【正文】 ， 確定內胚層 組織的細胞分化譜 ； 標記內胚層特異表達基因 并在成體組織中 確定基因表達的特異性 。 建立 lfabp:DenNTR 、ins:ChNTR 和 elastase:DenNTR 三個單轉基因系；建立 攜帶 SB 轉座子的轉基因斑馬魚 ；獲得 Tol2 增強子誘捕 品系的基因組插入位點 ， 確定候選基因 并完 成時空表達研究。 完成研究計劃；發(fā)表 3－ 5 篇SCI 學術論文，其中影響因子大于5 的 1－ 2 篇 ，影響因子大于 10 的 0－ 1 篇。 28 研究內容 預期目標 選基因 并研究其時空表達。 第 二 年 4－ 6 體節(jié)時期 斑馬魚預定的肝臟 和腸道 前體細胞 分選， 兩 者 之間及其分別與原腸中末期內胚層細胞 差異表達基因的芯片篩選 和表達模式研究； 芯片篩選所獲新基因 在 肝臟發(fā)育 中的表達和 表現(xiàn)型研究；通過基因芯片分析胚胎干細胞來源的肝臟前體細胞的基因表達特性； 肝細胞特異的組蛋白 H3 N端三甲基化酶的克隆，H3 N 端三甲基化在從胚胎干細胞到肝細胞分化過程中的表觀遺傳穩(wěn)定性及功能的系統(tǒng)研究；代表性表 觀遺傳位點在肝臟發(fā)育中的功能研究；克隆具有肝臟發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體的致變基因； NEMO/IKK?及 K63多 泛素化蛋白 在肝臟發(fā)育 中的 表現(xiàn)型 研究； Wnt 信號途徑及 KLP 調控肝臟發(fā)育的分子機理研究 。 4－ 6 體節(jié)時期 斑馬魚預定的 胰內、外分泌腺 前體細胞 分選， 兩 者 之間及其分別與非胰腺前體細胞和原腸中末期內胚層細胞 差異表達基因的芯片篩選 和表達模式研究； 決定 爪蟾 預定胰腺內胚層細胞 命運 的調控因子 發(fā)揮功能的分子機理 研究； Hex特異性地誘導腹側胰腺前體細胞增多的分子機理研究 ， 篩選 Hex 在染色質 DNA 上的 附著位點 ； 非洲爪蟾胰腺特 異性表達的新基因的功能 研 究；通過基因芯片技術分析胰腺前體細胞和胰內分泌細胞的特征性基因表達模式； 克隆具有 胰腺 發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體的致變基因 ； 確定 內胚層干細胞 /前體細胞表面標記 和內胚層組織的體外分化譜；利用基因芯片 確定 內胚層組織 干細胞 /前 體 細胞內特異基因表達 ； 建立體內細胞分化測定體系 ， 明確 內胚層組織的 細胞分化測定手段。 用內胚層特異性基因的原位雜交跟蹤從單 細胞到器官形成期的完成 肝臟 和腸道 前體細胞 之間及其分別與原腸中末期內胚層細胞 差異表達基因的芯片篩選 和表達模式研究；完成 肝臟發(fā)育不同時期差異表達的新基因 的表達和表現(xiàn)型研究；完成 干細胞來源的肝臟前體細胞的基因表達特性 篩選；完成 肝細胞 組蛋白 H3 N 端三甲基化 的表觀遺傳穩(wěn)定研究和特異三甲基化酶的克??；確定 代表性表觀遺傳位點在 斑馬魚 肝臟發(fā)育中的功能 ； 克隆具有肝臟發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體的致變基因 ；完成 NEMO/IKK?及K63 多 泛素化蛋白 在肝臟發(fā)育 中的表現(xiàn)型 研究 。 獲得胰內、外分泌腺 前體細胞 、非胰腺前體細胞、原腸中末期內胚層細胞的 差異表達基因 及其表達模式；初步闡明 爪蟾 胰腺細胞 命運決定 調控因子 發(fā)揮功能的分子機理 ；獲得 Hex 在染色質 DNA 上的附著位點 ；完成 非洲爪蟾胰腺特異性表達的新基因的 表現(xiàn)型 研 究；獲得 胰腺前體細胞和胰內分泌細胞的特征性基因表達模式； 克隆具有 胰腺 發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體的致變基因 ； 確定 內胚層 干細胞 /前體細胞表面標記 和內胚層組織的體外分化譜 ； 確定 內胚層組織 干細胞 /前 體 細胞內特異基因表達 ； 建立體內細 胞分化測定體系 ， 明確 內胚層組織的細胞分化測定手段 ；闡明從單 細胞到器官形成期的小鼠胚胎 中的內胚層發(fā)育過程。 獲得最佳的 Mtz 濃度和處理時間，闡明再生的細胞過程；獲得三轉基因系 pilGRenN 純合子；基本完成 SB 轉座子誘導的 卵子基因組的活體 誘 變及肝臟、 胰臟 、腸道發(fā)育突變體的篩選 ；完成 Tol2 增強 29 研究內容 預期目標 小鼠胚胎 中的內胚層發(fā)育過程。 對每個 NTR 轉基因系獲得最佳的 Mtz 濃度和處理時間，觀察再生的細胞過程；多次交配獲得 pilGRenN三轉基因 系純合子； SB 轉座子誘導的卵子基因組的活體 誘 變及肝臟、 胰臟 、腸道 發(fā)育突變體的篩選 ； Tol2 增強子誘捕 品系 的 候選基因功能及細胞內定位研究。 子誘捕 品系 的 候選基因表現(xiàn)型及細胞內定位研究。 完成研究計劃；發(fā)表 5－ 7 篇SCI 學術論文，其中影響因子大于5 的 3 篇 ，影響因子大于 10 的 0－ 1篇。 第 三 年 早期不同預定前體細胞差異表達基因的表現(xiàn)型研究 ；新功能基因調控肝臟發(fā)育的分子機理研究； 通過基因芯片分析尋找肝臟前體細胞的表面分子標記 ； 肝細胞 特異 性 組蛋白 H3 N 端 三甲基化酶在肝細胞形成與分化中的作用與分子 機理研究；代表性表觀遺傳位點附近基因的克隆及其在肝臟發(fā)育中的表達和表現(xiàn)型研究；導致肝臟發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體致變基因的確認、自主性及功能機制研究； NEMO/IKK?的泛素化水平及 在 不同發(fā)育時期肝臟 中 的變化； Wnt 信號途徑及 KLP 調控肝臟發(fā)育的分子機理研究 。 早期胰內外分泌腺預定前體細胞差異表達基因的表現(xiàn)型研究 ；爪蟾決定預定胰腺內胚層細胞 命運的 調控因子 發(fā)揮功能的分子機 理 研究； 胰腺特異性表 達的新基因的功能機制研究； 利用芯片篩選 Hex 調 控預定胰腺內胚層細胞發(fā)育的下游基因 ； 尋找胰腺前體細胞及內分泌前體細胞的表面標記； 導致 胰腺發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體致變基因的自主性及功能機制研究；內胚層特異表達基因發(fā)揮功能的分子機制研究；在小鼠中 確定體內分化 細胞 譜，比較體內外分化譜的異同 并 明確 內胚層組織的 細胞分化測定手段 ； 構建條件性基因打靶的ES 細胞 ， 體外分析 其 分化能力。 根據(jù)熒光篩選 具有肝臟或胰腺的發(fā)育缺陷的突變體 ； 利用 NTRMtz完成 不同預定前體細胞差異表達基因的表現(xiàn)型研究；研究 新功能基因調控肝臟發(fā)育的分子機理；獲得肝臟前體細胞的表面分子標記；闡述 肝細胞 特異 性 組蛋白 H3 N端 三甲基化酶在肝細胞形成與分化中的 功能；完成斑馬魚代表性表觀遺傳位點附近基因的克隆及表現(xiàn)型研究；完成具有肝臟發(fā)育缺陷突變體的致變基因確認及自主性研究；闡明 NEMO/IKK?的泛素化水平及在 不同發(fā)育時期肝臟 中 的變化；初步闡明 Wnt 及 KLP 調控肝臟發(fā)育的分子機 理 。 完成 早期胰內外分泌腺預定前體細胞差異表達基因的表現(xiàn)型研究 ； 闡明爪蟾 胰腺細胞 命運決定 調控因子 發(fā)揮功能的分子機理 ；初步闡明 胰腺特異性表達新基因的功能機制 ； 獲得 Hex 調 控預定胰腺內胚層細胞發(fā)育的下游基因 ；獲得 胰腺前體細胞及內分泌前體細胞的表面標記； 完成斑馬魚 突變體致變基因的自主性研究；在小鼠中 確定體內分化 細胞 譜，比較體內外分化譜的異同 并 明確 內胚層組織的 細胞分化測定手段 ； 構建條件性基因打靶的ES 細胞 。 以正向遺傳突變篩選獲得具有 肝臟或胰腺發(fā)育 或再生 缺陷的突變體 ； 完成研究計劃； 完成 SB 轉座子介導的 突變體的表現(xiàn)型 分析和保持系的建立 ；初步闡明 Tol2 增強 30 研究內容 預期目標 系統(tǒng)和熒光篩選具有肝臟或胰腺再生缺陷的突變體； SB 轉座子介導 的 突變體的表現(xiàn)型分析和保持系的建立 ；Tol2 增強子誘捕品系中 調控 胰腺發(fā)育 功能基因的 細胞自主 性及功能機制研究。 子誘捕品系中 調控 胰腺發(fā)育 功能基因的 細胞自主 性及功能機制研究。 完成研究計劃；發(fā)表 9－ 11篇 SCI 學術論文，其中影響因子大于 5 的 4 篇 、影響因子大于 10 的 1－ 2 篇；申請專利 1 個。 第 四 年 早期不同預定前體細胞差異表達基因的功能機制研究； 新功能基因調控肝臟發(fā)育的分子機理研究； 分析肝臟前體細胞向肝、膽兩個譜系分化的能力，并尋找調控向不同譜系分化的關鍵信號通路 ； 肝細胞 特異 性 組蛋白 H3 N 端 三甲基化酶在肝細胞形成與分化中的作用與分子 機理研究；代表性表觀遺傳位點附近基因調 控肝臟發(fā)育的分子機理研究；導致肝臟發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體致變基因的功能機制研究； K63 多 泛素化蛋白 及NEMO/IKK?的泛素化 調控肝臟發(fā)育的分子機理研究。 早期胰內外分泌腺預定前體細胞差異表達基因的功能機制研究；Hex 靶基因及其相互作用因子 介導Hex 對胰腺發(fā)育調控作用的分子機理研究； 爪蟾胚胎胰腺和肝臟的體外重建 研究； 尋找與 RA 協(xié)同誘導內胚層向胰腺前體細胞分化的因子，根據(jù)芯片結果和表面標志表達對胰腺內分泌前體細胞進行分群并對不同細胞群進行功能評價 ； 導致胰腺發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體致變基因的功能機制研究；內胚層特 異表達基因發(fā)揮功能的分子機制研究； 構建條件基因打靶小鼠 ， 利用 LacZ 和 GFP 標記內胚層早期 細胞 以跟蹤細胞 分化過程。 具有肝臟 和胰腺的發(fā)育和再生缺陷的突變體表現(xiàn)型分析和致變基因的克??； SB 轉座子介導 突變體 致變基因的功能機制研究； Tol2 增強子誘捕品系中 目標基因的功能機制研究。 初步闡明 早期不同預定前體細胞差異表達基因的功能及機制；初步闡明 新功能基因調控肝臟發(fā)育的分子機理研究；闡明 調控 肝臟前體細胞 向不同譜系分化的關鍵信號通路 ； 闡明 肝細胞 特異 性 組蛋白 H3 N 端 三甲基化酶 調控 肝細胞分化 的分子機制；初步闡明代表性表觀 遺傳位點附近基因調控肝臟發(fā)育的分子機理；闡明突變體致變基因調控肝臟發(fā)育的分子機理；初步闡明K63 多 泛素化蛋白 及 NEMO/IKK?的泛素化 調控肝臟發(fā)育的分子機理。 初步闡明胰內外分泌腺預定前體細胞差異表達基因的功能機制；闡明 Hex 調控胰腺發(fā)育的分子機理 ；建立 爪蟾胚胎胰腺和肝臟的體外重建 系統(tǒng)；獲得 與 RA 協(xié)同誘導內胚層向胰腺前體細胞分化的因子 ；完成 對胰腺內分泌前體細胞進行分群并對不同細胞群進行功能評價 ；闡明 斑馬魚突變體致變基因調控胰腺發(fā)育的功能機制；初步闡明內胚層特異表達基因發(fā)揮功能的分子機制；完成 條件基因打靶小 鼠 的構建。 完成 肝臟 和胰腺的發(fā)育和再生缺陷的突變體表現(xiàn)型分析和致變基因的克隆；初步闡明 SB 轉座子介導 突變體 致變基因的功能機制；闡明 Tol2 增強子誘捕品系中 目標基因的功能機制。 完成研究計劃；發(fā)表 11－ 13篇 SCI 學術論文，其中影響因子大于 5 的 3－ 5 篇 、影響因子大于 10 31 研究內容 預期目標 的 1－ 3 篇；申請專利 1－ 2 個。 第 五 年 早期不同預定前體細胞差異表達基因的功能機制研究； 新功能基因調控肝臟發(fā)育的分子機理研究； 總結胚胎干細胞向向肝細胞 的分化條件和 機制 ； 代表性表觀遺傳位點附近基因調控肝臟發(fā)育的分子機理研究；K63 多 泛素 化蛋白 及 NEMO/IKK?的泛素化 調控肝臟發(fā)育的分子機理研究。 早期不同預定前體細胞差異表達基因的功能機制研究； 在體外誘導爪蟾胚胎多能性前體細胞形成胰腺及真正成熟的胰島 β細胞的研究 ； 深入研究 RA 及其協(xié)同因子在促進向胰腺命運特化過程中的作用機制，總結胚胎干細胞向胰腺細胞的分化條件和分化機制 ；利用條件基因打靶小鼠分析內胚層分化發(fā)育的 分子機制。 具有肝臟 和胰腺的發(fā)育和再生缺陷突變體致變基因的功能機制研究； SB 轉座子介導 的 突變體 致變基因的功能機制研究。 闡明 早期不同預定前體細胞差異表達基因的功能機制；闡明 新功能基因 調控肝臟發(fā)育的分子機理；闡明 代表性表觀遺傳位點附近基因調控肝臟發(fā)育的分子機理；闡明 K63 多 泛素化蛋白 及NEMO/IKK?的泛素化 調控肝臟發(fā)育的分子機理。 闡明 早期預定前體細胞差異表達基因的功能機制；完成 在體外誘導爪蟾胚胎多能性前體細胞形成胰腺 的 研究；闡明 RA 及協(xié)同因子促進 胰腺 分化的分子機理；利用條件基因打靶小鼠 研究 內胚層發(fā)育的分子機制 。 初步闡明具有 肝臟 和胰腺的發(fā)育和再生缺陷的突變體致變基因的功能機制；闡明 SB 轉座子介導突變體 致變基因的功能機制。 完成研究計劃 ，總結研究數(shù)據(jù)和成果，為進一步的深入研究打下堅實 的基礎 ；發(fā)表 12－ 14 篇 SCI學術論文，其中影響因子大于 5 的4－ 6 篇 、影響因子大于 10 的 3 篇；申請專利 2－ 4 個。