激光掃描共焦顯微鏡技術(shù)-資料下載頁
2025-01-21 23:10本頁面
【正文】 目前已商品化的探針可檢測：線粒體 、 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 、 細(xì)胞核內(nèi)的游離 Ca2+， 因生物發(fā)光很弱不能使用 Confocal檢測 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 細(xì)胞內(nèi)游離 Ca2+測量的應(yīng)用 ?鈣的特性 1． 細(xì)胞內(nèi)外的電化學(xué)梯度 103104倍 2． 細(xì)胞膜滲透性稍有改變或鈣庫釋放稍有增加 ， 導(dǎo)致 胞內(nèi)鈣明顯升高 3． 細(xì)胞內(nèi)鈣為細(xì)胞激活 “ 開關(guān) ” ?細(xì)胞內(nèi)鈣的生理作用 1． 肌肉的興奮收縮 收縮偶聯(lián) 2． 神經(jīng)遞質(zhì)的釋放 3． 學(xué)習(xí)記憶的增強 4． 卵子受精 5． 細(xì)胞分裂和再生 6． 細(xì)胞調(diào)亡 7． 細(xì)胞間通訊 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 8． 細(xì)胞信號傳導(dǎo) 9. DNA合成 10. 基因表達 ?細(xì)胞內(nèi)鈣超載與疾病 1． 高血壓 、 腦缺血 、 心臟病 、 內(nèi)分泌病 — 胞內(nèi)鈣濃度異常 2． 糖尿病 、 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 、 多發(fā)性硬化病 — 胞內(nèi)鈣濃度增高 3． 人體缺鈣 — 骨鈣大量丟失 ， 神經(jīng)細(xì)胞的鈣濃度增高 4． 老化和老年性癡呆 神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣濃度增高 細(xì)胞內(nèi)生理 Ca2+濃度值（ 108 107 M） 細(xì)胞內(nèi) Ca2+超載濃度值（基礎(chǔ) Ca2+濃度的 10倍左右） 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 電刺激引起骨骼肌 細(xì)胞的 Ca2+振蕩 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 ? pH值的檢測： BCECFAM 490nm 530nm Snarf1AM 488nm 580/640nm ?自由基的檢測 熒光探針： H2DCFDA（ 504nm/529nm） 2氫， 2氯熒光素乙酰乙酸鹽 胞外 H2DCFDA 擴散入細(xì)胞內(nèi) 酯酶脫乙酰 DCFH(不熒發(fā)光） DCF（發(fā)熒光 ） *樣品不能在鏡下用汞燈照射及觀察 Dihydrorhodamine 123（ 507nm/529nm） H2rhod123 被動擴散入細(xì)胞內(nèi) 在細(xì)胞內(nèi)被氧化成rod123（發(fā)光） 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 ? 藥物進入細(xì)胞的動態(tài)過程及定位分布 xyzt 掃描 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 四 . 膜電位的測量 標(biāo)記膜電位探針 (慢反應(yīng)）： JC1 510nm 530/590nm Dioc5(3) 548nm 573nm Dioc6(3) 484nm 500nm 快反應(yīng)探針： Di4ANEPPS 496nm 703nm Di4ANEPPS 498nm 713nm 細(xì)胞膜靜息膜電位： 70mV 線粒體膜電位： 150mV 以上均屬于陽離子探針，更容易與線粒體親和，為線粒體膜電位探針 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 七 ． 熒 光 能 量 共 振 轉(zhuǎn) 移 ( fluorescence Resonance Energy Transfer) 能量轉(zhuǎn)移：能量從分子的一個部位向另一個部位的傳遞 ，或能量從一個分子向另一個分子傳遞 。 能量的提供者叫能量供體 ， 能量的接受者叫能量受體 。 熒光能量共振轉(zhuǎn)移的 條件： ? 兩個熒光分子： 供體 FL1， 受體 FL2 ? 供體與受體的距離在 27nm ? 供體的 發(fā)射波長 與受體的 激發(fā)波長 一致 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 樣品要求 ： (單標(biāo)、雙標(biāo)、三標(biāo)） Confocal專用小培養(yǎng)皿或蓋玻片上 ，甩片或滴片后，用蓋玻片封片 激光掃描共焦顯微鏡應(yīng)用 激光掃描共焦顯微鏡的發(fā)展 趨勢 ： ? 連續(xù)光譜型 Confocal ? 多光子激光掃描顯微鏡 —— Multiphoton Laser Scanning Microscopy ? 雙 (多 )光子激光掃描顯微鏡的 優(yōu)勢 多光子激光掃描顯微鏡簡介 1. 多光子激光器波長從 7001000nm 連續(xù)可調(diào) 雙光子波長： 350500nm 連續(xù) 三光子波長： 230330nm 連續(xù) 應(yīng)用：可直接清晰活體觀察某些 非標(biāo)記 神經(jīng)遞質(zhì)的分 泌 (5HT) 或 NADPH的分布 例 4 長時間觀察活體阿爾茨海默病模型 小鼠 ?－ 淀粉蛋白形成的狀況
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1