【正文】 分別取上述菌懸液 1ml（ 10100cfu）置 100*10mm 的無菌平皿，澆入約 20ml（≈ 45℃） TSA培養(yǎng)，計數。 表 消毒劑 稀釋比例 反應時間 菌種 Process LpHse: 酸性 1:256(v/v) 3,5,10minutes 大腸埃希菌 金黃色葡萄球菌 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 Process VespheneⅡ se:堿性 1:128(v/v) 3,5,10minutes 大腸埃希菌 金黃色葡萄球菌 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 Ethanol 酒精溶液 75% 2,3,5minutes 大腸埃希菌 金黃色葡萄球菌 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 快活溶液 1:10(v/v) 3,5,10minutes 大腸埃希菌 金黃色葡萄球菌 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 21 / 23 白色念珠菌 科氏葡萄球菌 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 22 / 23 菌懸液的制備 ： 取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌及環(huán)境菌種科氏葡萄球菌的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種至營養(yǎng)瓊脂斜面上，在 35 ~ 37℃培養(yǎng) 20 ~ 22 小時。 范圍 SCOPE 本驗證需要 驗證的消毒劑有： Process LpHse: (酸性 )、 Process VespheneⅡ se:(堿性 )、Ethanol 酒精溶液、快活溶液 FORWARD disinfectant 四種 。 . 試驗操作 . 配制 75%乙醇、 %新潔爾滅溶液、 %新潔爾滅溶液、 %醋酸洗必泰、 %醋酸洗必泰、 60mg/L的二氧化氯。 取樣地點：固體車間（ D 級）的制粒間一墻壁和設備表面、小容量注射劑車間 (C 級 )的配液間墻壁和設備表面、灌封間層流罩（ A 級）下設備表面。取 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號： BZW12085）； 取樣 白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（ 編號： BZW15129）。 . 試驗操作 . （ 1） 染菌不銹鋼載片制備 將經滅菌的載片平鋪于無菌平皿內，滴加金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌 含菌量為1108~5108CFU 的菌液 ，并均勻涂布于整個載體表面。 . 試驗組分別取中和劑管、 10 102 管溶液 1ml 按平皿法測定存活菌數；對照組取 10 1041ml 按平皿法測定存活菌數。 . 將試管按需要分組排列在試管架上，試驗組分 3 組（ 4min、 5min、 6min 各一組） ，并由左向右逐管標明消毒劑、中和劑、 10 102。 y 〉 (y+) . 中和劑鑒定試 驗記錄見附錄 2。取相應稀釋級 注皿，各稀釋級平行制備 2 皿。 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 9 / 23 后，用稀釋液進行 10 倍系列稀釋成 10 103。 . 分組操作 試驗分組及稀釋操作方法簡表 組號 混合液 A 混勻作用 混合液 B 混勻作用 取混合液 B 或混合液 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 8 / 23 具體操作 ? 第 1 組 目的 ： 觀察消毒液對試驗菌有無殺滅或抑制能力。計算該稀釋級的平均菌落數，將計數結果換算成每毫升濃菌液的菌落數。 兩種試驗方法作用的消毒劑見表。 1. 參考文件 . 藥品生產驗證指南 2020 版 . 微生物檢測驗證技術（中國醫(yī)藥科技出版社） 2. 概述 . 本公司的潔凈區(qū)分為 A 級、 C 級和 D 級，擬定用于潔凈區(qū)表面消毒的有七種消毒劑： 75%乙醇、 %新潔爾滅溶液、 %新潔爾滅溶液、 %醋酸洗必泰、 %醋酸洗必泰、 40mg/L 的二氧化氯、 60mg/L的二氧化氯。 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 1 / 23 1 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Tablet of Content Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 2 / 23 目錄 1. 目的和范圍 .............................................................................................................. 錯誤 !未定義書簽。本次驗證 方案將選用以上 7 種消毒劑分別進行驗證試驗。 序號 試驗方法 消毒劑 1 表面實驗法 75%乙醇 2 40mg/L 二氧化氯溶液 3 %新潔爾滅溶液 4 定量懸浮試驗法 %的新潔爾滅溶液 5 %新潔爾滅溶 液 6 60mg/L 二氧化氯溶液 7 %醋酸洗必泰溶液 8 %醋酸洗必泰溶液 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Page/頁碼： 5 / 23 現(xiàn)場考察試驗部分選擇固體車間（ D 級）的制粒一、小容量注射劑車間 (C 級 )的配液間、灌封間層流罩（ A 級）設備表面消毒前和消毒后分別進行取樣，測定其微生物數量。 . 白色念珠菌工作菌液的制備 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中， 23～ 28℃ 培養(yǎng) 24～ 48 小時。 操作： 取消毒劑 +工作菌液 ，混勻作用 10min 后，取混合液 +稀釋液 ，混勻作用 10min，取 注皿，平行制備 2 皿。取相應稀釋級 注皿，各稀釋級平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置 30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計數；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置 30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計數。 . 定量懸浮試驗 . 試驗目的 由于 %的新潔爾滅溶液、 %新潔爾滅溶液、 60mg/L 二氧化氯溶液、 %醋酸洗必泰溶液、 %醋酸洗必泰溶液是通過浸泡或液封消毒， 通過定量懸浮試驗，確定 其 消毒效力是否符合要求。對照組分 1 組，并由左向右逐管標明 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認驗證方案 Doc. No./編號： 2020244712045 Pa