生物能源工作總結(jié)-文庫(kù)吧在線(xiàn)文庫(kù)
【正文】 m離心30s，去廢液。 取出離心吸附柱， 離心管（DNA溶液）置于20℃保存?zhèn)溆谩?制備農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞：實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑儀器：超凈工作臺(tái)，恒溫?fù)u床，冷凍高速離心機(jī)，高壓滅菌鍋，冰箱，70℃超低溫冰柜，分光光度計(jì)，接種針，10ml 試管，50ml 離心管， 離心管，冰浴，微量進(jìn)樣器及吸頭。 轉(zhuǎn)化，篩選：同實(shí)驗(yàn)二轉(zhuǎn)化，篩選步驟結(jié)果：通過(guò)篩選，得到了三種重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后的農(nóng)桿菌實(shí)驗(yàn)九：農(nóng)桿菌多次侵蝕藻類(lèi)：目的：利用農(nóng)桿菌的侵蝕能力，進(jìn)行侵蝕藻類(lèi)。目的：基因轉(zhuǎn)化到藻類(lèi)中， 需通過(guò)高科技方法檢測(cè)基因是否在藻類(lèi)中有效穩(wěn)定的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)十：培養(yǎng)藻類(lèi)目的：擴(kuò)增藻類(lèi)，以便檢查目的基因是否表達(dá)，得到目的產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)步驟1）. 挑取根癌農(nóng)桿菌LBA4404 單菌落于3ml 的YEB液體培養(yǎng)基（ 含Sm 125mg/l）中，28176。 轉(zhuǎn)化，篩選：同實(shí)驗(yàn)二轉(zhuǎn)化，篩選步驟。 將離心吸附柱置回廢液收集管中，最高速度離心1min，以棄凈W2。酶切體系：質(zhì)粒DNA內(nèi)切酶緩沖劑Xho內(nèi)切酶 Xba內(nèi)切酶 無(wú)菌水電泳檢測(cè)：同實(shí)驗(yàn)三電泳檢測(cè)步驟，回收純化：以北京優(yōu)博奧生物科技有限公司所生產(chǎn)的DNA凝膠回收試劑盒為例1）．2). 加入200μl新配制的溶液II，溫和顛倒5次，置冰上12 min。此組正常情況下在含抗生素的LB平板上應(yīng)沒(méi)有菌落出現(xiàn)?！ ?）、 棄去上清,冰上放置1530分鐘后,4℃下3000g離心10分鐘。 在此將此項(xiàng)目到目前為止所進(jìn)行的階段及工作做個(gè)總結(jié)。 制大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞：（一）、 受體菌的培養(yǎng) 從LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α單菌落,接種于35ml LB液體培養(yǎng)基中，37℃下振蕩培養(yǎng)12小時(shí)左右,直至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期。 3）、42℃水浴中熱擊90秒, 熱擊后迅速置于冰上冷卻35分鐘。4）恒溫?fù)u床，臺(tái)式離心機(jī)，制冰機(jī)，電泳裝置，紫外透射觀(guān)測(cè)儀。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的質(zhì)量。 4）.結(jié)果：通過(guò)電泳檢測(cè)并回收純化，得到了酶切完全的三種目的基因?qū)嶒?yàn)
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