【正文】 用稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，稀釋液破壞 紅細(xì)胞和大部分其他白細(xì)胞 ，而嗜酸性粒細(xì)胞不被破壞 , 并使嗜酸性粒細(xì)胞顆粒染色 而被識(shí)別， → 混勻后充入計(jì)數(shù)池中 , → 計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，即可算出每升血中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。 第二節(jié) 白細(xì)胞參數(shù)檢查 p55 【 器材 】 同白細(xì)胞計(jì)數(shù) 【 試劑 】 試劑特點(diǎn) : ① 嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液為低滲溶液， 可使紅、白細(xì)胞溶解破裂， ② 含對(duì)嗜酸性細(xì)胞的保護(hù)劑 , 如乙醇、乙二醇、丙酮 , 而嗜酸性細(xì)胞對(duì)低滲抵抗大，故能保存 , ③ 并使嗜酸性粒細(xì)胞顆粒染色而被識(shí)別。 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) 實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) Ｐ 36 伊紅 ── 丙酮稀釋液： 20g/L伊紅 5ml 使顆粒著鮮紅色 丙酮 5ml 保護(hù)嗜酸性粒細(xì)胞 蒸餾水 加至 100ml 本試劑新鮮效果好，最好一周配一次 溴甲酚紫稀釋液： 溴甲酚紫 25mg (使嗜酸性顆粒著著深藍(lán)色 ) 蒸餾水加至 50ml 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) 【操作】 取 嗜酸性粒細(xì)胞 稀釋液 ＋未梢血 20ul→ 立即混勻 → 紅細(xì)胞溶解后 → 混勻 →充入雙側(cè)計(jì)數(shù)池內(nèi) (2個(gè)）→ 靜置 2～ 5分鐘 → 計(jì)數(shù)２個(gè)計(jì)數(shù)池共 10個(gè)大方格內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。 (溴甲酚紫稀釋液中 嗜酸性粒細(xì)胞顆粒著 深藍(lán)色 。 伊紅 丙酮稀釋液中 嗜酸性粒細(xì)胞顆粒著 深紅色 ) 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) 【 計(jì)算 】 ： E/L＝ （ 10大格 E數(shù) /10） 10 20 106 = 10大格 E數(shù) 109 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) 【 結(jié)果報(bào)告 】 E/L :ΔΔΔ 109/L 【 方法學(xué)評(píng)價(jià) 】 顯微鏡法 : ① 重復(fù)性差 ,精確性不如血液分析儀 。 ② 用血涂片分類由于分布不勻而有差異 。 ③ 嗜酸性粒細(xì)胞絕對(duì)值 ,比百分比更有意義 。 ④ 直接計(jì)數(shù)比間接計(jì)算準(zhǔn)確 。 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) 血液分析儀法 : ① 可提供 嗜酸性粒細(xì)胞絕對(duì)值 、 百分比 、直方圖和散點(diǎn)圖 。 ② 當(dāng) 嗜酸性粒細(xì)胞異常高時(shí) ,可報(bào)警 。 ③ 五分類血液分析儀是目前 嗜酸性粒細(xì)胞 最有效的篩選方法 。 ④ 若儀器提示 嗜酸性粒細(xì)胞增高時(shí) , 并有 直方圖和散點(diǎn)圖 異常 。 應(yīng)用顯微鏡法作直接計(jì)數(shù) 。 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)方法學(xué)評(píng)價(jià) 血液加入稀釋液后，要及時(shí)混勻，混勻過(guò)程中，不宜過(guò)分振搖，防嗜酸性粒細(xì)胞破碎。 住院病人應(yīng)統(tǒng)一采血時(shí)間，以免受日間生理變化 的影響。 【 質(zhì)量控制 】 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)在 1h內(nèi) 計(jì)數(shù)完畢，否則嗜酸性粒 細(xì)胞亦將逐漸破碎。結(jié)果偏低，不易識(shí)別。 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) 注意與中性粒細(xì)胞區(qū)別 ,以免使結(jié)果偏高 , 中性顆粒著色淺，顆 粒較小。 含 丙酮和乙醇嗜酸性細(xì)胞保護(hù)劑的因會(huì)揮發(fā) ， 應(yīng)注意其濃度變化 ， 如Ｅ破壞，可增大丙酮和乙醇嗜酸性細(xì)胞保護(hù)劑用量 如Ｎ不破壞，可減少丙酮和乙醇嗜酸性細(xì)胞保護(hù)劑用量 。 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) 溴甲酚紫在酸性或中性時(shí)為橙黃色，在堿性環(huán)境顯藍(lán)色，故器具要防酸 【 參考值 】 ～ 10 9/L 【 生理變化 】 ： 腎上腺皮質(zhì)激素的作用 : ① 阻止骨髓釋放嗜酸性粒細(xì)胞， ②同時(shí)促使血中嗜酸性粒細(xì)胞向組織浸潤(rùn) 。 勞動(dòng)、寒冷 、饑餓、 各種精神刺激 → 交感神經(jīng)興奮 → 垂體前葉分泌促腎上腺皮質(zhì)激素 (ACTH)↑→ 腎上腺皮質(zhì)分泌腎上腺皮質(zhì)激素 ↑ → 使外周血E↓ 。 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) 年齡 : 5歲以下兒童 嗜酸性粒細(xì)胞 (0～ 10 9/L) 5 ～ 15歲 (0～ 10 9/L) 日間變化 : 1d內(nèi)有波動(dòng) ,與 腎上腺皮質(zhì)激素分泌有關(guān) 白天低 ,夜間高 ； 上午波動(dòng)大 , 下午恒定 正常人 1d內(nèi)可達(dá) 30倍 因此 ,宜早晨 8點(diǎn)測(cè)定 嗜酸性粒細(xì)胞基礎(chǔ)水平 ,。 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) 【 嗜酸性粒細(xì)胞 病理變化 】 增高： 成人 嗜酸性粒細(xì)胞 10 9/L為增高 輕度增高 ～ １ .5 10 9/L 中度增高 １ .5 ～ 5 10 9/L 重度增高 大于 5 10 9/L 見(jiàn)于下列情況： (1)寄生蟲(chóng)?。嚎蛇_(dá) 10%或更多 血吸蟲(chóng)、肝吸蟲(chóng)、肺吸蟲(chóng)、包蟲(chóng)、 鉤蟲(chóng)、絲蟲(chóng)增高 蛔蟲(chóng) （ 2） 變態(tài)反應(yīng)性疾病：通常 1～2 10 9/L，偶爾更高 。 ①哮喘輕度增高、 ②壞死性血管炎 平均 8 10 9/L ③ 藥物過(guò)敏、尋麻疹、血管神經(jīng)性水腫、 血清病 、異體蛋白過(guò)敏等嗜酸性粒細(xì)胞 輕度或中度 ↑ 。 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) （ 3）某些皮膚病： 如濕疹、剝脫性皮炎 、天庖瘡 、 銀屑病輕度或中度 ↑ (4) 血液病 : ① 慢性粒細(xì)胞白血病 (可 達(dá) 10%以上 ,為幼稚型 )。 ② 多發(fā)性骨髓瘤、真性紅細(xì)胞增多癥、脾切除等有不同程度增高 。 ③ 嗜酸性粒細(xì)胞 白血病 (可 ?90% , 為幼稚型 )。 ④ 淋巴瘤 (在 10%左右 )。 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) (5)某些惡性腫瘤 :肺癌 (6)猩紅熱是急性傳染病中維一使 E ↑ (7)其他 : 風(fēng)濕性疾病、腦垂體前葉功能 ↓ 、 腎上腺皮質(zhì)功能 ↓ 、過(guò)敏性腎炎 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) 減少： (1)長(zhǎng)期使用腎上腺皮質(zhì)激素 (2)急性傳染病的早期 ,如傷寒、副傷寒。 (3)大手術(shù)、燒傷 。 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)的臨床應(yīng)用： （ 1）觀察急性傳染病 人的預(yù)后： （ 2）手術(shù)和燒傷病人 的預(yù)后： ①手術(shù)后 4h嗜酸粒細(xì)胞顯著減少，甚至消失 → 24～ 48h后逐漸增高。 癥狀嚴(yán)重 → 嗜酸性粒不減少 → 皮質(zhì)功能衰竭。 ② 嗜酸粒特續(xù)下降或完全消失 →病情嚴(yán)重 ③ 嗜酸粒重新出現(xiàn)，甚至?xí)簳r(shí)增多， 為恢復(fù)期表現(xiàn) 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù) 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)的臨床應(yīng)用： （ 1）觀察急性傳染病 人的預(yù)后 （ 2）手術(shù)和燒傷病人 的預(yù)后： （ 3）判斷垂體、腎上腺皮質(zhì)功能 嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)