動物細胞的微囊化培養(yǎng)-資料下載頁
2025-05-13 17:18本頁面
【正文】 /ml 其它的微囊化方法 （ 1）海藻酸鈣微囊 以甲基纖維素代替海藻酸（ PLL）的方法，將動物細胞與 %甲基纖維素的 CaCL2溶液（ %）以 1：3的比例混合，然后將混合物滴入 %的海藻酸鈉溶液中，反應 15min后在液滴四周就形成了一層海藻酸鈣的膜，包圍動物細胞在囊內，一般微囊直徑達。 此方法簡單，但強度不夠，容易破碎。 （ 2）脫乙酰幾丁質 /海藻酸鈉微囊 用 1g/L的脫乙酰幾丁質（ )代替PLL/ALG法中的 PLL，在脫乙酰幾丁質與海藻酸鈉反應 20min后，再用 處理，使微囊內重新液化。膜的孔徑受脫乙酰幾丁質溶液的離子強度的影響，此法同樣也存在強度不夠的問題。 （ 3） PLL/脫乙酰幾丁質 /海藻酸鈉雙層膜微囊 包有細胞的海藻酸鈉凝膠珠與脫乙酰幾丁質溶液反應成膜后，用生理鹽水洗滌再加入到 ，再經生理鹽水洗滌，與 （相對分子量22021）反應 6min以穩(wěn)定膜，同樣可以形成微膜。 （ 4）脫乙酰幾丁質 /羧甲基纖維素（ CMC）微囊 利用脫乙酰幾丁質與 CMC的靜電作用形成半透膜使細胞微囊化的方法。 將含有細胞的羥甲基纖維素鈉鹽（ CMC）溶液經微囊發(fā)射器噴射入脫乙酰幾丁質溶液中，反應 25min，然后倒入磷酸緩沖液中以減少幾丁質的粘度，用離心的方法收集微囊、培養(yǎng)。 （ 5）甲基丙烯酸乙基脂 /甲基苯烯酸甲酯（ HEMA/MMA）共聚物微囊 HEMA/MMA、 PEG600和細胞溶液:60:，經過空氣套筒的針頭噴入碳酸二乙酯中，形成懸浮液與生理鹽水混合，溫和攪拌，使微囊完全形成并沉淀。 第二節(jié) 微囊化細胞的培養(yǎng) 一、微囊化培養(yǎng)的細胞種類 ?在微囊內，很多動物細胞，不管是 懸浮細胞還是貼壁細胞都能良好地生長。 據報道，僅雜交瘤細胞就有 100多種已被微囊化培養(yǎng)。 ?重組成纖細胞 HBS1在貼壁生長時，細胞呈棱形單層生長，而微囊化后形態(tài)發(fā)生了很大的變化， 由棱形變成了球形，并且呈三向實體生長 ，逐漸成團，與動物體內的組織形態(tài)很相識，這可能反應了微囊的微環(huán)境比較接近動物體內的環(huán)境。 二、培養(yǎng)條件 培養(yǎng)容器：小規(guī)模的用到轉瓶、方瓶等。大規(guī)模培養(yǎng)用搖瓶和生物反應器。 培養(yǎng)基： DMEM,RPMI和 EMA 微囊的大?。何⒛倚。镔|的傳遞迅速，營養(yǎng)物和氧氣可以很快地進入微囊內，以供給細胞生長所需要，同時代謝產物也能及時地排放到微囊外面。當 PLL/ALG微囊的直徑超過 500181。m 時 ，細胞的增殖受到明顯的抑制。 微囊的體積和工作總體積之比：通常在（ 1： 10）～（ 1： 2）的范圍內。他們間的比值大則生產等量產品可減少生物反應器的體積。對大規(guī)模生產是非常有利的。 可以加大攪拌速度和通氣量，但要注意不破壞微囊。 第三節(jié) 微囊化動物細胞的應用 目前，微囊化細胞可以在兩個方面應用： 一是 培養(yǎng)微囊化動物細胞以生產一些藥物。 二是 作為藥物直接用于治療或者作為篩選藥物之用。 一、生產藥物上的應用 單克隆抗體的生產 高值生化藥物的生產 微囊化重組成纖細胞 BSH1分別進行培養(yǎng)瓶和celligen生物反應器內培養(yǎng)，細胞密度可達 1 108～ 2 108個 /ml微囊 干擾素的生產 Jarvis和 Grdina通過試劑和病毒方法誘導微囊化 FS1和 Namalwa細胞生產干擾素，這兩種細胞在微囊中生產比懸浮培養(yǎng)或單層培養(yǎng)更旺盛 ，兩細胞在微囊中生產的干擾素與懸浮培養(yǎng)或單層培養(yǎng)的總產量相同。 二、在治療及藥物篩選上的應用 人工器官 微囊化動物細胞在排除免疫反應上可能有普遍的意義。人們已將某種器官的細胞微囊化并植入體內以期望能代替這些器官的功能。 微囊化大鼠蘭氏胰島細胞注入大鼠腹腔內，可用于治療糖尿病。 當 4 10～ 10個細胞 /ml微囊注入體內后，當天即使血糖由 400～ 500mg/dL減至100mg/dL左右，并能長期維持正常血糖水平，在360天內不出現(xiàn)糖尿病癥狀。 抗癌藥物的篩選 微囊化的腫瘤細胞用于估價抗癌藥物對活體的作用。人的腫瘤細胞經微囊化后注入小鼠腹腔中，服用受檢的抗癌藥，檢測微囊化的腫瘤細胞對藥物的反應，結果發(fā)現(xiàn)抗癌藥能穿透微囊的膜作用與微囊中的腫瘤細胞，抑制或殺滅的水平與其他體外或體內測定的藥效一致。 復習題： 微囊化動物細胞必須具備的條件？ 聚賴氨酸 /海藻酸微囊化原理及制備微囊化動物細胞的步驟？ 影響微囊化的因素？ 微囊化動物細胞的應用？
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