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2025-05-05 18:34本頁面
【正文】 積越小，抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。 復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在 40C，避免再凍起來！ 40C短暫保存 12周 對抗體活性是沒有影響的。 任何時候，絕對避免反復(fù)凍融！ Western Blot常見問題分析 SDSPAGE電泳 ? 膠不平？ ? 凝膠漏液？ ? 膠板洗刷干凈 ? 加入 APS和 TEMED的量要合適 ? 加入試劑后搖勻，使其充分混合，防止部分膠塊聚合不均勻 ? 溫度合適，受熱不均勻?qū)е履z聚合不均勻 ? 兩塊玻璃板底部要對齊 ? 條帶比正常的窄？ ? “ 微笑 ” 或 “ 倒微笑 ”條帶？ ? 凝膠聚合不均勻，灌膠時候盡量混合均勻，動作輕緩 ? 拔梳子要迅速，且豎直的拔 ? 樣品鹽濃度過高會擠壓其他條帶導(dǎo)致寬窄不一，純化樣品，調(diào)整鹽濃度 ? 膠板底部有氣泡會影響電泳效果，應(yīng)趕走氣泡。同時注意電泳槽裝置是否合適 轉(zhuǎn)膜及抗體檢測 ? 凝膠腫脹或卷曲？ ? 條帶歪斜或漂移？ ? 單個或多個白點？ ? 轉(zhuǎn)膜緩沖液過熱 ？ ? 可將凝膠在轉(zhuǎn)膜之前放到轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡 510min ? 電轉(zhuǎn)儀長期使用導(dǎo)致海綿變薄， “ 三明治 ” 結(jié)構(gòu)不緊湊導(dǎo)致?？稍趦蓧K海綿之間墊上少許普通的草紙 ? 確保膜和膠塊之間沒有氣泡 ? 緩沖液中離子濃度太低，電流或電壓太高。轉(zhuǎn)膜過程注意降溫 背景太高 1. 膜沒有均勻浸濕 2. 膜或者緩沖液污染 3. 封閉不充分 4. 抗體與封閉劑出現(xiàn)交叉反應(yīng) 5. 抗體濃度過高 原因 對 策 1. 轉(zhuǎn)膜前用轉(zhuǎn)移緩沖液將膜完全浸濕 2. 拿取膜與吸水紙時要戴手套，更換新鮮轉(zhuǎn)膜緩沖液 3. 檢測一抗、二抗與封閉劑是否有交叉反應(yīng) 4. 雜交前檢測一抗、二抗的工作濃度
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