【正文】 9gL還是1lgL并不重要，因?yàn)楸粶y樣品和校正樣品的進(jìn)樣體積保持一致，在計(jì)算結(jié)果時(shí)誤差都被抵消了。 進(jìn)樣樣品要求無微粒和能阻死針頭及進(jìn)樣閥的物質(zhì)，樣品溶液均要用0．45~tm的濾膜過濾。防止微粒阻塞進(jìn)樣閥和減少對進(jìn)樣閥的磨損。為防止緩沖鹽和其它殘留物質(zhì)留在進(jìn)樣系統(tǒng)中，每次結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣器，通常用不含鹽的稀釋劑、水或不含鹽的流動相沖洗，在進(jìn)樣閥的Load和Inject位置反復(fù)沖洗，再用無纖維紙擦凈注射器針頭的外側(cè)。 科曉儀器精誠服務(wù) 聯(lián)系電話：053188032362 88034128 技術(shù)服務(wù)中心: 053188039532809 科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料 高效液相色譜常見故障的斷定及解決 (一)保留時(shí)間變化 柱恒溫，必要時(shí)需配置恒溫箱 至少用10倍柱體積的流動相平衡柱 用25mmol/L的緩沖液 每天沖洗柱 穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動相 采用保護(hù)柱 (二)保留時(shí)間縮短 檢查泵,重新設(shè)定流速 降低樣品量 流動相PH值保持在3~ 防止流動相蒸發(fā)或沉淀 柱恒溫 (三)保留時(shí)間延長 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡 用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱 同前(二)3 同前(二)4 同前(二)5 (四) 出現(xiàn)肩峰或分叉 用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% 采用較弱的樣品溶劑 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件 更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品 更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子 (五)鬼峰 每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗 處理樣品 重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜) (TFA)氧化(肽譜) 每天新配,用抗氧化劑 (反相) 通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水 科曉儀器精誠服務(wù) 聯(lián)系電話：053188032362 88034128 技術(shù)服務(wù)中心: 053188039532809 科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料 (六) 基線噪聲 (尖銳峰) 流動相脫氣,加柱后背壓 (隨機(jī)噪聲) 清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑 更換氘燈 (偶然噪聲) 采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等) 流動相脫氣,加柱后背壓 (七)峰拖尾 降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相 清潔樣品,調(diào)整流動相 加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品 連接點(diǎn)降至最低,對所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管 用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱 (八)峰展寬 同(四)1 進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散 設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn) 設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10% 增加柱溫,采用低粘度流動相 用小體積池,卸下熱交換器 等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫 將連接管徑和連接管長度降至最小 進(jìn)小濃度小體積樣品 科曉儀器精誠服務(wù) 聯(lián)系電話：053188032362 88034128 技術(shù)服務(wù)中心: 053188039532809 科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料 高效液相色譜儀的幾個使用問題1. 色譜柱中的流動相會排干嗎？ 不少做色譜分離試驗(yàn)的人遇到過這樣的情形：不慎未及時(shí)補(bǔ)充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實(shí)上，如果泵將溶劑瓶中的流動相吸干，并不會造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會將空氣排入色譜柱。因?yàn)楸弥荒茌斔鸵后w，而不能輸送空氣。相比之下，另一個更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長的時(shí)間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個小時(shí)或更多的時(shí)間被徹底浸潤，恢復(fù)到正常狀態(tài)。 2. 使用PEEK管路和接頭需要注意什么問題？ 如果經(jīng)常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱，使用PEEK材料制成的管路和接頭會非常方便。PEEK管路容易連接；PEEK接頭不僅無需工具，手?jǐn)Q即可固定，而且容易調(diào)節(jié)錐箍之外的管路長度，方便與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。 使用此類材料的管路需要注意的是：PEEK對鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象，但PEEK遇到上述溶劑會變脆。另一個西藥考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多數(shù)HPLC應(yīng)用系統(tǒng)壓力不會超過3000psi）。 使用PEEK接頭時(shí)則無需擔(dān)心接頭耐溶劑性能，因?yàn)榻宇^幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手?jǐn)Q固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管，因而壓力太高時(shí)，可能會使接頭在管路上滑動而產(chǎn)生死體積或漏液。 3. 如何預(yù)防液相泵的故障: 要保持泵的良好操作性能,必須維護(hù)系統(tǒng)的清潔,保證溶劑和試劑的質(zhì)量,: 1).用高質(zhì)量試劑和HPLC級溶劑； 2）、過濾流動相和溶劑； 3）、脫氣； 4）、每天開始使用時(shí)放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液； 5）、不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中； 6）、定期更換墊圈； 7）、需要時(shí)加潤滑油； 處于良好操作狀態(tài)的泵，應(yīng)該能使色譜圖上的基線平穩(wěn)；保留時(shí)間的重復(fù)性好。在等度洗脫時(shí)壓力波動小于2%。梯度洗脫時(shí)壓力變化應(yīng)是緩慢和平穩(wěn)的。 為了使故障發(fā)生后盡快排除，平時(shí)應(yīng)常備密封、單向閥（入口與出口）、泵頭裝置、各式接頭、保險(xiǎn)絲等部件，以及更換工具。 科曉儀器精誠服務(wù) 聯(lián)系電話：053188032362 88034128 技術(shù)服務(wù)中心: 053188039532809濟(jì)南汽車總站→K95路公交車至濟(jì)南留學(xué)人員創(chuàng)業(yè)園站下濟(jì)南火車城站→11路公交車至華陽路口站下往南走300米 杭州科曉化工儀器設(shè)備有限公司杭州科曉化工儀器設(shè)備有限公司濟(jì)南分公司 杭州科曉化工儀器設(shè)備有限公司蘇州分公司地址：濟(jì)南市華能路19號446室 地址：蘇州市學(xué)士街25號 胥門大廈306室電話：053188034128 88039532 電話：051265194398傳真：053188035501 傳真：051265194166 杭州科曉化工儀器設(shè)備有限公司安徽分公司 杭州科曉化工儀器設(shè)備有限公司廣東分公司地址：合肥市宿松路南園新村23幢110室 地址：廣州市先烈中路102號華盛大廈南塔電話：05513633520 電話：02037664004 37664024 傳真：05513639013 傳真：02037663473 杭州科曉化工儀器設(shè)備有限公司沈陽分公司 杭州科曉化工儀器設(shè)備有限公司（本部）地址：沈陽市和平區(qū)南京北街107號 地址：杭州市文三路199號電話：02422837877 22837577 電話：057156803999 傳真：02422833828 傳真：057188086641 科曉化工儀器設(shè)備有限公司技術(shù)服務(wù)中心 電話：057188830094 053188032362 23 /