動物克隆技術ppt課件-資料下載頁
2025-01-21 18:02本頁面
【正文】 增加 ， 但去核率 、 融合率和卵裂率均下降 。 76 卵母細胞及供體細胞的胞質(zhì)容量 ? 去核時所吸除的胞質(zhì)量與移入的供體細胞體積相似時有利于重組胚的發(fā)育 ,把供體細胞移入含有半量胞質(zhì)的受體中時 ,不能發(fā)育到囊胚 ,但將供體細胞的胞質(zhì)去除之后 ,則可獲得 10%的囊胚發(fā)育率 (Rorie等 ,1985)。 77 卵母細胞去核方案 ? TⅡ 期去核較 MⅡ 期去核所獲重組胚的囊胚率顯著升高 ,且質(zhì)量也更好 ,這可能與 TⅡ 期去核卵母細胞經(jīng)歷了激活和排出 PBⅡ 的選擇 ， 且所吸除胞質(zhì)量較少有關 (Ozil等 ,1982)。 但 TⅡ 期去核方案雖有利于 SUZI (透明帶下注射 Subzonal injection， SUZI)重組胚的發(fā)育 ,卻不利于 ICSI (卵子胞漿內(nèi)單精子注射 ， Intracytoplasmic sperm injection, ICSI)重組胚的發(fā)育 。 78 二、供體細胞對核移植效率的影響 細胞供體動物的年齡 ? 來自不同年齡及不同匯合程度的細胞 ,其細胞周期特征雖有實質(zhì)差異 ,但這些因素對核移胚的體外發(fā)育無影響 。 79 供體細胞的傳代次數(shù)、組織來源 ? 兔成纖維細胞的原代細胞較傳代細胞囊胚發(fā)育率低 ， 經(jīng)細胞周期分析 ， 傳 6~12代的細胞更易進入 G0、 G1期 ， 這與傳代細胞囊胚發(fā)育率高的結果相吻合 (Leibo,1988)。 ? 以傳至 2代與 18代克隆牛胎兒成纖維細胞作供體 ， 發(fā)現(xiàn)盡管囊胚發(fā)育率較低 ,但并無顯著差異 。 80 三、融合 激活方案 ? 目前采用的融合 激活方案有 3種 : ① 融合前激活，即在卵母細胞與供核體細胞融合前激活卵母細胞 。 ② 融合時激活，即在將供受體融合的同時激活卵 。 ③ 融合后激活，即在供受體融合后數(shù)小時再激活，可延長核在受體胞質(zhì)內(nèi)的時間，使重編程更徹底 (McKinnell,1962)。 81 四、核移植方案的影響 ? 目前常用的有 3種方案 : ① 單次核移植 ， 即將體細胞移入去核卵母細胞內(nèi)獲得重組胚； ② 二次核移植 ， 即以體細胞為供核體 ， 移入去核卵母細胞內(nèi)構成一級重組胚 ， 在一級重組胚發(fā)育到原核期時 ， 再將其原核移入到棄原核的受精卵內(nèi)構成二級重組胚 ， 這一方面避免了人工激活所帶來的不利影響 ， 另一方面延長了核質(zhì)相互作用 ， 利于重編程； 82 ③ 繼代再克隆 ， 即以體細胞克隆的卵裂球為供體核 ， 移入去核卵母細胞中 ， 從而延長了供體核在受體胞質(zhì)中的暴露時間 ， 使重編程更徹底 ， 并增加了核移胚后代的數(shù)量 (DiBeradino等 ， 1967)。 83 8 動物克隆技術的研究現(xiàn)狀 及發(fā)展方向 克隆技術概述 哺乳動物克隆的基本過程 動物克隆的影響因素 克隆技術存在的問題 核移植后核重編程研究進展 動物克隆技術的發(fā)展方向 84 克隆技術存在的問題 ?成功率很低問題 ? 目前公認的成功率在 1%~3%， 克隆胚胎移植后的出生率平均不到 10%(DiBeradino等 ，1971)。 因此 ， 要最大限度地利用動物克隆技術 ， 就要解決好成功率問題 。 85 ?部分個體生理或免疫缺陷問題 ? 目前大多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)體細胞克隆動物有半數(shù)多有嚴重缺陷或是畸形 ,包括心臟 、 肺臟等器官攜有罕見的缺陷 ,其中許多未出生就胎死腹中 ,或出生后不久突然死亡 (Gurdon,1962)。 86 ?受體細胞質(zhì)與供體細胞核周期相容性的問題 ? 當受體細胞與供體細胞處于細胞周期同一時間 ,核移植的成功率就大 。 克隆羊 ? dolly”之所以成功 ,關鍵在于 Willmut等找到了一種使供體細胞核和受體卵母細胞更相容的方法 ,供體細胞核在 DNA復制時間上與受體卵母細胞基本同步 (Gurdon等 ,1997)。 87 ?核移植產(chǎn)生的重構胚能否完成整個發(fā)育過程的問題 ? 解決問題的關鍵是移入的細胞核能否在受體細胞質(zhì)的作用下正確的重新編程 ,使重構胚成為全能性細胞 ,在適宜的環(huán)境條件下如正常胚胎那樣分裂 、 分化 、 發(fā)育形成個體 (DiBradino等 ,1984)。 88 ?供體線粒體的帶入問題 ? 在核移植過程中 ,供體核帶入一部分細胞質(zhì) ,于是 ,移核胚胎的線粒體就成為雜合型 ,既有供核細胞來的 ,也有受體細胞質(zhì)來的 ,因此 ,核移植的克隆動物實際上是一種遺傳嵌合體 。 為此 ,應亟待解決動物克隆中這一方面的問題 ,盡量減少或避免供體線粒體的帶入 。 89 小結 哺乳動物克隆的基本過程 1. 核供體動物的選擇與細胞核的獲得。 2. 核受體動物的選擇與細胞核的移出。 3. 核卵重組 4. 移核胚的活化 5. 胚泡的體外試管培養(yǎng) 6. 代母的選擇與胚泡移入子宮 7. 克隆動物的體內(nèi)發(fā)育與出生 90 小結 動物克隆的影響因素 1. 卵母細胞對核移植效率的影響 2. 供體細胞對核移植效率的影響 3. 融合 激活方案 4. 核移植方案的影響 91 小結 克隆技術存在的問題 1. 成功率很低問題 2. 部分個體生理或免疫缺陷問題 3. 受體細胞質(zhì)與供體細胞核周期相容性的問題 4. 核移植產(chǎn)生的重構胚能否完成整個發(fā)育過程的問題 5. 供體線粒體的帶入問題
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