細(xì)菌轉(zhuǎn)化ppt課件-資料下載頁
2025-01-15 07:35本頁面
【正文】 G存在的情況下 ， 菌落呈藍(lán)色 （ 質(zhì)粒自身環(huán)化 ） ；在外源基因插入后 LacZ基因的閱讀框架被破壞 ， 細(xì)菌內(nèi)無半乳糖苷酶活性存在 ， 菌落呈白色 （ 陽性克隆 ） 。 E. coli DH5α（ 或 JM105） 菌株 （ 感受態(tài) ） ， 轉(zhuǎn)化用的質(zhì)粒 ， 無菌 eppendorf管 材料 儀器 恒溫?fù)u床 ， 臺(tái)式高速離心機(jī) ， 恒溫水浴鍋 ， 電熱恒溫培養(yǎng)箱 ， 超凈工作臺(tái) ， 微量移液槍 試劑 LB固體和液體培養(yǎng)基 ， 氨卞青霉素 操作步驟 1. 從 70℃ 冰箱中取 100μl（或 50 μL）感受態(tài)細(xì)胞懸液 ,室溫下使其解凍 ,解凍后立即置冰上。 2. 加入 2 μl質(zhì)粒 DNA溶液 ,輕輕搖勻 ,冰上放置 30分鐘。 3. 42℃ 水浴中熱擊 90秒或 37℃ 水浴 5分鐘 ,熱擊后迅速置于冰上冷卻 35分鐘。 4. 向管中加入 1ml LB液體培養(yǎng)基 (不含抗生素 ),混勻后 37℃ 振蕩培養(yǎng) 1小時(shí) ,使細(xì)菌恢復(fù)正常生長狀態(tài) ,并表達(dá)質(zhì)粒編碼的抗生素抗性基因(Ampr )。 5. 將上述菌液搖勻后取 100μl 涂布于含 Amp的篩選平板上 ,正面向上放置半小時(shí) ,待菌液完全被培養(yǎng)基吸收后倒置培養(yǎng)皿 ,37℃ 培養(yǎng) 1624小時(shí)。
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