[理學(xué)]進(jìn)展匯報(bào)范例-資料下載頁
2025-03-22 06:38本頁面
【正文】 AGCACAACAATCTAT AACGTAGTCAGCAGTCATTCTGTTGAAAAA amyA term_h_F amyA term_x_F amyA term _R Synthesis of amyA terminator fragment to be fused to hygR and xr gene CCGAGGGCAAAGGAATAAGGATCGATTCAT TTACCTCTCTTTGCTTAAGGATCGATTCAT TTATGTCAACCTGGA xr_F xr_R Synthesis of xr gene ORF fragment TTTTTCAACAGAATGACTGCTGACTACGTT ATGAATCGATCCTTAAGCAAAGAGAGGTAA hygR_F hygR_R Synthesis of hph gene ORF fragment TCTTTCTCTAGCATGAAAAAGCCTGAACT ATGAATCGATCCTTATTCCTTTGCCCTCGG xr_fu_F xr_fu_R Synthesis of PpgkxrTamyA fused gene AGCACAACAATCTATTTATACTGCC TTATGTCAACCTGGATACCATTCTT hygR_fu_F hygR_fu_R Synthesis of PamyAhygRTamyA fused gene with XbaI restriction site cgcggatccATTCCATGTCCACTTCAATCATAAA cgcggatccTTATGTCAACCTGGATACCATTCTT hygR_F hygR_R Verification of hygR gene integration ATGAAAAAGCCTGAACTCACCGCGACGT CTATTCCTTTGCCCTCGGACGAGTGCTG ? M M M 1 2 3 4 5 6 7 8 1000bp 1000bp 2022bp 2022bp lane1:amypro, lane2:hygroR, lane3:amyterm,lane4:aprohygroater fused fragment。 lane5:pgkpro, lane6:xr, lane7:amyterm, lane8:pgkproxrater fused fragment p B l u e s c r i p t S K +2 9 6 1 b pF 1 o r ib l ac o l E 1l a c ZB a m H IS m a IG e n o m i c D N A f r o m R . o r y z a eP C Rf us i on P C RB a m H I B a m H Ip g k p r o 5 5 7 b px r 1 1 2 3 b pf u s e d x r 2 0 3 7 b pa m y t e r m 3 5 7 b pG e n o m i c D N A f r o m R . o r y z a ea m y A p r o 8 9 9 b pB a m H Ia m y t e r m 3 5 7 b pB a m H Ih p h r 1 0 2 0 b pp B C h y g r o6 8 0 0 b ph p h rC m rc o l E 1l a c ZF 1 o r iP C Rf us i on P C Rf u s e d h p h r 2 2 7 6 b pB a m H I B a m H Ip B S h y g r o5237bpF1 o r ib l ac o l E 1l a c ZhphrB a m H IB a m H IS m a IS m a Ip B S h y g r o x r7274bpF 1 o r ib l ac o l E 1l a c ZhphrxrB a m H IB a m H IpBShygroxr載體構(gòu)建： 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化米根霉及轉(zhuǎn)化子篩選 ? 篩選條件研究：確定米根霉對(duì)于潮霉素在一定條件下的敏感性 ， 并依此決定篩選培養(yǎng)基組成 （ 既潮霉素濃度及篩選輔助劑的種類及濃度 ） 。 ? 轉(zhuǎn)化方法研究： PEG/CaCl2介導(dǎo)原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化 、 LiAc輔助的原生質(zhì)體電轉(zhuǎn)化 、 LiAc輔助的萌發(fā)孢子電轉(zhuǎn)化 ， 以及基因槍轉(zhuǎn)化法 。 ? 篩選：轉(zhuǎn)化處理的原生質(zhì)體或者孢子等經(jīng)過在無潮霉素的 PDA液體培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng) 35小時(shí)后涂布于含潮霉素的 PDA固體平板上 （ 原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化篩選用含1mol/L NaCl的高滲 PDA固體平板 ） ， 并于 32℃ 培養(yǎng)進(jìn)行篩選 。 轉(zhuǎn)化子米根霉鑒定 ? 初步 PCR鑒定：篩選出的與對(duì)照相比能夠更早長(zhǎng)出的菌落再次接種到篩選培養(yǎng)進(jìn)行確認(rèn)后，培養(yǎng)得到菌體并提取其基因組 DNA，以 hphR基因?yàn)槟康钠螒?yīng)用 hphR擴(kuò)增所對(duì)應(yīng)的特異引物對(duì)基因組 DNA進(jìn)行擴(kuò)增。 1 2 3 4 5 6 7 81000bp感謝批評(píng)指正 PS
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