分子生物學(xué)第三次ppt課件-資料下載頁
2025-05-12 06:49本頁面
【正文】 復(fù)制子水平調(diào)控，決定復(fù)制的起始與否 M G1 G2 S 聚合酶鏈式反應(yīng) PCR 聚合酶鏈式反應(yīng)（ Polymerase Chain Reaction， PCR）是體外酶促合成特異 DNA片段的一種方法，為最常用的分子生物學(xué)技術(shù) 典型的 PCR由（ 1）高溫變性 （ 2）引物與模板退火； （ 3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的 DNA得以迅速擴增。其主要步驟是：將待擴增的模板 DNA置高溫下（通常為 93℃ 94℃ ）使其變性解成單鏈；人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短；耐熱的 DNA聚合酶（ Taq酶）在 72℃ 將單核苷酸從引物的 3’端開始摻入，以目的基因為模板從 5’→3 ’方向延伸 PCR能在（ pg）水平起始 DNA混合物中的目的基因擴增達到納克、微克、毫克級的特異性 DNA片段。因此， PCR技術(shù)一經(jīng)問世就被迅速而廣泛地用于分子生物學(xué)的各個領(lǐng)域。它不僅可以用于基因的分離 克隆和核苷酸序列分析，還可以用于突變體和重組體的構(gòu)建。 課后復(fù)習(xí)題： DNA半保留復(fù)制 DNA 的半不連續(xù)復(fù)制 復(fù)制子 復(fù)制叉 如果細菌環(huán)狀染色體的復(fù)制是雙向的，并且從固定的復(fù)制起點開始，每個復(fù)制差以 16um/min的速度移動，細菌染色體長 1280um,完成整個染色體復(fù)制需要多少時間？當細菌在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基每 20min 分裂一次，也就是說第一輪復(fù)制尚未完成就開始第二輪復(fù)制，此時染色體有幾個復(fù)制叉？ 課后復(fù)習(xí)題： DNA半保留復(fù)制 DNA 的半不連續(xù)復(fù)制 復(fù)制子 復(fù)制叉 如果細菌環(huán)狀染色體的復(fù)制是雙向的，并且從固定的復(fù)制起點開始，每個復(fù)制叉以 16um/min的速度移動，細菌染色體長 1280um,完成整個染色體復(fù)制需要多少時間？當細菌在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基每 20min 分裂一次，也就是說第一輪復(fù)制尚未完成就開始第二輪復(fù)制，此時染色體有幾個復(fù)制叉？ DNA損傷的原因及后果 電離輻射 可見光 H+ 烷化劑 8oxoG P/P 復(fù)制錯誤 核苷類似物 mC U DNA損傷的后果 信號傳導(dǎo)異常 長時辰效應(yīng) 老化 腫瘤 疾病 DNA 修復(fù)機制 短期效應(yīng) 異常增生和代謝 生理功能紊亂 細胞死亡 細胞增殖減少 基因表達異常 基因組不穩(wěn)定 一、 DNA 的修復(fù) DNA 修復(fù)系統(tǒng) 功能 錯配修復(fù) 恢復(fù)錯配 堿基切出修復(fù) 切除突變的堿基 核苷酸切除修復(fù) 修復(fù)被破壞的 DNA DNA 直接修復(fù) 修復(fù)嘧啶二體或甲基化DNA 大腸桿菌中 DNA的修復(fù)系統(tǒng) 常見的 DNA損傷及其修復(fù)機制 DNA損傷因素 DNA損傷類型 修復(fù)機制 X射線、氧自由基、烷化劑 自發(fā)脫堿基 單鏈斷裂、無堿基位點、氧化性堿基（如 8氧鳥嘌呤）脲嘧啶 堿基切除修復(fù) 紫外線和多環(huán)芳烴 環(huán)丁烷嘧啶二聚體等大的紫外線光產(chǎn)物和穩(wěn)定的多環(huán)芳烴化合物等大分子 DNA加合物 核苷酸切除修復(fù) 復(fù)制錯誤和烷化劑 堿基錯配和缺失（插入） 錯配修復(fù) 大腸桿菌 DNA 甲基化位點 新合成的 DNA Mispaired bases 錯配修復(fù) 紫外線可引起 DNA的交聯(lián) , DNA與蛋白質(zhì)的交聯(lián) 。 DNA紫外線損傷的光復(fù)合酶直接修復(fù) ?指切除和替換由內(nèi)源性化學(xué)物作用產(chǎn)生 的 DNA堿基損傷 , 是切除修復(fù)的一種。 ?受損堿基移除是由多個酶來完成的。 ?主要針對 DNA單鏈斷裂和小的堿基改變 及氧化性損傷。 缺失堿基位點 (4) Base Excision Repair ? 體內(nèi)識別 DNA 損傷最多的修復(fù)通路 ? 主要修復(fù)扭曲雙螺旋結(jié)構(gòu)的 DNA 損傷 ? 修復(fù)時切除含有損傷堿基的那一段 DNA 。 核苷酸切除修復(fù) (基因組修復(fù) – 人 ) 核苷酸切除修復(fù) (轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)修復(fù) 人類 )
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