[高等教育]細(xì)胞工程復(fù)習(xí)精品-資料下載頁
2025-01-11 00:54本頁面
【正文】 組織產(chǎn)生的愈傷組織就是獲得無病毒組織的基礎(chǔ) B 有些愈傷組織細(xì)胞病毒濃度較低，在愈傷組織快速分裂過程中，病 毒的復(fù)制能力弱 C 愈傷組織產(chǎn)生抗性變異細(xì)胞 ） 單細(xì)胞制備方法 （ 機(jī)械法 酶法（果膠酶） 愈傷組織誘導(dǎo)法 ） 細(xì)胞株保存方法 （ 繼代培養(yǎng)保存法 、 低溫保存法 、 冰箱保存 ） 細(xì)胞同步化培養(yǎng) （ 體積選擇法 、 冷處理法 、 饑餓法 、抑制法（有絲分裂抑制 ） 細(xì)胞懸浮系統(tǒng) （ 機(jī)械攪拌式 、 氣壓攪拌式培養(yǎng)體系 、 旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)體系 ） 原生質(zhì)體分離方法 （ 機(jī)械法（先使細(xì)胞壁分離在用刀切）、酶解法（纖維素酶，果膠酶） 原生質(zhì)體純化方法 （① 過濾離心法 ② 漂浮法 ③ 沉降法和漂浮法結(jié)合 ④ 界面法 ） 9 原生質(zhì)體活力測定 （ 染色法熒光素雙醋酸 鹽（ FDA）法能發(fā)熒光的為活性 ； 酚藏花紅染料法具有活性原生質(zhì)體不著色 ） 或細(xì)胞 細(xì)胞融合步驟 （ ① 兩原生質(zhì)體 相互靠近 ② 質(zhì)膜融合形成細(xì)胞橋 ③ 胞質(zhì)滲透 ④ 細(xì)胞核融合 ） 1 細(xì)胞融合方法 （ 生物法仙臺病毒 、 物理法電融合誘導(dǎo) 、 化學(xué)法 NaNo3 誘導(dǎo)融合高 ph 的高濃度 Ca2+離子的聚乙二醇誘導(dǎo)融合 ） 1 多倍體物種鑒定 （ 核體積測量（細(xì)胞核大小與染色體數(shù)目成比例） 、 染色體計(jì)數(shù)法 、 DNA含量測定 ） 1貼附型細(xì)胞【① 成纖維型細(xì)胞 （ 細(xì)胞大致成梭形或不規(guī)則形貼壁后成長梭形，胞質(zhì)外伸出 23 長短不同的突起細(xì)胞之間排列疏散 有較大的細(xì)胞間隙，起源于中胚層 ） ② 上皮型細(xì)胞： 扁平狀，形態(tài)較為規(guī)則，貼壁后呈三角形及不規(guī)則扁平的多角形，中央有扁圓形核生長時(shí)彼此緊密鏈接成單層細(xì)胞，起源于內(nèi)胚層和外胚層，例如皮膚的表皮細(xì)胞，消化管 ③ 游走型細(xì)胞 ：具有類似巨噬細(xì)胞的特性在支持物上分散生長，一般不連接成片、形成菌落 。細(xì)胞質(zhì)常伸去偽足和突起，細(xì)胞不穩(wěn)定，外形不規(guī)則且不斷變化。這種細(xì)胞形態(tài)主要是具有吞噬細(xì)胞的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞。例如：顆粒性白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞 ④ 多形型細(xì)胞 ：是一些形態(tài)上不規(guī)則的細(xì)胞，一般分胞體和胞突兩部分，胞突為細(xì)長形。胞體呈多角形但 沒有成纖維細(xì)胞那樣不規(guī)則；例如 神經(jīng)元，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞 】 1 非貼附型細(xì)胞（懸浮型）癌細(xì)胞 1細(xì)胞培養(yǎng)條件： ① 溫度 37 ② ③ 氣體 O2 CO2 ④ 培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基 無血清培養(yǎng)基 ⑤ 常用溶液：平衡鹽水（ BBS）由生理鹽水和葡萄糖制成 （維持滲透壓， BBS 中有酚酞指示劑） PH 調(diào)整液 NaHCO HEPES 氫離子緩沖劑 ⑥ 細(xì)胞消化液：胰蛋白酶溶液 —— 解離分散細(xì)胞、 EDTA 化學(xué)螯合劑，清除溶液中 Ca2+Mg2+、抗生素溶液防止污染 —— 青霉素，鏈霉素 ⑦ 甘油和二甲基亞砜 （ DMSO）是細(xì)胞冷凍防護(hù)劑。作用是結(jié)合細(xì)胞中的水分子，降溫時(shí) 減少細(xì)胞內(nèi)冰晶分子的形成，避免對細(xì)胞造成傷害 。 1 細(xì)胞冷凍過程 （ 1 取生長狀態(tài)好細(xì)胞消化制成細(xì)胞懸液 2 離心洗滌 3 加含 10%的 DMSO冷凍液 4 加入安瓶 5 熔封 670℃放置 23h7 移入液氮罐中 8 記錄 ） 1 動物細(xì)胞特點(diǎn) （ 1 無細(xì)胞壁 2 動物細(xì)胞倍增時(shí)間長，生長緩慢 3 培養(yǎng)過程需氧量少，對機(jī)械攪拌敏感 4 以聚集體形式存在 5 原代細(xì)胞一般繁殖 50 代左右退化死亡 ） 養(yǎng)） 1 細(xì)胞小規(guī)模培養(yǎng)方法 （① 懸滴培養(yǎng) ② 罐注小室培養(yǎng) ③ 培養(yǎng)瓶培養(yǎng) ④ 培養(yǎng)板培養(yǎng) ⑤ 轉(zhuǎn)管培 1 動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng) （① 懸浮培養(yǎng) ② 微載體培養(yǎng) ③ 中空纖維法 ） 單克隆抗體的生產(chǎn)途徑 （ 細(xì)胞融合 、 病毒轉(zhuǎn)化 ） 2 HAT 選擇培養(yǎng)基三種關(guān)鍵成分 （ 次黃嘌呤 H 氨基蝶呤 A 胸腺嘧啶核苷 T） 2 DNA 合成 2 條途徑 （ 合成途徑 糖，氨基酸 —— ⅠⅠ —— 核苷酸 —— DNA 可被 A 阻斷 ； 補(bǔ)救途徑 核苷酸及其前體 —— Ⅰ — 核苷酸 —— DNA T— TK— dNTP H— HGPPT— HMP） 23 單克隆抗體的制備 （ ① 體內(nèi)接種法 :血清法，腹水法 ② 體外培養(yǎng)法 ） 24 細(xì)胞核移植 （① 直接注射法 ② 透明帶下注射法 ） 25 重 組胚激活 （ 電激活 、 化學(xué)激活 ） 26 胚胎冷凍保存 （ 玻璃化冷凍胚胎 、 程序冷凍 ） 2 精子冷凍保存 【 常溫保存（ 1525）低溫保存（ 05）冷凍保存 79 ~196 卵細(xì)胞冷凍：玻璃化冷凍】 28 多倍體鑒定 【 ① 染色體計(jì)數(shù)和核型分析 ② 核仁數(shù)目的銀染測定 ③ 細(xì)胞核體積測量 4DNA 含量測定 】 2 轉(zhuǎn)基因方法 （ 電穿孔法 、 顯微注射法 、 裸露 DNA 直接注射法 、 基因槍介導(dǎo)的 DNA 轉(zhuǎn)移 、 胚胎干細(xì)胞方法 、 精子載體法 、 逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法 ） 如何鑒定干細(xì)胞 【 ① 體外分化實(shí)驗(yàn) ② 體內(nèi)分化實(shí)驗(yàn) ③ 嵌合體形成 ④ 核移植 】
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