微生物計(jì)數(shù)usp61中文版-資料下載頁(yè)
2025-04-04 23:26本頁(yè)面
【正文】 常為綠色 綠色 陽(yáng)性 陰性桿菌 假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基 檢測(cè)熒光生二氫熒光素 通常為五色或黃色 黃色 陽(yáng)性 陰性桿菌 假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基 檢測(cè)綠膿菌溶素 通常為綠色 藍(lán)色 陽(yáng)性 陰性桿菌 凝固酵素檢查（Coagulase Test）金黃色葡萄球菌 用接種環(huán)從 VogelJohnson （或 Baireparker、或 MannitolSalt）瓊脂培養(yǎng)基表面挑取典型的可疑菌落，每個(gè)菌落分別接種到單獨(dú)的試管，試管內(nèi)含有 兔或馬血漿，有或沒(méi)有任何附加（設(shè)施），37℃水浴，每 3 小時(shí)或其他適宜的時(shí)間間隔觀察一次生長(zhǎng)情況，直到 24 小時(shí)。陽(yáng)性和陰性對(duì)照同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。如果沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何程度的凝結(jié)，判斷樣品符合金黃色葡萄球菌檢查。 氧化酶和色素檢查（Oxidase and Pigment Tests）銅綠假單胞菌 用接種環(huán)從溴棕三甲銨瓊脂培養(yǎng)基表面挑取典型的可疑菌落接種到檢測(cè)熒光生二氫熒光素假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基和檢測(cè)綠膿菌溶素假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基表面，每個(gè)可疑菌落分別接種。若需要接種的菌落數(shù)太多，可對(duì)接種的平皿表面進(jìn)行分區(qū)，每個(gè)區(qū)域接種一個(gè)可疑菌落。然后將培養(yǎng)皿于35℃倒置培養(yǎng)不少于 3 天。用紫外光掃描菌落表面，觀察是否有表 3 所列的特征。 通過(guò)氧化酶檢查法確認(rèn)可疑的菌落是否是銅綠假單胞菌。在菌落培養(yǎng)物上/或?qū)⒕渑囵B(yǎng)物轉(zhuǎn)移到預(yù)先浸潤(rùn)了 N, Ndimethylp phenylenediamine dihydrochloride 的濾紙：如果沒(méi)有出現(xiàn)粉色變?yōu)樽仙?，證明樣品符合未檢出銅綠假單胞菌的要求。必要時(shí)還可以使用其他適宜的途徑和生化試驗(yàn)來(lái)檢定銅綠假單胞菌。 沙門氏菌屬和大腸埃希氏菌檢查法 （Test for Salmonella Species and Escherichia coli.） 將樣品放入適宜的容器，加入液體乳糖培養(yǎng)基至 100mL，培養(yǎng)。然后檢查培養(yǎng)基生長(zhǎng)情況，若發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)物，混合并輕柔振蕩培養(yǎng)液，用吸管分別吸取 1mL，各加入到 10mL 液體亞硒酸雙硫丙氨酸（胱氨酸）培養(yǎng)基和液體連四硫酸鹽培養(yǎng)基中，混勻培養(yǎng) 12~24 小時(shí)觀察結(jié)果。（同時(shí)需保留液體乳糖培養(yǎng)基殘余培養(yǎng)液。） 沙門氏菌屬檢查（Test for Salmonella Species） 用接種環(huán)從液體亞硒酸雙硫丙氨酸（胱氨酸）培養(yǎng)基和液體連四硫酸鹽培養(yǎng)基中挑取培養(yǎng)物，分別劃線接種到亮綠瓊脂培養(yǎng)基、戊醛糖賴氨酸脫氧胞啶瓊脂培養(yǎng)基和亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基表面。倒置培養(yǎng)，如果未發(fā)現(xiàn)表 4 所列出的特征菌落，判斷樣品符合未檢出沙門氏菌屬的要求。 表 4 沙門氏菌屬在選擇性瓊脂培養(yǎng)基上的微生物學(xué)特征 選擇性培養(yǎng)基菌落的微生物學(xué)特征亮綠瓊脂培養(yǎng)基細(xì)小，透明、無(wú)色或粉色到白色不透明（常有粉色或紅色環(huán)帶）戊醛糖賴氨酸脫氧胞啶瓊脂培養(yǎng)基 紅色,有或無(wú)黑色中心 亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基黑色或綠色,如果有表 4 所描述的菌落且經(jīng)革蘭氏染色呈陰性桿菌，則需要對(duì)可疑菌落進(jìn)行進(jìn)一步的檢測(cè)。用接種針穿刺接種培養(yǎng)物到三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試管斜面下，培養(yǎng)。如果沒(méi)有試管出現(xiàn)堿性（紅色）或酸性（黃色）端頭（有或沒(méi)有伴隨氫化硫黑色物質(zhì)），則判斷樣品符合未檢出沙門氏菌屬的要求。 大腸埃希氏菌檢查（Test for Escherichia coli） 用接種環(huán)從液體乳糖培養(yǎng)基殘余培養(yǎng)液挑取培養(yǎng)物接種到麥康凱（MacConkey）瓊脂培養(yǎng)基上。倒置培養(yǎng)。觀察結(jié)果，若未發(fā)現(xiàn)符合表 5 所列出的微生物學(xué)特征的菌落，則判斷樣品符合未檢出大腸埃希氏菌的要求。 表 5 大腸埃希氏菌在麥康凱（MacConkey）瓊脂培養(yǎng)基上的微生物學(xué)特征 革蘭氏染色 菌落的微生物學(xué)特征 陰性桿菌(球桿菌) 紅色塊狀物；可能有汁類沉淀環(huán)（surrounding zone of precipitated bile） 如果發(fā)現(xiàn)符合表 5 所描述的菌落，需要進(jìn)行進(jìn)一步試驗(yàn)。 將可疑菌落用接種環(huán)挑取接種到 Levine 曙紅亞甲基藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基平皿上，每個(gè)菌落接種一個(gè)平皿。若需要接種的菌落數(shù)太多，可對(duì)接種的平皿表面進(jìn)行分區(qū)，每個(gè)區(qū)域接種一個(gè)可疑菌落。倒置培養(yǎng)。如未發(fā)現(xiàn)有典型的金屬光澤反射并在脈沖光線下無(wú)藍(lán)黑色現(xiàn)象，則判斷該樣品符合未檢出大腸埃希氏菌的要求。大腸埃希氏菌的存在情況還可以使用進(jìn)一步適宜的途徑和生化試驗(yàn)來(lái)證明。 Total Combined Molds 和酵母菌總數(shù)檢查 (Total Combined Molds and Yeasts Count) 采用好氧微生物總數(shù)檢查法（Total Aerobic Microbial Count）下的平板法（Plate Method）進(jìn)行檢測(cè)。培養(yǎng)基需使用同樣體積的 Sabouraud 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基代替大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基，并且應(yīng)在 20~25℃培養(yǎng) 5~7 天。 復(fù)測(cè) (Retest) 若按之前的任一方法取 樣品進(jìn)行檢測(cè)得到的結(jié)果有可疑，應(yīng)另取 樣品進(jìn)行復(fù)測(cè)。 仍按“操作步驟（Procedure）”的方法進(jìn)行操作，但應(yīng)根據(jù)加大后的樣品量進(jìn)行相應(yīng)放大。
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