生物能源工作總結(jié)-資料下載頁
2025-04-14 04:39本頁面
【正文】 光度計(jì)，接種針，10ml 試管，50ml 離心管， 離心管，冰浴，微量進(jìn)樣器及吸頭。以上玻璃儀器和離心管需在用前滅菌，滅菌條件：120℃，15分鐘。材料：土壤農(nóng)桿菌LBA4404菌株或其它農(nóng)桿菌菌株試劑：YEB液體培養(yǎng)基（1L）：酵母提取物1g，牛肉膏5g，蛋白胨5g，蔗糖5g， , ，高壓滅菌；鏈霉素（Sm）儲(chǔ)液：125mg/ml N NaCl，高壓滅菌。20mM CaCl2，高壓滅菌。實(shí)驗(yàn)步驟1）. 挑取根癌農(nóng)桿菌LBA4404 單菌落于3ml 的YEB液體培養(yǎng)基（ 含Sm 125mg/l）中，28176。C振蕩培養(yǎng)過夜；2）. (Sm 125mg/l)液體培養(yǎng)基中，28176。；3）. 5000rpm, 離心5min；4）. 加入10ml NaCl，使農(nóng)桿菌細(xì)胞充分懸浮，5000rpm, 離心5min；5）. 棄上清，置于冰上，加入1ml預(yù)冷的20mM CaCl2，充分懸浮細(xì)胞，冰浴中保存，24小時(shí)內(nèi)使用，或分裝成每管200ml，液氮中速凍1 分鐘，置70176。C保存?zhèn)溆谩? 轉(zhuǎn)化，篩選：同實(shí)驗(yàn)二轉(zhuǎn)化，篩選步驟結(jié)果：通過篩選，得到了三種重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后的農(nóng)桿菌實(shí)驗(yàn)九：農(nóng)桿菌多次侵蝕藻類：目的：利用農(nóng)桿菌的侵蝕能力，進(jìn)行侵蝕藻類。藻類預(yù)培養(yǎng)（15天），農(nóng)桿菌侵染（數(shù)秒鐘），共培養(yǎng)（23天）篩選（培養(yǎng)基中加入抑菌抗生素和選擇抗生素），抗性藻類的獲得。結(jié)果：將含ADHPKY農(nóng)桿菌、含PDCPKY農(nóng)桿菌依次與小球藻共培養(yǎng)。通過篩選得到抗性小球藻。實(shí)驗(yàn)十：培養(yǎng)藻類目的：擴(kuò)增藻類，以便檢查目的基因是否表達(dá)，得到目的產(chǎn)物。以1/10的LB液體培養(yǎng)基，按10：1比例，恒溫光照，培養(yǎng)小球藻結(jié)果： 小球藻培養(yǎng)到500ml本項(xiàng)目目前已完成到生物能源各項(xiàng)專利的填寫與申報(bào)，實(shí)驗(yàn)階段做到了三種基因轉(zhuǎn)化后的農(nóng)桿菌與小球藻共培養(yǎng)階段。由于工作調(diào)動(dòng)，暫停該項(xiàng)目。未完成的實(shí)驗(yàn)有：實(shí)驗(yàn)十一：轉(zhuǎn)基因藻類的檢測(cè)。目的：基因轉(zhuǎn)化到藻類中， 需通過高科技方法檢測(cè)基因是否在藻類中有效穩(wěn)定的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)十二：設(shè)定藻類中目的產(chǎn)物的獲取工藝目的：藻類中基因表達(dá)的產(chǎn)物需通過有效的提取工藝來獲得，以便降低成本。
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