昆蟲病毒ppt課件-資料下載頁
2025-01-08 05:01本頁面
【正文】 基因（ polh)的 強(qiáng)啟動子 及 晚期大量表達(dá) 的特性，Smith等首次建立了 AcMNPV/秋黏蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) ，表達(dá)了人 β干擾素。 ? 從此，以桿狀病毒作為載體，在昆蟲細(xì)胞或蟲體內(nèi)表達(dá)外源基因，形成了 BEVS 。 五、桿狀病毒 ?早期的 BEVS有很多不足，如： ? 重組率較低 ? 篩選困難 ? 操作周期長 ? 產(chǎn)物不易純化等 ?短短 20多年時間里，隨著桿狀病毒分子生物學(xué)研究的不斷深入，桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)迅速發(fā)展，不斷完善，已成為當(dāng)今基因工程領(lǐng)域四大表達(dá)系統(tǒng)之一，在研究 基因表達(dá)調(diào)控、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能分析 及各種 生物活性物質(zhì)的制備 等方面發(fā)揮著越來越重要的作用。 五、桿狀病毒 構(gòu) 成 ?通常 BEVS由 轉(zhuǎn)移載體 、 親本病毒 和 重組介質(zhì) 三部分組成，其技術(shù)路線分以下幾步： ?先將 外源片段 克隆到載體 質(zhì)粒 中，置于桿狀病毒啟動子控制 之下 ， 上下游 各有一段與親本病毒DNA相匹配的 側(cè)翼序列 （ flanking secquence)， 構(gòu)建成轉(zhuǎn)移載體 ； ?把轉(zhuǎn)移載體 和野生型病毒共轉(zhuǎn)染 入昆蟲細(xì)胞，通過 同源重組 將外源片段插入到病毒基因組，再以特定的篩選標(biāo)記和方法 獲得重組病毒 。 ?最后 空斑純化 重組病毒，擴(kuò)大培養(yǎng)，分離、純化所表達(dá)的外源蛋白。 五、桿狀病毒 優(yōu)勢 （與細(xì)菌、 酵母、 哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)相比）： ?多角體基因啟動子下的 超高表達(dá)效率 ； ?表達(dá)產(chǎn)物的翻譯后加工與高等生物相似，可 使蛋白產(chǎn)物保持天然結(jié)構(gòu)、生物活性和免疫活性 ； ?可 同時表達(dá)多個外源蛋白 ， 來源遍及動物、植物、細(xì)菌真菌和病毒； ?能 容納較大的外源基因 而不影響其本身的增殖； ?蛋白 產(chǎn)物易 從無血清的培養(yǎng)上清中 純化 ， 無 內(nèi)毒素污染； ?生物 安全性高 ，對植物和脊椎動物均無致病性，而且經(jīng)重組后的病毒因失去多角體保護(hù)而使其在自然界的生存能力很弱。 五、桿狀病毒 ? 了解昆蟲病毒的特點(diǎn)及其應(yīng)用 昆蟲病毒
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