【正文】 個(gè)復(fù)制起點(diǎn) (3)接合轉(zhuǎn)移區(qū) F 因子 /質(zhì)粒與 R質(zhì)粒的結(jié)構(gòu) ? F因子整合進(jìn)入染色體 ,形成 Hfr株 含有 Is的質(zhì)粒經(jīng)變性后形成柄環(huán)結(jié)構(gòu) IS 可以正反方向插入到 DNA（宿主、質(zhì)?；蚰承┦删w）中，常對(duì)插入位點(diǎn)后面的基因表達(dá)功能產(chǎn)生極性效應(yīng)。 2) 復(fù)合轉(zhuǎn)座子 , Tn 復(fù)合轉(zhuǎn)座子是一類帶有某些抗藥性基因（或其他宿主基因）的轉(zhuǎn)座子，其兩翼往往是兩個(gè)相同或高度同源的 IS序列。 復(fù)合轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座能力由 IS 決定 表 2 3 5 復(fù)合轉(zhuǎn)座子的結(jié)構(gòu)和功能轉(zhuǎn)座因子長度( b p )遺傳標(biāo)記末端組件方向 二組件的關(guān)系 組件的功能T n 9 033 1 0 0 KanRI S 9 0 3 反向 相同 二者皆有功能Tn9 2 5 0 0 CamRI S 1 正向 推測相同 預(yù)計(jì)有功能T n 1 0 9 3 0 0 TetRI S 1 0 R 有功能I S 1 0 L 反向 有 2 . 5 % 的差異 無功能Tn5 5 7 0 0 KanRI S 5 0 R 有功能I S 5 0 L 反向 1 b p 的改變 無功能 l 具有 IR、轉(zhuǎn)座酶基因、 調(diào)節(jié)基因（解離酶）、抗抗生素基因 l Tn1 (AmpR) Tn2 (AmpR) Tn3 (AmpR) Tn4 (AmpR StrR) Tn5 (KanR) Tn6 (kanR) Tn7 (StrR TmpR) Tn9 (CamR) Tn10 (TetR) kb 20 kb Tn3 IR TnpA Res TnpR AmpR IR 38bp 38bp 轉(zhuǎn)座酶 regulator β 內(nèi)酰胺酶 復(fù)合轉(zhuǎn)座子 兩種類型 b）兩端重復(fù)序列為 IS的復(fù)合轉(zhuǎn)座子 . IS插入到功能基因兩端，可能形成復(fù)合轉(zhuǎn)座因子 IS IS IS IS L IS R 臂 中心區(qū) 臂 transposition 兩側(cè)的 IS既可以是 IR，又可以是DR狀態(tài)（ IR多） 當(dāng)兩個(gè) IS組件相同時(shí)，其中任一個(gè)都可行使轉(zhuǎn)座功能； 不同時(shí)，主要依靠一個(gè)。 3 轉(zhuǎn)座噬菌體 （巨型轉(zhuǎn)座子 ） C B 33 kd 與轉(zhuǎn)座有關(guān) A 70 kd 轉(zhuǎn)座酶 U, S 毒性蛋白 attL, attR 與寄主同源，反向重復(fù)，轉(zhuǎn)座必需 Gin G區(qū)倒位酶 att L C A B S U att R 150bp G 倒位區(qū) 38kb P gin 以 為寄主的溫和型噬菌體（溶源、裂解） Mu的插入途徑 a） 侵入的 Mu在溶源化過程中任意插入寄主 DNA （兩側(cè)各 5bp的靶位點(diǎn)序列重復(fù)） b） 進(jìn)入 裂解生長后，復(fù)制產(chǎn)生后代 Mu DNA幾乎全部插入寄主 DNA中，并可繼續(xù)轉(zhuǎn)座（形成寄主DNA和 Mu的共合體），噬菌體成熟時(shí)，切斷共合體包裝。 a) 不依賴 供體序列 與靶點(diǎn)間序列的同源性 b) 轉(zhuǎn)座不是簡單的轉(zhuǎn)移，涉及轉(zhuǎn)座子的復(fù)制 (熱點(diǎn) ) ( 在 3kb區(qū)域內(nèi)的隨機(jī)插入 ) d) 某些轉(zhuǎn)座因子（ Tn3）對(duì)同類轉(zhuǎn)座因子的插入具有排他性（免疫性） e) 靶序列在轉(zhuǎn)座因子兩側(cè)會(huì)形成正向重復(fù) f) 轉(zhuǎn)座因子的切除與轉(zhuǎn)座將產(chǎn)生復(fù)雜的遺傳學(xué)效應(yīng) 轉(zhuǎn)座重組的特點(diǎn) c) 轉(zhuǎn)座插入的靶點(diǎn)并非完全隨機(jī)（插入專一型） 三、轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)作機(jī)制及模式 三種類型：復(fù)制型和非復(fù)制型 復(fù)制型轉(zhuǎn)座模式 實(shí)質(zhì)：轉(zhuǎn)座子元件被復(fù)制并被移動(dòng)到受體位點(diǎn)，最終轉(zhuǎn)座過程 擴(kuò)增了轉(zhuǎn)座子的拷貝（供點(diǎn)、受點(diǎn)） 需兩種酶： 轉(zhuǎn)作酶（作用于原拷貝兩末端） 解離酶（作用于復(fù)制后的拷貝） 模式： 兩大步 a) 共合體形成 切口－連接－復(fù)制 b) 拆分 靶位點(diǎn)的 DR形成 非復(fù)制型轉(zhuǎn)座模式 供體上最終產(chǎn)生雙鏈斷裂 供體位點(diǎn)如不能被修復(fù)則有致死效應(yīng) 保守型轉(zhuǎn)座模式 另一種非復(fù)制型 與 λ 整合機(jī)制相似 其轉(zhuǎn)座酶與 λ 整合酶家族有關(guān) TnA轉(zhuǎn)座模式 ? 復(fù)制型轉(zhuǎn)座 轉(zhuǎn)座酶 (tnpA)、 解離酶 (tnpR) ? 解離酶需要特異的內(nèi) 部位點(diǎn) 雙重功能：解離功能 tnpA及自身的阻遏物 ? 拆分位點(diǎn) –res 共合體拆分位點(diǎn) ? 轉(zhuǎn)座結(jié)果產(chǎn)生 5bp 的正向重復(fù)序列 四、轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座頻率的調(diào)控 ? 每個(gè)轉(zhuǎn)座子控制自身轉(zhuǎn)座的核心 控制轉(zhuǎn)座酶的水平 不到一個(gè)轉(zhuǎn)座酶分子／世代／細(xì)胞 Tn10轉(zhuǎn)座機(jī)制 ? Tn10為復(fù)合型轉(zhuǎn)座子 ? IS10R元件提供轉(zhuǎn)座酶活性 合成轉(zhuǎn)座酶的序列 ? 自發(fā)轉(zhuǎn)座頻率 10－ 7 ? Tn10轉(zhuǎn)座酶水平是控制轉(zhuǎn)座的關(guān)鍵 ? 有兩種控制轉(zhuǎn)座的方式 ? PIN控制 IS10R的轉(zhuǎn)錄 弱啟動(dòng)子 a） 通過反義 RNA的翻譯水平控制 ? IS10R外側(cè)邊緣兩個(gè)啟動(dòng)子 ? POUT— 強(qiáng)啟動(dòng)子 右向轉(zhuǎn)錄宿主 DNA ? INRNA和 OUTRNA 有 36bp的重疊 穩(wěn)定性： OUTRNA??INRNA ? 大量 OUTRNA作為 INRNA的反義 RNA b） 甲基化作用控制轉(zhuǎn)座酶合成及其與 DNA的結(jié)合 ? Tn10轉(zhuǎn)座酶啟動(dòng)子含有 GATC序列（其它轉(zhuǎn)座子） ? Dam甲基化酶 作用使啟動(dòng)子相對(duì)鈍化 只能利用剛剛復(fù)制完成 時(shí)出現(xiàn)少數(shù)轉(zhuǎn)座酶 ? 此外， IS10R的末端 IR也含有 GATC， 甲基化的 GATC不能 結(jié)合轉(zhuǎn)座酶 ? Tn10在 DNA剛剛 復(fù)制后發(fā)生轉(zhuǎn)座 果蠅的轉(zhuǎn)座子 “ 雜種敗育” （ hybrid dysgenesis） 。 P（♂） P（♀） 雜種可育 M（♂） P（♀） 雜種 可育 P（♂） M（♀） 雜種 敗育。 P因子與雜種敗育 轉(zhuǎn)座酶 M FB因子 轉(zhuǎn)座的遺傳學(xué)效應(yīng) （ 1）插入突變 /失活或改變基因表達(dá)的模式； （ 2）插入位置上出現(xiàn)新基因（ ampR、 terR等 ） ； （ 3）改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)（缺失、倒位等）； （ 4）產(chǎn)生不穩(wěn)定的新的突變； （ 5）外顯子改組； （ 6）產(chǎn)生新的變異，有利于進(jìn)化。 轉(zhuǎn)座子的利用 ? 轉(zhuǎn)基因載體等 ? 轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法 ——以轉(zhuǎn)座子為探針，與目標(biāo)變異個(gè)體的 DNA雜交，篩選導(dǎo)致靶變異的鄰接基因。 THANK YOU ALL