡下生存中的細(xì)胞是均質(zhì)而透明的，結(jié)構(gòu)不明顯。細(xì)胞在生長期常有 12個核仁在細(xì)胞機(jī)能狀態(tài)不良時，細(xì)胞輪廓會增強(qiáng)，反差增大。若胞質(zhì)中時而出現(xiàn)顆粒、脂滴和腔泡等，表明 細(xì)胞代謝不良。 動物細(xì)胞培養(yǎng)中血清的作用： ? （ 1）提供有利于細(xì)胞生長增殖所需的激素、生長因子或提供合成培養(yǎng)基所缺乏的營養(yǎng)物質(zhì)。 （ 2）提供可識別金屬、激素、維生素和脂質(zhì)的結(jié)合蛋白，并通過與上述物質(zhì)的結(jié)合而起到穩(wěn)定和調(diào)節(jié)上述物質(zhì)的作用。此外結(jié)合蛋白還可消除某些毒素和金屬對細(xì)胞的毒性作用。 （ 3）提供貼壁細(xì)胞固著于適當(dāng)?shù)母街嫠璧馁N壁因子和擴(kuò)展因子。 （ 4）提供蛋白酶抑制劑，使細(xì)胞免受蛋白酶的損傷。 ? （ 5）提供 PH\緩沖物質(zhì)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基 PH。 （ 6）影響培養(yǎng)系統(tǒng)中的某些物理特性如：剪切力、黏度、滲透壓和氣體傳遞速度等。 血清可能引發(fā)的問題 ? （ 1）所有的血清都是一種成分不確定的混合物，批與批血清之間的組分存在差異； （ 2）血清中含有某些不利于細(xì)胞生長的毒性物質(zhì)或抑制物質(zhì)，對某些細(xì)胞的體外培養(yǎng)有去分化作用。 (血清來源于動物，有可能攜帶傳染源，包括病毒和有毒物質(zhì)，對正在生長的細(xì)胞系或者制品帶來風(fēng)險(xiǎn) ) ? （ 3）血清中大量成分復(fù)雜的蛋白質(zhì)給疫苗、細(xì)胞因子、單克隆抗體等細(xì)胞產(chǎn)品的分離純化帶來很大困難。 (4)培養(yǎng)液營養(yǎng)的不足，細(xì)胞密度低、活力低，影響了細(xì)胞表達(dá)，導(dǎo)致疫苗等生物制品的生產(chǎn)效率和產(chǎn)量低。 cell lin 細(xì)胞系或細(xì)胞株的命名 HeLa：為供體患者的姓名（來源于宮頸癌） CHO：中國地鼠卵巢細(xì)胞（ Chinese Hamster Ovary） 宮 743：宮頸癌上皮細(xì)胞， 1974年 3月建立 NIH3T3：美國國立衛(wèi)生研究院（ National Institute of Health）建立；每 3天傳代，每次接種 3 105細(xì)胞／毫升。
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