cr實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)ppt課件-資料下載頁
2025-05-05 12:06本頁面
【正文】 PCR產(chǎn)物拷貝量大 (一般為 1013拷貝 /ml)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于 PCR檢測數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的 PCR產(chǎn)物污染，就可形成假陽性。 ? 4. 氣溶膠污染：在空氣與液體面摩 擦?xí)r就可形成氣溶膠，在操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動反應(yīng)管，開蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆粒可含48000拷貝，因而由其造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問題。 假陽性問題的試驗(yàn)控制 ? 在每次 PCR檢測時(shí)，一定設(shè)立陰性對照樣品和陽性對照樣品。陰性對照樣品檢測為陰性時(shí)，表明試驗(yàn)全部過程的試劑沒有受到污染；陽性對照樣品檢測為陽性時(shí)，表明 DNA提?。?RNA提取、 RNA反轉(zhuǎn)錄）、 DNA擴(kuò)增和電泳鑒定工作體系正常。在陰性對照樣品和陽性對照樣品檢測結(jié)果成立的前提下，才能對檢測樣品進(jìn)行判定。只有設(shè)立試驗(yàn)全程的對照，才能證明試驗(yàn)結(jié)果成立。 （二）假陰性 如果實(shí)驗(yàn)中設(shè)置的陽性對照未能擴(kuò)增成陽性結(jié)果，提示本次實(shí)驗(yàn)中可能有假陰性結(jié)果。但這里應(yīng)注意，許多國產(chǎn) PCR試劑盒中陽性對照采用質(zhì)粒 DNA，和標(biāo)本相比來說，不需純化提取核酸的步驟，因此，如果在標(biāo)本核酸純化提取步驟有問題，即使陽性對照均呈陽性，標(biāo)本檢測中還可能有假陰性。 造成假陰性原因： ： 模板中含有雜蛋白質(zhì)；模板中含有 Taq 酶抑制劑；模板核酸變性不徹底等。 ： PCR實(shí)驗(yàn)的環(huán)節(jié)很多，而且對每一環(huán)節(jié)的質(zhì)量要求都很高，例如少加、漏加試劑、離心不充分、循環(huán)參數(shù)設(shè)計(jì)錯(cuò)誤等等都能造成結(jié)果的假陰性。 ? 假陰性解決方案 PCR試劑是否失效 DNA提取方法，驗(yàn)證 DNA提取試劑是否失效。 （三）污染處理 1. 提取時(shí)所用的 EP管、玻璃等器皿全部都要用 %DEPC水浸泡。然后烘干，高壓滅菌，再烘干。 2. 用 DEPC水洗過后當(dāng)然不能用雙蒸水洗了。 3. 玻璃器皿干烤： 180℃ ， 8小時(shí)或更長時(shí)間；小器皿也可以用少許氯仿處理一下。另外，鐵制品、研砵等也可倒上酒精直接燒。 4. 操作人員戴一次性口罩、帽子、手套，實(shí)驗(yàn)過程中手套要勤換。 謝 謝！
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