研究生分子醫(yī)學(xué)實驗技能實驗二-資料下載頁
2025-02-21 14:15本頁面
【正文】 度計光源 高 低 有關(guān)光學(xué)原理 吸收光譜 在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液，光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失，這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的 吸收光譜 。 苯 和 甲苯 在環(huán)己烷中的吸收光譜 苯(254nm) 甲苯(262nm) A ? 230 250 270 入射光 透射光 反射光 被物質(zhì)吸收的光 光吸收基本定律 : LambertBeer定律 A=lg(I0/It)=kbc It I0 b dx I IdI s 朗伯定律 (1760) A=lg(I0/It)=k1b 比爾定律 (1852) A=lg(I0/It)=k2c 吸光度 介質(zhì)厚度 (cm) LambertBeer定律 A或 D＝ K C L 吸光度 摩爾消光系數(shù) 吸收物質(zhì)的光徑（ cm） 溶液濃度（ mol/L） 原理 核酸或核苷酸中的堿基共軛雙鍵 對 260nm紫外光有特異性吸收 ， 吸收強度與核酸濃度成正比 。 紫外光譜分析法 分光光度計法定量 DNA 1. 取 10?l樣品 DNA， 加入 DNA樣品做 1:400稀釋 。 2. ,在波長 260nm、 280nm、 310nm處調(diào)節(jié)紫外分光光度計讀數(shù)至零 。 3. 根據(jù) OD值計算 DNA濃度 （ ?g/ml） 雙鏈 DNA： [dsDNA]=50 （ OD260－ OD310) 稀釋倍數(shù) 1OD 雙鏈 DNA濃度約為 50?g/ml， 單鏈 DNA或 RNA為 50?g/ml。 5. DNA的純度鑒定 OD260/ OD280= （ RNA為 2 .0） 可能有 RNA污染 可能有蛋白質(zhì)污染
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