【正文】 uid medium)： 液體培養(yǎng)基不含任何凝固劑，菌體與培養(yǎng)基充分接觸，操作方便，常用于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)以及在實驗室進行微生物生理代謝等基本理論的研究工作?？梢罁?jù)培養(yǎng)后的濁度判斷微生物的生長程度 . ★ 4按制備后培養(yǎng)基外觀的物理狀態(tài)來分 按物理狀態(tài)不同劃分 固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基 在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成為固體狀態(tài)，瓊脂含量一般為 %% 瓊脂含量一般為 %% 不加任何 凝固劑 半固體培養(yǎng)基 固體培養(yǎng)基常用來進行微生物的分離、鑒定、活菌計數(shù)及菌種保藏 觀察微生物的運動特征、分類鑒定及噬菌體效價滴定 大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實驗室進行微生物的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用方面的研究 、利用、液化； ； ； ； ，粘著力強 理想凝固劑應(yīng)具備的條件 ① 選擇性培養(yǎng)基 (selective medium)： 是根據(jù)某種或某一類群微生物的特殊營養(yǎng)需要，或?qū)δ撤N化合物的敏感性不同而設(shè)計出來的一類培養(yǎng)基。利用這種培養(yǎng)基可用來將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來 . ②加富培養(yǎng)基 (enriched medium)： 在普通培養(yǎng)基中加入某些特殊的營養(yǎng)物，如血、血清、動、植物組織液或其他營養(yǎng)物質(zhì)（或生長因子）的一類營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。用來培養(yǎng)營養(yǎng)要求苛刻的微生物，或用以 富集（數(shù)量上占優(yōu)勢） 和分離某種微生物 . ③ 鑒別性培養(yǎng)基 (differential medium)： 用于鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基，在普通培養(yǎng)基中加入能與某種代謝產(chǎn)物發(fā)生反應(yīng)的指示劑或化學藥品，從而產(chǎn)生某種明顯的特征性變化，以區(qū)別不同的微生物，例： 伊紅美蘭乳糖培養(yǎng)基 （ Eosin Methylene Blue） ★ 5 按特殊用途劃分 按用途不同劃分 鑒別培養(yǎng)基 用來將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來的培養(yǎng)基 用于鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基 在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營養(yǎng)物質(zhì)制成的一類營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基 微生物產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物，與培養(yǎng)基中的特殊化學物質(zhì)發(fā)生特定的化學反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化 加富培養(yǎng)基 特殊營養(yǎng)物質(zhì)包括血液、血清、酵母浸膏、動植物組織液等 在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營養(yǎng)物質(zhì)或化學物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長，有利于所需微生物的生長 伊紅美蘭乳糖培養(yǎng)基 (Eosin Methylene blue) 蛋白胨 10g 乳糖 5g K2HPO4 2g 伊紅 Y 美蘭 水 1000ml pH= G+菌受抑制 G菌 能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸 不發(fā)酵乳糖不產(chǎn)酸，菌落無色透明 產(chǎn)酸力強，菌落呈紫綠色金屬光澤 產(chǎn)酸力弱，菌落棕色 Enterbacter Klebsiella Hafnia Sarrdia Proteus Salmonella Shigella 試樣 EMB在鑒別各種腸道桿菌中的作用： 常用的一些鑒別培養(yǎng)基 思考題： 答： （ 1）從苯含量較高的環(huán)境中采集土樣或水樣； （ 2）配制培養(yǎng)基，制備平板，一種僅以苯作為唯一碳源（ A），另一種不含任何碳源作為對照（ B）； （ 3）將樣品進行梯度稀釋，涂布 A平板； （ 4）將平板置于適當溫度條件下培養(yǎng)，觀察是否有菌落產(chǎn)生； 如果要從環(huán)境中分離得到能利用苯作為碳源和能源的微生物純培養(yǎng)物，你該如何設(shè)計實驗？ （ 5）將 A平板上的菌落編號并分別轉(zhuǎn)接至 B平板，置于相同溫度條件下培養(yǎng)（在 B平板上生長的菌落，是可利用空氣中 CO2的自養(yǎng)型微生物）； （ 6）挑取在 A平板上生長而不在 B平板上生長的菌落，在一個新的 A平板上劃線、培養(yǎng)，獲得單菌落，初步確定為可利用苯作為碳源和能源的微生物純培養(yǎng)物； （ 7）將初步確定的目標菌株轉(zhuǎn)接至以苯作為唯一碳源的液體培養(yǎng)基中進行搖瓶發(fā)酵實驗，利用相應(yīng)化學分析方法定量分析該菌株分解利用苯的情況。 答：不能。 因為，（ 1）不同微生物的營養(yǎng)需求、最適生長溫度等生長條件有差別，在同一平板上相同條件下的生長及生理狀況不同； （ 2）不同微生物所產(chǎn)蛋白酶的性質(zhì)（如最適催化反應(yīng)溫度、 pH、對底物酪素的降解能力等）不同； 某學生利用酪素培養(yǎng)基平板篩選產(chǎn)胞外蛋白酶細菌，在酪素培養(yǎng)基平板上發(fā)現(xiàn)有幾株菌的菌落周圍有蛋白水解圈，是否能僅憑蛋白水解圈與菌落直徑比大，就斷定該菌株產(chǎn)胞外蛋白酶的能力就大，而將其選擇為高產(chǎn)蛋白酶的菌種，為什么？ （ 3）該學生所采用的是一種定性及初步定量的方法，應(yīng)進一步針對獲得的幾株菌分別進行培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件優(yōu)化，并在分析這些菌株所產(chǎn)蛋白酶性質(zhì)的基礎(chǔ)上利用搖瓶發(fā)酵實驗確定蛋白酶高產(chǎn)菌株。 現(xiàn)擬從自然界中分離篩選出產(chǎn)蛋白酶的芽孢桿菌，請結(jié)合所學知識設(shè)計分離篩選的試驗方案。 答題要點： （ 1） 應(yīng)該到富含蛋白質(zhì)的地方采集含分離樣品。 （ 2） 根據(jù)該菌的耐熱特性可采用將含菌樣品加熱 80℃ 處理10min后，殺死不耐熱雜菌 , 濃縮芽孢桿菌。 （ 3） 可采用劃線分離、稀釋分離、刮棒連續(xù)涂布等純培養(yǎng)物分離方法。 （ 4）初步判斷所獲得純培養(yǎng)物為芽孢桿菌。 （ 5）可采用酪素鑒別培養(yǎng)基根據(jù)水解圈篩選產(chǎn)蛋白酶芽孢桿菌。 營養(yǎng)物質(zhì)能否進入細胞取決于三個方面的因素： ①營養(yǎng)物質(zhì)本身的性質(zhì)（相對分子量、質(zhì)量、溶解性、電負性等 ②微生物所處的環(huán)境（溫度、 PH等）； ③微生物細胞的透過屏障（原生質(zhì)膜、細胞壁、莢膜等）。 第三節(jié) 營養(yǎng)物質(zhì)進入細胞的方式 根據(jù)物質(zhì)運輸過程的特點 ， 可將物質(zhì)的運輸方式分為 自由擴散 促進擴散 主動運輸 基團轉(zhuǎn)移 原生質(zhì)膜是一種半透性膜，營養(yǎng)物質(zhì)通過原生質(zhì)膜上的小孔，由高濃度的胞外環(huán)境向低濃度的胞內(nèi)進行擴散。 特點 ①物質(zhì)在擴散過程中沒有發(fā)生任何反應(yīng)； ②不消耗能量；不能逆濃度運輸； ③運輸速率與膜內(nèi)外物質(zhì)的濃度差成正比 一、單純擴散 水是唯一可以通過擴散自由通過原生質(zhì)膜的分子，脂肪酸、乙醇、甘油、一些氣體（ O CO2） 及某些氨基酸在一定程度上也可通過自由擴散進出細胞。 特點 ①不消耗能量 ②參與運輸?shù)奈镔|(zhì)本身的分子結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化 ③不能進行逆濃度運輸 ④運輸速率與膜內(nèi)外物質(zhì)的濃度差成正比 ⑤需要載體參與 二、促進擴散 三 營養(yǎng)物通過與細胞膜上載體蛋白（也稱作透過酶 permease） 的可逆性結(jié)合來加快其傳遞速度 通過促進擴散進入細胞的營養(yǎng)物質(zhì)主要有氨基酸、單糖、維生素及無機鹽等。一般微生物通過專一的載體蛋白運輸相應(yīng)的物質(zhì)，但也有微生物對同一物質(zhì)的運輸由一種以上的載體蛋白來完成。 它的一個重要特點是物質(zhì)運輸過程中需要消耗能量和載體，而且可以進行逆濃度運輸 。 三、主動運輸 在代謝能的推動下，通過膜上特殊載體蛋白逆養(yǎng)料濃度梯度吸收營養(yǎng)物質(zhì)的過程 特點：物質(zhì)在主動運輸?shù)倪^程中 ? 需要消耗代謝能 ? 可以進行逆濃度運輸?shù)倪\輸方式 ? 需要載體蛋白參與 ? 被運輸?shù)奈镔|(zhì)在轉(zhuǎn)移的過程中不發(fā)生任何化學變化 不同的微生物在主動運輸過程中所需的能量的來源不同，好氧微生物中直接來自呼吸能，厭氧微生物主要來自化學能，光合微生物中則主要來自光能 。 主動運輸是微生物吸收營養(yǎng)物質(zhì)的主要方式。 基團轉(zhuǎn)位又稱為磷酸烯醇式丙酮酸 磷酸糖轉(zhuǎn)移酶運輸系統(tǒng)（ PTS）， PTS 通常由五種蛋白質(zhì)組成，包括酶 I、 酶 II（ 包括 a、 b、 c三 種亞基）和一種低相對分子量的熱穩(wěn)定蛋白質(zhì)（ HPr）。 基團移位是另一種類型的主動運輸，它與主動運輸方式的不同之處在于它有一個復(fù)雜的運輸系統(tǒng)來完成物質(zhì)的運輸，而物質(zhì)在運輸過程中發(fā)生化學變化。 PEPP + HPr → HPr p + 丙酮酸 P HPr +糖 → 糖 P +HPr 四、基團移位 基團轉(zhuǎn)移主要存在于厭氧型和兼性厭氧型細胞中，主要用于糖的運輸，脂肪酸、核苷、堿基等也可以通過這種方式運輸。 在酶 Ⅱ 的作用下 PHPr將磷酸轉(zhuǎn)移給糖 在酶 Ⅰ 的作用下 HPr被激活 基團移位特點： ?需消耗能量； ?可以逆濃度運輸； ?需載體蛋白； ?被運輸?shù)奈镔|(zhì)在轉(zhuǎn)移的過程中發(fā)生化學結(jié)構(gòu)變化。 四種運送營養(yǎng)方式的比較 比較項目 單純擴散 促進擴散 主動運輸 基團轉(zhuǎn)位 特異載體蛋白 運輸速度 物質(zhì)運輸方向 胞內(nèi)外濃度 運輸分子 能量消耗 運輸后物質(zhì)的結(jié)構(gòu) 無 慢 由濃至稀 相等 無特異性 不需要 不變 有 快 由濃至稀 相等 特異性 不需要 不變 有 快 由稀至濃 胞內(nèi)濃度高 特異性 需要 不變 有 快 由稀至濃 胞內(nèi)濃度高 特異性 需要 改變 ? 1）微生物由于個體微小一般都是以其群體形式進行研究或利用，這必然就要涉及到對微生物的培養(yǎng)。能否找到一種培養(yǎng)基，使所有的微生物都能良好地生長？為什么？ ? 2）試結(jié)合微生物學實驗課的內(nèi)容，談?wù)勗谶x擇、配制和使用培養(yǎng)基時應(yīng)注意哪些方面的內(nèi)容。你們在實驗中是如何做的？有何體會？ ? 3）試比較營養(yǎng)物質(zhì)進入微生物細胞的幾種方式的基本特點 練習題