em原理與結(jié)構(gòu)ppt課件-資料下載頁
2025-04-28 22:31本頁面
【正文】 色差 生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) 形成色差的原因： △ f =Cc(△ V/V 2△ I/I) 式中 : △ f:焦差； Cc：色差系數(shù) △ V/V：加速電壓相對起伏 △ I/I：透鏡激勵電流相對起伏 – 加速電壓的變化 – 透鏡激勵電流變化 – 電子與樣品的交互作用 減小色差的方法： – 穩(wěn)定加速電壓和透鏡激勵電流 10－ 6／ min，減小光闌直徑（即孔徑角） – 樣品做薄，提高加速電壓，使電子穿過樣品的速度變化小。 – 采用電子速度過濾器，減少參與成像電子速度分布 生物電子顯微技術(shù) C. TEM最佳分辨率 電鏡的分辨率主要取決于物鏡的分辨率 物鏡的分辨率取決于： –衍射差： ?d＝ ?/nsin?= ? / ? –球差 : ?s＝ Cs?3 –色差、像散：可以忽略 只考慮衍射差和球差的綜合效應 ?最佳 ＝ (?/ Cs)1/4 ?opt=(Cs ?3) 188。 ?最佳 = 22 ds ??? ?＝生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) ?實際 ＝ (?s2+ ?d2+ ?a2+ ?c2)1/2 一般 ?TEM＝ ～ 1nm （二） 有效放大倍數(shù)： –植物細胞直徑 100?m –動物 細胞 10～ 20 ?m –細菌的直徑 1 ?m –病毒直徑 10～ 100nm –生物大分子 1－ 10nm –小分子 ~1nm –原子直徑 M有效 ＝ ?肉眼 ／ ?儀器 生物電子顯微技術(shù) 二 透射電鏡的其它性能指標 1. 場深： 也稱 景深 ，指在保持像清晰度的條件下，物面允 許移動的距離。 Dfi=?/? 特點： ⑴ 場深大 , 可達 1 ?m ⑵容易聚焦，物面位置允許有 Dfi長度的誤差 ⑶對于厚度小于場深的樣品，都能獲得高分辨率 圖像，尤其適合復型樣品；但同時也導致圖像 上下疊加背底昏暗 2. 焦深 ： 在保持像清晰度的條件下 ,像面許移動的距離 Dfo=M2* Dfi 特點：焦深大 ,M=500時， 500?m， 最大可達 10000m 照相時非常方便 生物電子顯微技術(shù) 生物電子顯微技術(shù) 三 適用于透射電鏡的樣品 1. 從樣品類別上分： –超薄切片 –冷凍蝕刻的復型膜 –懸浮樣品的滴片 –直接培養(yǎng)的單層細胞 2. 從研究內(nèi)容上分 –免疫電子顯微技術(shù) –電鏡放射自顯影技術(shù) –電鏡細胞化學技術(shù) – X－ ray微區(qū)分析 生物電子顯微技術(shù) 免疫電子顯微鏡技術(shù)的定義： (Immune Electron Microscopy: IEM)又叫免疫電鏡細胞化學技術(shù)，就是將免疫化學技術(shù)與電鏡技術(shù)有機地結(jié)合起來，研究抗原抗體相互作用的一種方法?？乖贵w之間的相互作用具有較高的特異性，相互作用后，可直接形成或通過某種標記物形成大分子復合物或聚合物。該生成物具有電子致密性，在電鏡下可以觀察到，又不影響免疫反應的特異性。那么，就可以在細胞超微結(jié)構(gòu)水平上或分子水平上研究免疫作用。這種在很高分辨本領(lǐng)電鏡下非常精確地顯示抗原所在位置的方法稱為～ 生物電子顯微技術(shù) 免疫電子顯微鏡技術(shù)的 原理： ? 用化學方法將不同大小的金粒與特異性抗體球蛋白在不影響特異性蛋白質(zhì)免疫特性的前提下結(jié)合起來，制備成金標抗體 (GA)。當 GA與相應的抗原 (直接法 )或抗原 — 抗體復合物 (間接法 )相遇時，即結(jié)合形成免疫金復合物，可用透射電鏡觀察反應結(jié)果：有金粒的地方，即為抗原或抗原 — 抗復合物存在的地方。 ? 不同抗原肽以不同種動物供體來的相應標記抗體順序反應，可在同一組織切片中標記兩種抗原肽?？贵w以小金粒標記，另一抗體以大金粒標記，在透射電鏡下很容易將兩者區(qū)分開來。 兩種抗原肽分別與來自不同種動物供體的抗體發(fā)生反應，兔初抗用小粒金標記的豬抗兔 IgG檢測；而豚鼠初抗 IgG用大粒金標記的兔抗豚鼠 IgG檢測。 生物電子顯微技術(shù) 舉例： 驗證植物的胞間連絲組分中，是否有 actin（肌動蛋白）和 myosin（肌球蛋白）的存在。 生物電子顯微技術(shù) VAP (6nm gold particles) and MP (18nm gold particles) A coiledcoil interaction mediates cauliflower mosaic virus celltocell movement Livia Stavolone, Maria Elena Villani, Denis Leclerc, and Thomas Hohn PNAS April 26, 2022 vol. 102 no. 17 6219–6224 生物電子顯微技術(shù) 作業(yè) 1. 名詞解釋：分辨率 振幅差 場深 焦深 2. 透射電鏡主要由哪三大系統(tǒng)組成 ?其中每個 系統(tǒng)主要包括哪些部分 ? 3. 透射電鏡工作時為什么要求真空 ? 4. 電子束與樣品相互作用后產(chǎn)生哪些信息 ?其中又有哪些信息與透射電鏡的成像有關(guān)？ 5. 生物樣品的反差有什么特點 ? 怎樣提高生物樣品的反差 6. 簡述透射電鏡的基本成像過程。 7. 透射電鏡有哪些主要性能。 生物電子顯微技術(shù) 透射電鏡有哪些主要性能： TEM是以電子束作為照明光源的；裝有聚光鏡、物鏡、中間鏡、投影鏡一系列電磁透鏡；其分辨率可達 ~。有效放大倍數(shù)可達 100萬左右；散射反差和位相反差在其成像反差起主導作用；在放大 500倍時其焦深為 500 ?m，場深可達 1 ?m ；圖象用熒光板顯示，且無色彩；適于 100nm的超薄切片、復型膜等；要求樣品在真空條件下成像。
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