新手上路westernblot問(wèn)題集合-資料下載頁(yè)
2025-01-15 09:10本頁(yè)面
【正文】 脫脂牛奶封閉1小時(shí)45分鐘后，進(jìn)行一抗孵育（1：200，建議起始濃度）過(guò)夜，二抗孵育5個(gè)半小時(shí)（1:2000），均在室溫下，DAB顯色，雖出現(xiàn)蛋白條帶，但較弱，且出現(xiàn)非特異性條帶。所用Marker可分離14116KD的蛋白，是否因?yàn)閙arker有問(wèn)題？一抗（多克隆抗體）、二抗的濃度及孵育的時(shí)間是否合適？封閉的時(shí)間是否太短？A10：1. marker有可能被降解，也有可能是上樣量太少。 2. 建議一抗4℃孵育過(guò)夜，稀釋比為1:100；如室溫孵育，兩小時(shí)即可。 3. 二抗室溫1小時(shí)，1:2000，或 4℃封閉過(guò)夜（室溫兩小時(shí)就夠），一抗室溫1小時(shí)，二抗室溫1小時(shí)，最好是一抗4℃過(guò)夜（或室溫2小時(shí)）1:200，二抗室溫1小時(shí)1:2000，換ECL法。 Westen blot是檢測(cè)蛋白中最常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，實(shí)驗(yàn)中所用試劑多且配制復(fù)雜，試驗(yàn)中試劑的選擇上，我遵從到貨及時(shí)，質(zhì)高價(jià)低的原則，所以我選擇的是SunShineBio生興生物，免去了我四處訂購(gòu)的煩惱。Westen blot相關(guān)試劑為生化即用型試劑，精準(zhǔn)配制，即到即用；[url]Westen blot相關(guān)試劑[/url]質(zhì)優(yōu)價(jià)低，原料品種齊全，規(guī)格多樣，提供了較優(yōu)的產(chǎn)品和服務(wù)。
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