工業(yè)生產(chǎn)常用的微生物工業(yè)生產(chǎn)常用的微生物從-資料下載頁
2025-01-13 22:28本頁面
【正文】 不同的誘變因子或復(fù)合誘變因子。 誘 變 劑 的 選 擇 菌懸液的制備 單細(xì)胞懸浮液： 106個(gè) /mL 孢子懸浮液： 108個(gè) /mL 誘變：預(yù)實(shí)驗(yàn)確定適宜的誘變條件 篩選：選擇合適的篩選方法 ? 隨機(jī)篩選方法： 菌種經(jīng)誘變處理后 ,進(jìn)行平板分離 ,隨機(jī)挑選單菌落 ,從中篩選高產(chǎn)菌株。為了提高篩選效率，發(fā)展了一些 快速篩選方法（包括搖瓶篩選法，瓊脂塊篩選法等），并歸納出篩選高產(chǎn)菌的培養(yǎng)基 選擇準(zhǔn)則 : 制備一系列含有各種類型營養(yǎng)成分（生長限制因素）培養(yǎng)基； 避免使用容易同化的碳源或氮源，（引起分解代謝物阻遏）； 加入緩沖液以減少 pH的變化； 確定含有所需的輔助因子。 。 生長因子產(chǎn)生菌（對(duì)應(yīng)于營養(yǎng)缺陷型）的篩選： 通過觀察分離菌能否促進(jìn)營養(yǎng)缺陷型 （ auxotroph） 的生長，便可檢出生長因子產(chǎn)生菌。 抗反饋突變株（抗結(jié)構(gòu)類似物）的篩選 ： 結(jié)構(gòu)類似物具有和 代謝產(chǎn)物 相似的反饋調(diào)節(jié)作用，但又不同于代謝物，不具有正常的生理功能，對(duì)細(xì)胞代謝又阻礙作用。 由于突破了原有的反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng)，這些突變株就可以產(chǎn)生大量的該種代謝物。 ? 理性化篩選 ? 高通量 篩選（ high throughput screening):將許多模型固定在各自不同的載體上，用機(jī)器人加樣，培養(yǎng)后用計(jì)算機(jī)記錄結(jié)果，并進(jìn)行分析，使篩選從繁重的勞動(dòng)中解脫出來，實(shí)現(xiàn)大規(guī)模篩選。 細(xì)胞模型： 觀察待測樣品對(duì)細(xì)胞的作用，只能反映藥物對(duì)細(xì)胞生長等過程的綜合作用，不能反映作用的途徑和靶點(diǎn)。包括各種正常細(xì)胞和病理細(xì)胞。 分子模型： 包括受體、酶，其特點(diǎn)是藥物作用的靶點(diǎn)明確 。 通過高通量篩選方法，可以發(fā)現(xiàn)效果好、臨床應(yīng)用價(jià)值高的創(chuàng)新藥物，治療疑難病癥。 ? 高通量 篩選 誘變育種的幾個(gè)概念 ? 形態(tài)突變型：指發(fā)生細(xì)胞形態(tài)變化或菌落形態(tài)變化的突變 型 ? 生化突變型：沒有形態(tài)效應(yīng)的突變型，如營養(yǎng)缺陷型 ? 致死突變型：生活力下降的突變型 ? 條件致死突變型：在某些條件下能成活，在另一些條件 下是致死的突變型 ? 營養(yǎng)缺陷型突變株：由于代謝障礙而成為必須添加某種物 質(zhì)才能生長的突變株 ? 溫度敏感性突變株：可在某一溫度下生長而在另一溫度下 不能生長的突變型 第四節(jié) 生產(chǎn)菌株的改良 雜交育種：兩個(gè)不同基因型的菌株通過結(jié)合或原生質(zhì)體融合使遺傳物質(zhì)重新組合，再從中分離和篩選出具有新性狀的菌株。 一、常規(guī)的雜交育種 :不須用脫壁酶處理，就能使細(xì)胞結(jié)合而發(fā)生遺傳物質(zhì)重新組合。 二、原生質(zhì)體融合：原生質(zhì)體的制備、原生質(zhì)體的融合、融合子的選擇、實(shí)用型菌株的篩選。 1. 標(biāo)記菌株的篩選：對(duì)兩親株要進(jìn)行標(biāo)記，以提高篩選率。 2. 原生質(zhì)體的制備：用相應(yīng)的酶脫去菌體的細(xì)胞壁，制得完整的原生質(zhì)體。 3. 原生質(zhì)體的融合與再生：兩原生質(zhì)體在促融因子的存在下，發(fā)生融合，重建細(xì)胞壁，形成新的細(xì)胞。 4. 融合子的選擇：在選擇培養(yǎng)基上，通過兩個(gè)親本的遺傳標(biāo)記互補(bǔ)而選擇融合子。 三、 DNA重組技術(shù) (分子生物學(xué) ) ? 目標(biāo) DNA片段的獲得 ? 與載體 DNA分子的連接 ? 重組 DNA分子引入宿主細(xì)胞 ? 重組體的選擇與鑒定 ? 外源基因的表達(dá)
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