水產(chǎn)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)-資料下載頁(yè)
2025-04-04 23:31本頁(yè)面
【正文】 :粒層卵泡細(xì)胞增殖增長(zhǎng)，同時(shí)卵泡膜的血管和結(jié)締組織侵入粒層，最終形成臨時(shí)性的腺體：黃體組織萎縮退化，并逐漸由結(jié)締組織代替，最后形成白色的瘢痕。四、作業(yè)：（一）繪鼠精巢中曲細(xì)精管復(fù)層管壁上各期精細(xì)胞詳圖，并注明各構(gòu)造名稱。（二）繪貓卵巢切片中初級(jí)卵泡，次級(jí)卵泡，成熟卵泡和閉銷卵泡詳圖，并注明各構(gòu)造名稱。實(shí)驗(yàn)八、組織切片的一般制作方法一、目的要求通過(guò)對(duì)材料的固定、脫水透明、浸蠟、包埋、切片、蘇木精伊紅（HE）染色等實(shí)驗(yàn)操作，了解石蠟切片的基本過(guò)程，掌握石蠟切片的制作方法。二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：1．用具小標(biāo)本瓶，鑷子，蠟杯，載玻片，毛筆，蠟鏟，刀片，量筒（10）毫升，酒精燈，小木塊，切片木框，切片盒，吸水紙，標(biāo)簽紙，切片刀，熔蠟箱，展片臺(tái)，染色缸等。2．器皿的清洗載玻片的清洗：切片所用的載玻片必須洗得很干凈，否則切片容易脫落。新的載玻片用洗液浸泡半天取出，用自來(lái)水沖洗后，用紗布擦干凈，放入盒內(nèi)備用。擦拭時(shí)應(yīng)捏住玻片兩端的邊緣操作，手指勿與玻片的表面接觸，以免手指上的脂肪沾污玻片。蓋玻片的擦洗：新的蓋片可放入95%酒精內(nèi)浸泡數(shù)十分鐘，或用洗液浸泡。注意蓋片要一片片投入，使蓋片的二面都接觸到液體，浸泡后，水沖洗干凈后再放入95%酒精中浸泡，然后用干凈白布擦拭。擦拭時(shí)應(yīng)注意，手指不能接觸玻面，應(yīng)以左手拇指和食指夾持蓋片，右持布趁酒精未干時(shí)，一一擦拭之。3．實(shí)驗(yàn)需用藥品及其配制50、%70%、80%、95%、100%的酒精，二甲苯， 中性樹膠，固定液， 石蠟。三、制作方法（一）取材：從人體或動(dòng)物身上取出所需要的器官材料。材料要求新鮮。材料大小一般在3335mm。（二）固定：將取出的材料立即投入固定液內(nèi)，目的是防止組織腐敗和自溶，使它保持原有的結(jié)構(gòu)。常用的固定液有10%福爾馬林，Bouin氏液等。固定時(shí)間需24小時(shí)左右。（三）石蠟包埋：1．脫水：從低濃度酒精逐漸遞升到高濃度酒精，即由50%、70%、80%、95%酒精各置12~24小時(shí)，因100%酒精有脆化組織作用，故放置時(shí)間不宜太長(zhǎng)，放2~3小時(shí)即可。然后放入二甲苯加酒精內(nèi)半小時(shí)。2． 放入二甲苯，直至標(biāo)本透明為止，時(shí)間約半小時(shí)。3．透蠟：將材料移置二甲苯加石蠟內(nèi)，放入60℃溫箱內(nèi)，時(shí)間約30分鐘，然后移入石蠟Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，使石蠟逐漸透入組織。每級(jí)時(shí)間約1小時(shí)內(nèi)。4．包埋：將溶解的石蠟倒入金屬框或紙盒內(nèi)，然后將浸蠟組織埋于金屬框中央，待冷卻后即成堅(jiān)硬的蠟塊。（四）切片：1．將標(biāo)本蠟塊裝在切片機(jī)上，切成5~7微米的薄片，然后把切片放在溫水皿中展開(kāi)。2．將展開(kāi)的組織切片移在載玻片上，放在40℃溫箱中24小時(shí)，烘干。切片時(shí)應(yīng)做到下列各點(diǎn)：1調(diào)整刻度指針到要求的厚度，一般要求5—8微米。切片刀要拭凈。2用右手搖切片機(jī)轉(zhuǎn)輪，左手持毛筆托住蠟帶。轉(zhuǎn)動(dòng)切片機(jī)時(shí)不可太快，用力宜均勻，不可時(shí)快時(shí)慢。防止機(jī)器震動(dòng)太厲害，以致切片厚薄不均勻。3用毛筆托住蠟帶，放在切片盒內(nèi)。切片時(shí)如出現(xiàn)各種問(wèn)題，應(yīng)找出原因加以解決，一般有以下幾種原因：1切片不能形成蠟帶：是室溫過(guò)低或石蠟過(guò)硬，蠟邊過(guò)小或不平所致，這時(shí)應(yīng)提高室溫，或在切片機(jī)旁點(diǎn)燃酒精燈。2蠟帶彎曲：蠟塊上下不平行，刀鈍，蠟塊不與刀刃平行，均可產(chǎn)生此現(xiàn)象。3蠟片卷起：刀口太鈍或不清潔，刀的角度過(guò)大或石蠟過(guò)硬，蠟片均會(huì)卷起。4蠟片易粘在切片刀上或蠟片皺縮：室溫過(guò)高或石蠟太軟所致，用冷水或冰塊冰一下即可。刀的角度過(guò)小，也能使切片皺縮。5蠟片厚薄不一：刀或蠟塊沒(méi)有固定牢，切片機(jī)磨損或發(fā)生故障。6蠟片出現(xiàn)裂隙或碎裂：組織浸蠟不足，或浸蠟溫度過(guò)高，或在透明劑中時(shí)間過(guò)久，組織已發(fā)脆。7蠟片出現(xiàn)縱裂口：刀有缺口或石蠟內(nèi)有硬物質(zhì)如鈣鹽物質(zhì)，或刀口不潔。8蠟塊底面成白色：由于刀口的角度過(guò)小，被刀碰撞的結(jié)果。（五）染色：1．脫蠟：將切片放入二甲苯內(nèi)5~10分鐘。2．脫二甲苯：依次置100%、95%、80%、70%酒精內(nèi)，各級(jí)5分鐘，然后移入蒸餾水。3．染蘇木精：用Harris氏蘇木精液染細(xì)胞核10分鐘，%鹽酸酒精分色，約30秒鐘，流水沖洗1小時(shí)以上。4．染伊紅：先把切片用50%、70%80%酒精各脫水5分鐘，%飽和酒精伊紅溶液1分鐘，染細(xì)胞質(zhì)。5．透明：95%、100%酒精，每級(jí)置10分鐘。（六）封固：切片上滴以中性樹膠，然后覆上蓋玻片，標(biāo)本即可長(zhǎng)期保存。四、染色結(jié)果細(xì)胞核被染成藍(lán)紫色，細(xì)胞質(zhì)被染成紅色。 15 / 15
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