【導讀】消毒劑有效期內能確保其消毒效力能符合要求。等表面以及操作人員雙手（手套）的消毒等。本次驗證方案將選用以上7種消毒劑分別進行驗證試驗。作用對象一樣的消毒劑每月輪換使用，避免表面微生物產生耐藥菌株。的不少于5分鐘。175%乙醇用于設備表面、器具和手消毒。采用擦拭或噴灑方式密閉保存C級：7天D級：30天

　　

【正文】 效期。 范圍 SCOPE 本驗證需要 驗證的消毒劑有： Process LpHse: (酸性 )、 Process VespheneⅡ se:(堿性 )、Ethanol 酒精溶液、快活溶液 FORWARD disinfectant 四種 。 表 1：各消毒劑使用時涉及的材質 消毒劑 類型 適用對象 所涉及的材質 Process LpHse: 酸性 酚類消毒劑（廣譜、中效） 生產設備 /器具 /車間地面、墻壁、天花板 不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面 Process VespheneⅡ se:堿性 酚類消 毒劑（廣譜、中效） 車間設備 /器具 /操作間地漏 不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面 Ethanol 酒精溶液 醇類消毒劑（中效） 生產設備 /器具 /微生物實驗室 不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面 快活溶液 季銨鹽類消毒劑（低效） 車間地面、墻壁、天花板 /非控制區(qū)域、車間公用區(qū) 不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面 引言 INTRODUCTION 本驗證的原理是，在某種材質表面接種 (104105CFU)的菌種，室溫下自然風干后，將消毒劑直接噴在材質表面，等消毒劑作用一段時間 后，檢驗沒有被殺滅的細菌數；根據細菌被殺滅的數量，來判斷消毒劑的殺菌效果 。 實際消毒操作時，消毒劑噴到要消毒物體表面后，再 通過人為的涂擦等操作使消毒劑與物體表面充分接觸，同時，此操作也會機械去除掉一部分微生物。在該驗證中，消毒劑是噴到材質表面，這種方法要比實際消毒時的效果差，因此驗證的結果更能體現實際的消毒效果。 參考資料 REFENRENCE Disinfectant Effectiveness Study（ 812Analytical ） SOPTS35(V5) 驗證方 法 TEST METHOD . 所用儀器和物料 ? 所用培養(yǎng)皿、移液管、容器均在 121 度下滅菌 30 分鐘后使用 ? 無菌一次性培養(yǎng)皿，移液管。 ? 生物安全柜 (BHC1300Ⅱ A/B3 生物安全柜 )工作窗口吸入風速為≥ ? 滅菌鍋 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 20 / 23 ? 培養(yǎng)箱（ 25 度和 32 度各一個） . 測試工作菌種 ? 大腸埃希菌（ CMCC(B)44102）菌種斜面 ? 金黃色葡萄球菌 （ CMCC(B)26003）菌種斜面 ? 白色念珠菌（ CMCC98001）菌種斜面 ? 環(huán)境菌種科氏葡萄球菌斜面（六、九、十月環(huán)境檢測沉降菌平板上連續(xù)檢出科氏葡萄球菌，特選此菌為環(huán)境菌種 ） 需驗證的消毒劑應質量合格并在有效期即將結束時開始驗證試驗，實驗所用的儀器設備均在校正合格期限內。 . 實驗程序 消毒劑的配置 ： 消毒劑按照相關的程序進行稀釋，配置好的消毒劑溶液儲存在實際操作時使用的噴壺中，在有效期內（ 7 天）每天模擬日常使用方法使用，第 8 天開始驗證試驗。消毒劑配置方法及消毒反應時間見表 2. 材質的準備 ： 所需的材質均是在實際操作中消毒劑所消毒的表面材質，準備的材質需為無菌材質，在實驗過程中，每個實驗組需 3 塊同種材質同時進行。 表 消毒劑 稀釋比例 反應時間 菌種 Process LpHse: 酸性 1:256(v/v) 3,5,10minutes 大腸埃希菌 金黃色葡萄球菌 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 Process VespheneⅡ se:堿性 1:128(v/v) 3,5,10minutes 大腸埃希菌 金黃色葡萄球菌 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 Ethanol 酒精溶液 75% 2,3,5minutes 大腸埃希菌 金黃色葡萄球菌 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 快活溶液 1:10(v/v) 3,5,10minutes 大腸埃希菌 金黃色葡萄球菌 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 21 / 23 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 22 / 23 菌懸液的制備 ： 取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌及環(huán)境菌種科氏葡萄球菌的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種至營養(yǎng)瓊脂斜面上，在 35 ~ 37℃培養(yǎng) 20 ~ 22 小時。再接種上述菌種的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，在 35 ~ 37℃培養(yǎng) 18 ~ 24 小時，上述營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物用 %無菌生理鹽水溶液逐級 10 倍稀釋，制成每 ml 含菌落數 104105CFU 的菌懸液 。 實驗操作 ： 準備 3 塊待測表面材質于生物安全柜內，分別吸取 ml(104105CFU)接種于 3塊待測表面材質上，讓其在生物安全柜中自然風干后待測，將配置好的的消毒裝入噴壺中，均勻地噴灑在材質的表面后立即開始計時， 按表 2 等 計時 結束后 ，迅速把該材質放入 100ml 的 D/E 中和液中，充分振蕩 1min 后經 微米的濾膜過濾，用 100ml/次的 D/E 中和液沖洗 3 次，取濾膜放在 D/E 中和瓊脂平板上培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌及 環(huán)境菌種科氏葡萄球菌在3035℃，至少 3 天，重復以上實驗操作 3 次 ，完成驗證實驗。 陰性控制實驗 ： 100ml 的 D/E 中和液經 的濾膜后，取濾膜放在 D/E 中和瓊脂平板上培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：細菌 3035℃，至少 3 天， 陽性控制實驗 ： 準備 3 塊無菌的待測表面材質于生物安全柜內，分別吸取 ml(10100CFU)陽性菌接種于 3 塊待測表面材質上，讓其在生物安全柜中自然風干后，將每種帶菌的材質放入 100ml 無菌的緩沖溶液中，充分振蕩 1min，經 微米的濾膜過濾，用100ml/次的 D/E 中和液沖洗 3 次，取濾膜放置于 D/E 中和瓊脂平板上培養(yǎng)。 培養(yǎng)條件：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌及環(huán)境菌種科氏葡萄球菌在3035℃，至少 3 天。 接受標準 . 消毒效力接受標準： 計算 Log Reduction，評價該種消毒劑對該菌種的殺滅效果， Log Reduction=Log(Averageof Organisms in Control Plates)Log(Average of Organisms in Test Plates) 接受標準： Log Reduction≥ 3 . 中和效力控制及其接受標準： 吸 5ml 已配制好的消毒劑，經 微米的濾膜 過濾后，用 100ml/次中和液沖洗 3次，加入 1ml 菌懸液（ 10100cfu）置濾膜上，用 100ml/次中和液沖洗 1 次，取濾膜放在 D/E 中和瓊脂平板上培養(yǎng)，計數。每種菌重復做 3 份樣品。分別取上述菌懸液 1ml（ 10100cfu）置 100*10mm 的無菌平皿，澆入約 20ml（≈ 45℃） TSA培養(yǎng)，計數。每種菌重復做 3 份樣品。 培養(yǎng)條件：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌和環(huán)境菌種科氏葡萄球菌3035℃，至少 3 天。 根據結果計算回收率： Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 23 / 23 Percent Recovery== %10 0 C on tr ol P os itiv e C FU M e a n S a m pl e C FU ? 接受標準： Percent Recovery≥ 70%