江南大學微生物綜合-資料下載頁
2025-01-16 03:59本頁面
【正文】 力的突變菌株。必須在培養(yǎng)基中補加該物質(zhì)，否則不能生長。 C. glutamicum 高絲氨酸脫氫酶 aaaaaaaaaaaaaa (AK) ? 例： 高絲氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株 (Hser)條件解除（ Thr+Lys)對 AK的協(xié)同反饋抑制 Hser不能合成高絲氨酸，進而不能合成蘇氨酸和蛋氨酸，在補給 適量 的高絲氨酸（或蘇氨酸和蛋氨酸）的條件下，可大量積累賴氨酸。 ? Hser的篩選 野生型菌株 → 誘變 → CM培養(yǎng)基分離 → 挑選 Hser突變株 CM MM MM+Hser 野生型 + + + Hser + — + 應用滲漏突變株 (leakage mutant)解除反饋抑制 ? 例： 利用 Hserl解除（ Thr+Lys)對 AK的協(xié)同反饋抑制 ： Hserl細胞能合成 Hser，但合成的量僅能維持細胞的最低生長，胞內(nèi)的濃度達不到進行反饋調(diào)節(jié)的濃度。 ? 篩選： Hser → 誘變 → 挑選在 MM上生長緩慢而且菌落小的回復突變株 應用抗反饋調(diào)節(jié)突變株解除反饋調(diào)節(jié) （結構類似物抗性突變株） ? 抗反饋調(diào)節(jié)突變株：是指一種對反饋抑制不敏感或?qū)ψ瓒粲锌剐缘慕M成型突變株，或兼而有之的突變株。 ? 結構類似物 analog（抗代謝物 antimetabolite） 是一種與初級代謝產(chǎn)物結構類似但缺乏生理功能的化合物。 ? 例 1：黃色短桿菌 AHVr突變株可解除 Thr的反饋抑制而積累蘇氨酸 Brevibacterium flavum (AK) Threonine AHV aAminobhydroxyvaleric acid a氨基 b羥戊酸 突變前 突變后 抗反饋抑制突變的機制 抗反饋阻遏突變的機制 Lys AEC S(2Aminoethyl)LCysteine 例 2： 谷氨酸棒桿菌的 (Thr+AEC)r突變株可解除（ Thr+Lys)對 AK的協(xié)同反饋抑制而積累 Lys C. glutamicum 高絲氨酸脫氫酶 aaaaaaaaaaaaaa (Thr+AEC)r 抗結構類似物突變株 (Thr+AEC)r的篩選 ? 將誘變以后的菌懸液涂布在特定的基本培養(yǎng)基上（加入致死量的 AEC+Thr)，在此平板上長出的菌落即為 (Thr+AEC)r菌株。 ? 驗證長出的突變株是否真正解除的反饋調(diào)節(jié) 過量積累 Lys。 ? 其它可能出現(xiàn) AECr突變的情況 ?細胞膜對 AEC透性的改變 ?細胞內(nèi)出現(xiàn)分解 AEC的酶 篩選突變株中常用的幾種結構類似物 積累的物質(zhì) 結構類似物 Arg 刀豆氨酸 Phe 對 氟苯丙氨酸、噻恩基丙氨酸 Trp 5甲基色氨酸、 6甲基色氨酸 Val a氨基丁酸鹽 Ile Val Met a氨基 4乙硫基丁酸 腺嘌呤 2,6二氨基嘌呤 尿嘧啶 5氟尿嘌呤 關于結構類似物抗性突變株的篩選 ?測定致死濃度 ?用相應的氨基酸解除反饋作用 ?抗藥性逐漸提高效果好 應用營養(yǎng)缺陷型回復突變解除反饋抑制 ? 營養(yǎng)缺陷型的機制之一 ?酶的催化部位發(fā)生改變，失去催化活性 ?酶的催化部位和調(diào)節(jié)部位同時改變 ? 營養(yǎng)缺陷型回復突變株的機制 ?催化部位和調(diào)節(jié)部位同時發(fā)生回復突變 ?催化部位回復但調(diào)節(jié)部位沒有回復 野生型 營養(yǎng)缺陷型 回復突變 營養(yǎng)缺陷型回復突變解除反饋抑制 （二）提高細胞對目的產(chǎn)物的通透性 發(fā)酵工業(yè)上用的菌株對細胞透性的要求 ? 容許營養(yǎng)物質(zhì)進入細胞 ? 對中間產(chǎn)物的透性不大 ? 目的產(chǎn)物形成后可以盡快透過細胞膜進入環(huán)境 應用營養(yǎng)缺陷型突變株條件控制細胞膜的透性 代謝控制育種 例： C. glutamicum的谷氨酸發(fā)酵 ， 細胞膜對產(chǎn)物的通透性不好 ， 從而影響產(chǎn)物的分泌和積累 。 ? 生物素缺陷型突變株 （ VH ） ：添加 亞適量的生物素：減弱脂肪酸的合成 ， 提高膜的透性 ? 油酸缺陷型突變株： 限量 添加油酸可提高膜的對谷氨酸的透性 控制細胞壁的生物合成，提高細胞對目的產(chǎn)物的透性 代謝控制發(fā)酵 ? 例： 谷氨酸發(fā)酵中添加 亞致死量 的青霉素：部分抑制肽聚糖的合成，造成細胞壁的不完全合成，使細胞對谷氨酸的透性加大。 ?限量添加只對生長態(tài)細胞有效 如：生物素，油酸，青霉素等 （三）添加前體繞過調(diào)節(jié)點 代謝控制發(fā)酵 D A B C E F通過添加 C，可大量積累 D
環(huán)評公示相關推薦
鄂ICP備17016276號-1