【正文】 ， 確定內(nèi)胚層 組織的細(xì)胞分化譜 ； 標(biāo)記內(nèi)胚層特異表達(dá)基因 并在成體組織中 確定基因表達(dá)的特異性 。 建立 lfabp:DenNTR 、ins:ChNTR 和 elastase:DenNTR 三個單轉(zhuǎn)基因系；建立 攜帶 SB 轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)基因斑馬魚 ；獲得 Tol2 增強(qiáng)子誘捕 品系的基因組插入位點(diǎn) ， 確定候選基因 并完 成時空表達(dá)研究。 完成研究計劃；發(fā)表 3－ 5 篇SCI 學(xué)術(shù)論文，其中影響因子大于5 的 1－ 2 篇 ，影響因子大于 10 的 0－ 1 篇。 28 研究內(nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 選基因 并研究其時空表達(dá)。 第 二 年 4－ 6 體節(jié)時期 斑馬魚預(yù)定的肝臟 和腸道 前體細(xì)胞 分選， 兩 者 之間及其分別與原腸中末期內(nèi)胚層細(xì)胞 差異表達(dá)基因的芯片篩選 和表達(dá)模式研究； 芯片篩選所獲新基因 在 肝臟發(fā)育 中的表達(dá)和 表現(xiàn)型研究；通過基因芯片分析胚胎干細(xì)胞來源的肝臟前體細(xì)胞的基因表達(dá)特性； 肝細(xì)胞特異的組蛋白 H3 N端三甲基化酶的克隆，H3 N 端三甲基化在從胚胎干細(xì)胞到肝細(xì)胞分化過程中的表觀遺傳穩(wěn)定性及功能的系統(tǒng)研究；代表性表 觀遺傳位點(diǎn)在肝臟發(fā)育中的功能研究；克隆具有肝臟發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體的致變基因； NEMO/IKK?及 K63多 泛素化蛋白 在肝臟發(fā)育 中的 表現(xiàn)型 研究； Wnt 信號途徑及 KLP 調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理研究 。 4－ 6 體節(jié)時期 斑馬魚預(yù)定的 胰內(nèi)、外分泌腺 前體細(xì)胞 分選， 兩 者 之間及其分別與非胰腺前體細(xì)胞和原腸中末期內(nèi)胚層細(xì)胞 差異表達(dá)基因的芯片篩選 和表達(dá)模式研究； 決定 爪蟾 預(yù)定胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞 命運(yùn) 的調(diào)控因子 發(fā)揮功能的分子機(jī)理 研究； Hex特異性地誘導(dǎo)腹側(cè)胰腺前體細(xì)胞增多的分子機(jī)理研究 ， 篩選 Hex 在染色質(zhì) DNA 上的 附著位點(diǎn) ； 非洲爪蟾胰腺特 異性表達(dá)的新基因的功能 研 究；通過基因芯片技術(shù)分析胰腺前體細(xì)胞和胰內(nèi)分泌細(xì)胞的特征性基因表達(dá)模式； 克隆具有 胰腺 發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體的致變基因 ； 確定 內(nèi)胚層干細(xì)胞 /前體細(xì)胞表面標(biāo)記 和內(nèi)胚層組織的體外分化譜；利用基因芯片 確定 內(nèi)胚層組織 干細(xì)胞 /前 體 細(xì)胞內(nèi)特異基因表達(dá) ； 建立體內(nèi)細(xì)胞分化測定體系 ， 明確 內(nèi)胚層組織的 細(xì)胞分化測定手段。 用內(nèi)胚層特異性基因的原位雜交跟蹤從單 細(xì)胞到器官形成期的完成 肝臟 和腸道 前體細(xì)胞 之間及其分別與原腸中末期內(nèi)胚層細(xì)胞 差異表達(dá)基因的芯片篩選 和表達(dá)模式研究；完成 肝臟發(fā)育不同時期差異表達(dá)的新基因 的表達(dá)和表現(xiàn)型研究；完成 干細(xì)胞來源的肝臟前體細(xì)胞的基因表達(dá)特性 篩選；完成 肝細(xì)胞 組蛋白 H3 N 端三甲基化 的表觀遺傳穩(wěn)定研究和特異三甲基化酶的克?。淮_定 代表性表觀遺傳位點(diǎn)在 斑馬魚 肝臟發(fā)育中的功能 ； 克隆具有肝臟發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體的致變基因 ；完成 NEMO/IKK?及K63 多 泛素化蛋白 在肝臟發(fā)育 中的表現(xiàn)型 研究 。 獲得胰內(nèi)、外分泌腺 前體細(xì)胞 、非胰腺前體細(xì)胞、原腸中末期內(nèi)胚層細(xì)胞的 差異表達(dá)基因 及其表達(dá)模式；初步闡明 爪蟾 胰腺細(xì)胞 命運(yùn)決定 調(diào)控因子 發(fā)揮功能的分子機(jī)理 ；獲得 Hex 在染色質(zhì) DNA 上的附著位點(diǎn) ；完成 非洲爪蟾胰腺特異性表達(dá)的新基因的 表現(xiàn)型 研 究；獲得 胰腺前體細(xì)胞和胰內(nèi)分泌細(xì)胞的特征性基因表達(dá)模式； 克隆具有 胰腺 發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體的致變基因 ； 確定 內(nèi)胚層 干細(xì)胞 /前體細(xì)胞表面標(biāo)記 和內(nèi)胚層組織的體外分化譜 ； 確定 內(nèi)胚層組織 干細(xì)胞 /前 體 細(xì)胞內(nèi)特異基因表達(dá) ； 建立體內(nèi)細(xì) 胞分化測定體系 ， 明確 內(nèi)胚層組織的細(xì)胞分化測定手段 ；闡明從單 細(xì)胞到器官形成期的小鼠胚胎 中的內(nèi)胚層發(fā)育過程。 獲得最佳的 Mtz 濃度和處理時間，闡明再生的細(xì)胞過程；獲得三轉(zhuǎn)基因系 pilGRenN 純合子；基本完成 SB 轉(zhuǎn)座子誘導(dǎo)的 卵子基因組的活體 誘 變及肝臟、 胰臟 、腸道發(fā)育突變體的篩選 ；完成 Tol2 增強(qiáng) 29 研究內(nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 小鼠胚胎 中的內(nèi)胚層發(fā)育過程。 對每個 NTR 轉(zhuǎn)基因系獲得最佳的 Mtz 濃度和處理時間，觀察再生的細(xì)胞過程；多次交配獲得 pilGRenN三轉(zhuǎn)基因 系純合子； SB 轉(zhuǎn)座子誘導(dǎo)的卵子基因組的活體 誘 變及肝臟、 胰臟 、腸道 發(fā)育突變體的篩選 ； Tol2 增強(qiáng)子誘捕 品系 的 候選基因功能及細(xì)胞內(nèi)定位研究。 子誘捕 品系 的 候選基因表現(xiàn)型及細(xì)胞內(nèi)定位研究。 完成研究計劃；發(fā)表 5－ 7 篇SCI 學(xué)術(shù)論文，其中影響因子大于5 的 3 篇 ，影響因子大于 10 的 0－ 1篇。 第 三 年 早期不同預(yù)定前體細(xì)胞差異表達(dá)基因的表現(xiàn)型研究 ；新功能基因調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理研究； 通過基因芯片分析尋找肝臟前體細(xì)胞的表面分子標(biāo)記 ； 肝細(xì)胞 特異 性 組蛋白 H3 N 端 三甲基化酶在肝細(xì)胞形成與分化中的作用與分子 機(jī)理研究；代表性表觀遺傳位點(diǎn)附近基因的克隆及其在肝臟發(fā)育中的表達(dá)和表現(xiàn)型研究；導(dǎo)致肝臟發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體致變基因的確認(rèn)、自主性及功能機(jī)制研究； NEMO/IKK?的泛素化水平及 在 不同發(fā)育時期肝臟 中 的變化； Wnt 信號途徑及 KLP 調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理研究 。 早期胰內(nèi)外分泌腺預(yù)定前體細(xì)胞差異表達(dá)基因的表現(xiàn)型研究 ；爪蟾決定預(yù)定胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞 命運(yùn)的 調(diào)控因子 發(fā)揮功能的分子機(jī) 理 研究； 胰腺特異性表 達(dá)的新基因的功能機(jī)制研究； 利用芯片篩選 Hex 調(diào) 控預(yù)定胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞發(fā)育的下游基因 ； 尋找胰腺前體細(xì)胞及內(nèi)分泌前體細(xì)胞的表面標(biāo)記； 導(dǎo)致 胰腺發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體致變基因的自主性及功能機(jī)制研究；內(nèi)胚層特異表達(dá)基因發(fā)揮功能的分子機(jī)制研究；在小鼠中 確定體內(nèi)分化 細(xì)胞 譜，比較體內(nèi)外分化譜的異同 并 明確 內(nèi)胚層組織的 細(xì)胞分化測定手段 ； 構(gòu)建條件性基因打靶的ES 細(xì)胞 ， 體外分析 其 分化能力。 根據(jù)熒光篩選 具有肝臟或胰腺的發(fā)育缺陷的突變體 ； 利用 NTRMtz完成 不同預(yù)定前體細(xì)胞差異表達(dá)基因的表現(xiàn)型研究；研究 新功能基因調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理；獲得肝臟前體細(xì)胞的表面分子標(biāo)記；闡述 肝細(xì)胞 特異 性 組蛋白 H3 N端 三甲基化酶在肝細(xì)胞形成與分化中的 功能；完成斑馬魚代表性表觀遺傳位點(diǎn)附近基因的克隆及表現(xiàn)型研究；完成具有肝臟發(fā)育缺陷突變體的致變基因確認(rèn)及自主性研究；闡明 NEMO/IKK?的泛素化水平及在 不同發(fā)育時期肝臟 中 的變化；初步闡明 Wnt 及 KLP 調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī) 理 。 完成 早期胰內(nèi)外分泌腺預(yù)定前體細(xì)胞差異表達(dá)基因的表現(xiàn)型研究 ； 闡明爪蟾 胰腺細(xì)胞 命運(yùn)決定 調(diào)控因子 發(fā)揮功能的分子機(jī)理 ；初步闡明 胰腺特異性表達(dá)新基因的功能機(jī)制 ； 獲得 Hex 調(diào) 控預(yù)定胰腺內(nèi)胚層細(xì)胞發(fā)育的下游基因 ；獲得 胰腺前體細(xì)胞及內(nèi)分泌前體細(xì)胞的表面標(biāo)記； 完成斑馬魚 突變體致變基因的自主性研究；在小鼠中 確定體內(nèi)分化 細(xì)胞 譜，比較體內(nèi)外分化譜的異同 并 明確 內(nèi)胚層組織的 細(xì)胞分化測定手段 ； 構(gòu)建條件性基因打靶的ES 細(xì)胞 。 以正向遺傳突變篩選獲得具有 肝臟或胰腺發(fā)育 或再生 缺陷的突變體 ； 完成研究計劃； 完成 SB 轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的 突變體的表現(xiàn)型 分析和保持系的建立 ；初步闡明 Tol2 增強(qiáng) 30 研究內(nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 系統(tǒng)和熒光篩選具有肝臟或胰腺再生缺陷的突變體； SB 轉(zhuǎn)座子介導(dǎo) 的 突變體的表現(xiàn)型分析和保持系的建立 ；Tol2 增強(qiáng)子誘捕品系中 調(diào)控 胰腺發(fā)育 功能基因的 細(xì)胞自主 性及功能機(jī)制研究。 子誘捕品系中 調(diào)控 胰腺發(fā)育 功能基因的 細(xì)胞自主 性及功能機(jī)制研究。 完成研究計劃；發(fā)表 9－ 11篇 SCI 學(xué)術(shù)論文，其中影響因子大于 5 的 4 篇 、影響因子大于 10 的 1－ 2 篇；申請專利 1 個。 第 四 年 早期不同預(yù)定前體細(xì)胞差異表達(dá)基因的功能機(jī)制研究； 新功能基因調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理研究； 分析肝臟前體細(xì)胞向肝、膽兩個譜系分化的能力，并尋找調(diào)控向不同譜系分化的關(guān)鍵信號通路 ； 肝細(xì)胞 特異 性 組蛋白 H3 N 端 三甲基化酶在肝細(xì)胞形成與分化中的作用與分子 機(jī)理研究；代表性表觀遺傳位點(diǎn)附近基因調(diào) 控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理研究；導(dǎo)致肝臟發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體致變基因的功能機(jī)制研究； K63 多 泛素化蛋白 及NEMO/IKK?的泛素化 調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理研究。 早期胰內(nèi)外分泌腺預(yù)定前體細(xì)胞差異表達(dá)基因的功能機(jī)制研究；Hex 靶基因及其相互作用因子 介導(dǎo)Hex 對胰腺發(fā)育調(diào)控作用的分子機(jī)理研究； 爪蟾胚胎胰腺和肝臟的體外重建 研究； 尋找與 RA 協(xié)同誘導(dǎo)內(nèi)胚層向胰腺前體細(xì)胞分化的因子，根據(jù)芯片結(jié)果和表面標(biāo)志表達(dá)對胰腺內(nèi)分泌前體細(xì)胞進(jìn)行分群并對不同細(xì)胞群進(jìn)行功能評價 ； 導(dǎo)致胰腺發(fā)育缺陷的斑馬魚突變體致變基因的功能機(jī)制研究；內(nèi)胚層特 異表達(dá)基因發(fā)揮功能的分子機(jī)制研究； 構(gòu)建條件基因打靶小鼠 ， 利用 LacZ 和 GFP 標(biāo)記內(nèi)胚層早期 細(xì)胞 以跟蹤細(xì)胞 分化過程。 具有肝臟 和胰腺的發(fā)育和再生缺陷的突變體表現(xiàn)型分析和致變基因的克??； SB 轉(zhuǎn)座子介導(dǎo) 突變體 致變基因的功能機(jī)制研究； Tol2 增強(qiáng)子誘捕品系中 目標(biāo)基因的功能機(jī)制研究。 初步闡明 早期不同預(yù)定前體細(xì)胞差異表達(dá)基因的功能及機(jī)制；初步闡明 新功能基因調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理研究；闡明 調(diào)控 肝臟前體細(xì)胞 向不同譜系分化的關(guān)鍵信號通路 ； 闡明 肝細(xì)胞 特異 性 組蛋白 H3 N 端 三甲基化酶 調(diào)控 肝細(xì)胞分化 的分子機(jī)制；初步闡明代表性表觀 遺傳位點(diǎn)附近基因調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理；闡明突變體致變基因調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理；初步闡明K63 多 泛素化蛋白 及 NEMO/IKK?的泛素化 調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理。 初步闡明胰內(nèi)外分泌腺預(yù)定前體細(xì)胞差異表達(dá)基因的功能機(jī)制；闡明 Hex 調(diào)控胰腺發(fā)育的分子機(jī)理 ；建立 爪蟾胚胎胰腺和肝臟的體外重建 系統(tǒng)；獲得 與 RA 協(xié)同誘導(dǎo)內(nèi)胚層向胰腺前體細(xì)胞分化的因子 ；完成 對胰腺內(nèi)分泌前體細(xì)胞進(jìn)行分群并對不同細(xì)胞群進(jìn)行功能評價 ；闡明 斑馬魚突變體致變基因調(diào)控胰腺發(fā)育的功能機(jī)制；初步闡明內(nèi)胚層特異表達(dá)基因發(fā)揮功能的分子機(jī)制；完成 條件基因打靶小 鼠 的構(gòu)建。 完成 肝臟 和胰腺的發(fā)育和再生缺陷的突變體表現(xiàn)型分析和致變基因的克??；初步闡明 SB 轉(zhuǎn)座子介導(dǎo) 突變體 致變基因的功能機(jī)制；闡明 Tol2 增強(qiáng)子誘捕品系中 目標(biāo)基因的功能機(jī)制。 完成研究計劃；發(fā)表 11－ 13篇 SCI 學(xué)術(shù)論文，其中影響因子大于 5 的 3－ 5 篇 、影響因子大于 10 31 研究內(nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 的 1－ 3 篇；申請專利 1－ 2 個。 第 五 年 早期不同預(yù)定前體細(xì)胞差異表達(dá)基因的功能機(jī)制研究； 新功能基因調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理研究； 總結(jié)胚胎干細(xì)胞向向肝細(xì)胞 的分化條件和 機(jī)制 ； 代表性表觀遺傳位點(diǎn)附近基因調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理研究；K63 多 泛素 化蛋白 及 NEMO/IKK?的泛素化 調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理研究。 早期不同預(yù)定前體細(xì)胞差異表達(dá)基因的功能機(jī)制研究； 在體外誘導(dǎo)爪蟾胚胎多能性前體細(xì)胞形成胰腺及真正成熟的胰島 β細(xì)胞的研究 ； 深入研究 RA 及其協(xié)同因子在促進(jìn)向胰腺命運(yùn)特化過程中的作用機(jī)制，總結(jié)胚胎干細(xì)胞向胰腺細(xì)胞的分化條件和分化機(jī)制 ；利用條件基因打靶小鼠分析內(nèi)胚層分化發(fā)育的 分子機(jī)制。 具有肝臟 和胰腺的發(fā)育和再生缺陷突變體致變基因的功能機(jī)制研究； SB 轉(zhuǎn)座子介導(dǎo) 的 突變體 致變基因的功能機(jī)制研究。 闡明 早期不同預(yù)定前體細(xì)胞差異表達(dá)基因的功能機(jī)制；闡明 新功能基因 調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理；闡明 代表性表觀遺傳位點(diǎn)附近基因調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理；闡明 K63 多 泛素化蛋白 及NEMO/IKK?的泛素化 調(diào)控肝臟發(fā)育的分子機(jī)理。 闡明 早期預(yù)定前體細(xì)胞差異表達(dá)基因的功能機(jī)制；完成 在體外誘導(dǎo)爪蟾胚胎多能性前體細(xì)胞形成胰腺 的 研究；闡明 RA 及協(xié)同因子促進(jìn) 胰腺 分化的分子機(jī)理；利用條件基因打靶小鼠 研究 內(nèi)胚層發(fā)育的分子機(jī)制 。 初步闡明具有 肝臟 和胰腺的發(fā)育和再生缺陷的突變體致變基因的功能機(jī)制；闡明 SB 轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)突變體 致變基因的功能機(jī)制。 完成研究計劃 ，總結(jié)研究數(shù)據(jù)和成果，為進(jìn)一步的深入研究打下堅實(shí) 的基礎(chǔ) ；發(fā)表 12－ 14 篇 SCI學(xué)術(shù)論文，其中影響因子大于 5 的4－ 6 篇 、影響因子大于 10 的 3 篇；申請專利 2－ 4 個。