【正文】 唯一碳源 高溫 （ 3）稀釋涂布平板法 平板劃線法 （ 4） pH調(diào)整 高壓蒸汽滅菌 無菌 在環(huán)境因素的作用下產(chǎn)生的， 1952年 Lederberg 夫婦利用大腸桿菌設(shè)計了一個影印培養(yǎng)法實驗。 影印培養(yǎng)法的實驗原理是：把長有數(shù)百個菌落的 細菌母種培養(yǎng)皿倒臵于包有一層滅菌絲絨布的木 質(zhì)圓柱體（直徑略小于培養(yǎng)皿平板）上，使其均 勻地沾滿來自母種培養(yǎng)皿平板上的菌落，然后通 過這一 “ 印章 ” 把母板上的菌落 “ 忠實地 ” 一一 接種到不同的其他培養(yǎng)基上。 下圖就是利用影印培養(yǎng)技術(shù)證明大腸桿菌產(chǎn)生抗鏈 霉素突變基因的實驗。具體方法是： ①首先把大量對鏈霉素敏感的大腸桿菌涂布在不含 鏈霉素的培養(yǎng)基的平板 1的表面，待其長出密集的 小菌落后，用影印法接種到不含鏈霉素的培養(yǎng)基平 板 2上，隨即再影印到含有鏈霉素的培養(yǎng)基平板 3 上。經(jīng)培養(yǎng)后，在平板 3上出現(xiàn)了個別抗鏈霉素的 菌落。 ② 對培養(yǎng)皿 2和 3進行比較，在平板 2上找到與平板 3 上那幾個抗性菌落的 “ 孿生兄弟 ” 。 ③把平板 2上與平板 3上菌落相應(yīng)的一個部位上的菌 落挑至不含鏈霉素的培養(yǎng)液 4中，經(jīng)培養(yǎng)后，再涂 布在平板 5上。 ④重復(fù)以上各步驟，最后在試管 12中獲得了較純的 抗性菌落。 根據(jù)以上材料回答下列問題： （ 1）若要僅獲得抗鏈霉素的大腸桿菌，則該如何 操作： 。 （ 2）大腸桿菌抗鏈霉素基因存在于細胞的 結(jié)構(gòu)上，在基因工程中，該結(jié)構(gòu)常作 。 （ 3） 3號、 7號、 11號培養(yǎng)皿中加入鏈霉素的作用 是 ， 3號培養(yǎng)皿中的菌落比 1號、 2號中 的菌落少很多，這說明了 。 （ 4）該實驗最關(guān)鍵的設(shè)計思路是 。 你認為該實驗設(shè)計的巧妙之處是 。 （ 5）你認為該實驗得到的結(jié)論是 。 解析 （ 1）若要獲得抗鏈霉素的大腸桿菌，用含 鏈霉素的選擇培養(yǎng)基進行培養(yǎng)即可。（ 2）細菌的 抗藥性基因一般存在于質(zhì)粒上，質(zhì)粒在基因工程中 常用作載體。（ 3）鏈霉素起選擇作用，大部分的 大腸桿菌被殺死，少數(shù)具有抗性的個體保留下來。 （ 4）實驗中最關(guān)鍵的設(shè)計思路是對照，即在含有 鏈霉素和不含鏈霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 答案 （ 1）將原始菌種涂布到含有鏈霉素的培養(yǎng) 基中進行選擇培養(yǎng)，生長出的菌落即為抗鏈霉素的 大腸桿菌 （ 2）質(zhì)粒 載體 （ 3）選擇作用 通過鏈霉素的選擇作用，具有抗 藥性的大腸桿菌保留下來，數(shù)量較少 （ 4）對照實驗 最終獲得的抗藥性細菌一直沒有 接觸鏈霉素 （ 5）微生物的抗藥性突變是自發(fā)產(chǎn)生的，而不是 在鏈霉素的作用下產(chǎn)生的 (菊花 )組織培養(yǎng)過程示意圖，請據(jù)圖 回答： (1)培養(yǎng)基①和培養(yǎng)基②分別為 和 ， 兩者最主要的區(qū)別是 。 (2)若該培養(yǎng)基是 MS固體培養(yǎng)基，則其基本組成 是 、 和有機成分。 (3)愈傷組織發(fā)芽的根本原因是 。 (4)菊花組織在接種到培養(yǎng)基之前需進行 處理，整個組織培養(yǎng)過程需在 操作。 (5)本實驗用人工合成的激素，而不用植物中存在 的天然激素的原因是 。 在菊花組織培養(yǎng)的實驗中使用的生長素是人工合成 的 ，使用的細胞分裂素是人工 合成的 。 解析 (1)菊花組織在培養(yǎng)基①中形成愈傷組織后 長出叢芽，因此①是發(fā)芽培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基②中生 根后形成試管苗，所以②是生根培養(yǎng)基，兩者最主 要的區(qū)別是發(fā)芽培養(yǎng)基中細胞分裂素含量大于生長 素的，而生根培養(yǎng)基中二者的含量則正好相反。 (2)MS固體培養(yǎng)基由大量元素、微量元素和有機成 分組成。 (3)愈傷組織發(fā)芽是再分化的過程，其根本原因是 基因的選擇性表達。 (4)菊花組織在接種到培養(yǎng)基之前必須先進行消毒 后方可進行培養(yǎng)，整個組織培養(yǎng)過程必須在無菌環(huán) 境中操作。 (5)人工合成的植物激素具有容易合成、原料廣 泛、效果穩(wěn)定的優(yōu)點，因此在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中被廣泛 應(yīng)用。 答案 (1)發(fā)芽培養(yǎng)基 生根培養(yǎng)基 發(fā)芽培養(yǎng)基 中細胞分裂素含量大于生長素的含量，生根培養(yǎng)基 中生長素含量大于細胞分裂素的含量 (2)大量元素 微量元素 (3)基因的選擇性表達 (4)消毒 無菌條件下 (5)人工合成的激素易合成、原料廣泛、效果穩(wěn)定 萘乙酸 芐基腺嘌呤 、培育無病 毒的植物。據(jù)圖甲、表乙回答問題： 離體的植物器 官、組織或細胞 圖甲 植物細胞培養(yǎng)過程 表乙：植物的花芽分別在含有不同比例的生長素 和細胞分裂素的培養(yǎng)基中的生長狀況 ① 愈傷組織 ② 叢狀苗 培養(yǎng) 植物體 (1)離體的植物器官、組織或細胞能夠被培養(yǎng)成新 的植物體的原因是 。 A組 B組 C組 D組 E組 生長素 0 3 ppm 3 ppm ppm 0 細胞分裂素 0 ppm ppm ppm ppm 花芽生 長狀況 仍是 組織 切塊 形成愈傷組織 愈傷組織分化出根 愈傷組 織分化 出嫩芽 稍生長 (2)用植物組織培養(yǎng)方法誘導(dǎo)離體的植物組織形成 具有生根發(fā)芽能力的叢狀苗結(jié)構(gòu)，若包上人造種 皮，制成人工種子，可能解決有些作物品種繁殖能 力差、結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問題。叢狀苗來源于 離體的植物體細胞，其形成過程中要經(jīng)過的生理變 化大體上是圖甲中［ ］ 和［ ］ 過程，在此過程中被培養(yǎng)的細胞始終受 的調(diào)節(jié)。 (3)應(yīng)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)莖尖或根尖組織可 獲得無病毒植株，其原因是 。 (4)從表乙的實驗結(jié)果可看出：生長素和細胞分裂 素是實驗中的兩種重要物質(zhì)。其中，新芽形成必需 的條件是 ；而在 培養(yǎng)形成完整新個體的過程中，對它們的調(diào)控關(guān)鍵 是 。 答案 (1)植物細胞的全能性 (2)① 脫分化 ② 再分化 植物激素 (3)植物的莖尖或根尖很少被病毒感染，甚至無病毒 (4)細胞分裂素的濃度大于生長素的濃度 適當(dāng)調(diào)控 好不同培養(yǎng)期的培養(yǎng)基中細胞分裂素與生長素的濃 度和它們的比例 返回