鎘重金屬對(duì)野生稻與栽培稻雜交選育后代種子萌發(fā)-資料下載頁(yè)
2025-01-07 05:25本頁(yè)面
【正文】 ACK為對(duì)照杯 (光照 )的光吸收值 。AE為樣品的光吸收值 。V為樣液總體積 ,V1為測(cè)定時(shí)樣品用量 ,W 為樣重 g. 過(guò)氧化物酶 (POD)活性的測(cè)定 【實(shí)驗(yàn)原理】 植物體內(nèi)的黃素氧化酶類(lèi)代謝產(chǎn)物常包含 H 2 0 2 ，如光呼吸中的乙醇酸 氧化酶、呼吸作用中 的葡萄糖氧化酶等。 H 2 0 2 的積累可導(dǎo)致破壞性的氧化作用。過(guò)氧化氫酶 (CAT)、過(guò)氧化物酶 (POD)是清除 H 2 0 2 的重要保護(hù)酶，能將 H 2 0 2 分解為 0 2 和 H 2 0, 從而使機(jī)體免受 H 2 0 2 的毒害作用。其活性與植物的抗逆性密切相關(guān)。 14 (CAT)催化如下反應(yīng)： 2 H 2 0 2 amp。rarr。2 H 2 0 + 0 2 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定 H 2 0 2 的減少量來(lái)測(cè)定 CAT的活性。 在 H 2 0 2 存在條件下，過(guò)氧化 物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化，生成茶褐色的 4鄰甲氧基苯酚?？捎梅止夤舛扔?jì)測(cè)生成物的含量來(lái)測(cè)定活性。 【試劑藥品 mol/l 的磷酸緩沖液 % H 2 0 2: 吸 30% H 2 0 2 加入 50ml % 愈創(chuàng)木酚 :秤 愈創(chuàng)木酚加入 100ml 【實(shí)驗(yàn)步驟】 酶液的制備 ，加入 5倍量的（ M/V） 的 PBS 冰浴研磨 15000r/min 離心 15min取部分上清液 經(jīng)適當(dāng)稀釋后用于酶活性測(cè)定。 2. CAT 活性的測(cè)定 在 3ml的反應(yīng)體系中，包括 % H 2 0 2 1ml, H 2 0 , 最后加入 液 啟動(dòng)反應(yīng)，測(cè)定波長(zhǎng) 240nm處的 OD 降低速度。將每分鐘 OD減少 1個(gè)活力單位。 3. POD 活性的測(cè)定 在 3ml的反應(yīng)體系中，包括 % H 2 0 2 1ml, .% 愈創(chuàng)木酚 ,PBS 1ml，最后加入 ，記錄 470nm處 OD增加速度。將每分鐘OD增加 1個(gè)活力單位。 4. 用考馬斯亮藍(lán) G250 法測(cè)定蛋白含量 . 15 【實(shí)驗(yàn)結(jié)果及計(jì)算】 CAT和 POD的酶活性以 U/mg 蛋白或 U/gFW 表示。
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